資料一核酸分離純化(已修改)
2025-05-29 01:59 本頁面
【正文】 核酸分離與純化 中晶生物 核酸在體內(nèi)的分部情況： DNA 真核生物：細胞核： 95％ 細胞器： 5％ RNA 細胞質(zhì)： 75％ 細胞核： 10％ 細胞器： 15％ rRNA： 8085％， tRNA和 mRNA： 1015% 概述： 核酸包括 DNA和 RNA, 與蛋白質(zhì)結(jié)合的狀態(tài)存在 結(jié)構(gòu)形式多樣： 真核生物：染色體 DNA：雙鏈線性分子 原核生物基因組 DNA、質(zhì)粒、真核細胞器：雙鏈環(huán)狀 病毒 DNA：雙鏈 /單鏈環(huán)狀、雙鏈 /單鏈線狀 RNA：多為單鏈線性分子 核酸分離純化的原則： ?保持其一級結(jié)構(gòu)的完整性 完整的一級結(jié)構(gòu)是研究核酸功能的最基本要求 ? 遺傳信息保存在一級結(jié)構(gòu)中 ? 一級結(jié)構(gòu)決定其高級結(jié)構(gòu) ? 一級結(jié)構(gòu)決定與其它生物大分子結(jié)合的方式 ?排除其它分子的污染 純化核酸樣品應(yīng)達到的三點要求： 無有機溶劑和過高濃度金屬離子的存在 二者對酶的活性有抑制作用 其它生物大分子的濃度應(yīng)該盡量低 蛋白質(zhì)、多糖、脂類：影響后續(xù)分子生物學實驗 去除其它核酸的污染 盡量減少 DNA中 RNA污染，反之亦然 排除異種生物的 DNA/RNA污染 實驗中應(yīng)注意的幾點問題： ?減少化學因素對核酸的降解 避免過酸或過堿，操作時 PH值多在 410之間 ?減少物理因素對核酸分子結(jié)構(gòu)的破壞 主要是機械剪切力和高溫 ?防止核酸的生物降解 尤其是 RNA抽提過程中防止 RNase對 RNA的降解 ?盡量減少操作步驟，縮短提取過程 減少各種負面因素對核酸的降解 細胞裂解 有機溶劑的萃取、去除蛋白質(zhì)及多糖 定量分析 核酸粗制品 凝膠電泳 柱吸附法 電透析法 去除凝膠等雜質(zhì) 純的核酸制品 核酸分離與純化 DNA分離 ? 基因組 DNA分離 ? 質(zhì)粒 DNA分離 ? 凝膠 DNA回收 ? PCR產(chǎn)物純化 核酸抽提與分離 RNA分離 ? 總 RNA分離 ? mRNA分離 一、基因組 DNA抽提 過柱離心系列 Gspin Genomic DNA Kit 動物細胞 /組織，血液，植物 /食品、細菌 EzWay Genomic DNA Kit, Multi 動物細胞 /組織，血液，植物 /食品、細菌、病毒、酵母 非過柱系列 GDEX Genomic DNA Extraction Kit 動物細胞 /組織，血液 Genomic DNA Purification Kit: 動物細胞 /組織，血液、植物、細菌 Gspin Genomic DNA Kit 分離示意圖 分離原理 高鹽濃度情況下，硅石與DNA結(jié)合 低鹽濃度情況下，硅石與DNA分離 簡要流程 ? 結(jié)合 ? 洗滌 ? 洗脫 樣本 數(shù)量（細胞） DNA產(chǎn)量 (ug) DNA純度 SNU1 (Human) 3 million 2535 SNU601(Human) 3 million 2535 B16(Mouse) 3 million 3040 HeLa Cells 3 million 2736 NB4
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