20xx年醫(yī)學專題—+參與dna復制有關的酶和蛋白質-文庫吧
2025-10-21 07:10 本頁面
【正文】 苷酸不一定每次都正確，錯誤的時機不少，有時甚至加上一個不與模板配對的核苷酸，當3ˊOH末端的堿基不與模板配對時聚合酶就無聚合活性，此時它具有的3ˊ→5ˊ外切酶活性可以切除這個不配對的核苷酸，這一堿基切除后，外切核酸酶活性終止，聚合酶活性恢復，如圖710所示。所以聚合酶的3ˊ→5ˊ外切酶活性也叫修補活性。,第十四頁，共五十二頁。,第十五頁，共五十二頁。,③ 5′→3′外切(w224。i qiē)酶活性： DNA聚合酶I具有5′→3′外切酶活性。 如圖711，其特點是： ▲ 只能在5ˊP末端一個接一個地切除核苷酸； ▲ 能連續(xù)地切除多個核苷酸； ▲ 只切除配對的5ˊP末端核苷酸，不切除不配對的單鏈5ˊP末端核苷酸； ▲ 既能切除脫氧核苷酸也能切除核苷酸； ▲ 對只具有5ˊP末端的切口也有活性〔由于在DNA復制過程中一般情況下只在RNA引物處才有缺口，因此5′→3′外切酶活性的主要功能是切除核糖核苷酸引物〕。,第十六頁，共五十二頁。,,,第十七頁，共五十二頁。,切口翻譯(nicktranslation) DNA聚合酶 I 的5ˊ→3ˊ外切酶活性和聚合活性同時(t243。ngsh237。)作用可以進行切口翻譯(nicktranslation)，用來制造放射性探針。 在反響物里參加同位素標記的脫氧單核苷酸，DNA聚合酶I 首先利用5ˊ→3ˊ外切酶活性，從切口處逐個切下DNA上的核苷酸，再利用3ˊOH末端聚合作用逐個將標記的核苷酸加上去(圖7—12)。,第十八頁，共五十二頁。,539。,339。,539。,339。,第十九頁，共五十二頁。,④ 內切酶活性： DNA聚合酶 I 也具有5ˊ→3ˊ 內切酶活性，如圖713所示。在兩個堿基之間切開產生一個具有5ˊP 末端的不配對堿基的片段。 很多實驗證明(zh232。ngm237。ng)DNA聚合酶 I 在大腸桿菌復制中不是主要的合成酶，而是在除去RNA引物和損傷修復中起重要作用。,第二十頁，共五十二頁。,不配對(p232。i du236。)的片段,內切酶活性,第二十一頁，共五十二頁。,〔2〕 大腸桿菌 DNA聚合酶 Ⅱ DNA聚合酶Ⅰ缺陷的突變株仍能生存，這說明DNApolⅠ不是DNA復制的主要(zhǔy224。o)聚合酶。人們開始尋找另外的DNA聚合酶，并于1970年發(fā)現(xiàn)了DNApolⅡ。 ① 從5′→3′方向合成DNA ② 具有3ˊ→5ˊ外切酶活性，但沒有5ˊ→3ˊ外切酶活性。 在體外的合成速率比體內的速率要低得多，帶有這個酶缺陷的大腸桿菌突變株染色體的復制各方面都正常，它在體內的功能可能和DNA聚合酶 I 類似。,第二十二頁，共五十二頁。,(3) 大腸桿菌DNA聚合酶Ⅲ ▼聚合酶Ⅲ是體內DNA復制所必需的酶 帶有DNA聚合酶 Ⅲ 的溫度敏感突變 (polc) 的大腸桿菌在限制溫度下是不能存活的，從這種菌株得到的裂解液也不能合成DNA，當參加正常細菌的DNA 聚合酶Ⅲ 時可以恢復它的聚合能力，因此不同于DNA聚合酶I和Ⅱ，聚合酶Ⅲ是體內DNA復制所必需的酶。 DNA多聚酶Ⅲ相當復雜(f249。z225。)，其結構和各亞基的功能如圖11－24，25所示。 DNA pol Ⅲ具有539。→339。聚合功能。,第二十三頁，共五十二頁。,DNA聚合酶 Ⅲ的 “核心酶〞由α、ε、θ三種亞基組成。 α亞基具有(j249。yǒu)合成DNA的能力。 ε亞基具有3‘→5’外切酶的功能，起到校正的作用。 θ亞基可能在組裝中發(fā)揮功能。,τ亞基
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