【正文】 or 1 A gene （ MTNR1A） was analysed to find the assocation with litter size in goat as a candidate gene. HinfⅠ RFLP （ Restriction Fragment Length polymorphism， RFLP） of MTNR1A was found in 65 Boer goats and 51 goats Ma Tou. No polymorphism was detected in Ma Tau goats . Two genotypes AA， GG were found in Boer goats. The frequency of AA genotype was higher than GG genotype， which were and ， respectively. The allele frequencies for A and G were and . The results of traits association analysis showed that individuals with AA genotype had additional average litter size at first kidding in Boer Goat. The additive effect value was ， while the dominant effects value . Moreover， AA genotype had additional average litter size for multiparity， the additive and dominant effects value were and ， respectively. Allele A was possiblely positively correlated with litter size in Boer goats. The additive effect was dominant at the site. Key words: Goat； Reproductive traits； MTNR1A； PCRRFLP 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)） 6 前 言 褪黑激素主要是由松果體合成的 ， 其它合成部位還有 :視網(wǎng)膜、眼眶腔的副淚腺、唾液腺、腸的嗜鉻細(xì)胞及紅細(xì)胞 ， 松果體把對外界光照形成的神經(jīng)信息經(jīng)下丘腦視交叉上核轉(zhuǎn)變成體液信息 — MEL。 、作用機(jī)制； 褪黑激素 對生殖系統(tǒng)作用的機(jī)理主要是通過光作用于視網(wǎng)膜 ， 然后通過視網(wǎng)膜 下視丘至視交叉上核 ， 再經(jīng)過一系列復(fù)雜的神經(jīng)交換至頸上神經(jīng)節(jié) ， 其節(jié)后交感神經(jīng)作用于松果體。松果體分泌褪黑激素 ， 通過下丘腦 — 垂體性腺軸影響生殖系統(tǒng)。褪黑激素對生殖系統(tǒng)的作用因動(dòng)物種類、生理狀態(tài)不同而表現(xiàn)出抑制、促進(jìn)或無作用的多重性 （ 焦傳珍 ， 20xx） 。多項(xiàng)研究結(jié)果表明，褪黑激素雖然對牛、鼠類、禽等動(dòng)物和人的生殖系統(tǒng)的發(fā)育有抑制作用，但是對綿羊、山羊、鹿等動(dòng)物則明顯表現(xiàn)出促進(jìn)作用。 2．褪黑激素受體類型、作用機(jī)制； 褪黑激素受體屬于 G 蛋白耦聯(lián)受體家族 。根據(jù)其分子生物學(xué)方法又可分為MTNR1A、 MTNR1B、 MTNR1C 三種亞型 （ 張凱 等， 20xx） 。 目前在哺乳動(dòng)物中還沒有發(fā)現(xiàn) MTNR1C 受體，而具有明顯季節(jié)性繁殖特征的動(dòng)物僅在垂體結(jié)節(jié)部發(fā)現(xiàn)MTNR1A受體，提示垂體結(jié)節(jié)部可能是褪黑激素繁殖效應(yīng)的作用位點(diǎn)。 3．褪黑激素受體分子標(biāo)記在其它動(dòng)物中的研究進(jìn)展 目前國內(nèi)外對綿羊 M TNR1A 基因已經(jīng)有所研究已經(jīng)很多了。 Messer 等（ 1997） 和 Notter 等 （ 20xx） 用 M n lⅠ 和 R saⅠ 酶分別對白面雜種羊、薩?？搜?、特克塞爾羊、柯泊華斯羊和合成系綿 羊群體 M TNR1A 基因外顯子 2 的 824 bp擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行消化 ， 發(fā)現(xiàn) M n lⅠ在 5 個(gè)綿羊群體中都存在 286 bp 和 236 bp多態(tài)片段 ， R saⅠ都存在 295 bp 和 290 bp 多態(tài)片段。 Pelletier 等 （ 20xx） 用M n lⅠ 限制性內(nèi)切酶消化 2組發(fā)情行為有明顯差異 （ 常年發(fā)情和季節(jié)性發(fā)情 ）的 Merinos d′ Arles 母綿羊以及季節(jié)性發(fā)情明顯的 Ile2de2France 母綿羊 M TNR1A基因外顯子 2的 824 bp 擴(kuò)增產(chǎn)物 ， 發(fā)現(xiàn)存在 303 bp 和 236 bp 多態(tài)片段。季從亮等 （ 20xx） 和 Chu 等 （ 20xx） 用 M n lⅠ和 R saⅠ對常年發(fā)情的小尾寒羊和湖羊以及季節(jié)性發(fā)情的多賽特羊和薩福克羊共 146只綿羊 M TNR1A 基因外顯子 2的 824 bp 擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行 PCRRFLP 多態(tài)性分析 ， 發(fā)現(xiàn) M n lⅠ在 4 個(gè)綿羊品種中都存在 303 bp 和 236 bp 多態(tài)片段 ， R saⅠ 都 存在 290 bp 和 267 bp 多態(tài)片段。在綿羊中的研究結(jié)果表明，該基因?qū)d羊繁殖性能存在影響。但是，對于山羊，只有對產(chǎn)絨或營養(yǎng)調(diào)控的研究，目前尚未發(fā)現(xiàn)有對山羊繁殖性能影響的相關(guān)報(bào)道。 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)） 7 4．本實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊饬x 本實(shí) 驗(yàn)室滑國華等 （ 20xx） 在山羊 MTNR1A 中共發(fā)現(xiàn) 7 個(gè) SNPs，對其中 4 個(gè)SNPs 分析結(jié)果顯示： MTNR1A 不同基因型對山羊產(chǎn)羔數(shù)性狀有一定的影響。為進(jìn)一步研究該基因?qū)ι窖虍a(chǎn)羔數(shù)性狀的影響，本試驗(yàn)選取 G493A 突變位點(diǎn)，采用引入酶切位點(diǎn)方法，即 限制性片段長度多態(tài)性 Forced PCRRFLP（ Polymerase Chain ReactionRestriction Fragment Length Polymorphsim） ，分析該位點(diǎn)在馬頭山 羊和波爾山羊中的分布情況，并分析該位點(diǎn)對波爾山羊產(chǎn)羔數(shù)影響， 為 山羊標(biāo)記輔助選擇提供 理論依據(jù) 。 材料 試驗(yàn)動(dòng)物 馬頭山羊 51 頭，采自湖北省十堰市；波爾山羊 65 頭，采自湖北省宜都市波爾山羊種羊場。 頸靜脈采血 10ml/只， EDTA 抗凝， 20℃ 保存。 實(shí)驗(yàn)材料 Eppendorf 管 、雙面板、微量移液槍 （ 1000μ l、 200μ l、 40μ l、 10μ l、 l） 及槍 頭、 一次性 PE 塑料手套。 主要試劑的來源 TagDNA聚合酶購自上海生工生物工程技術(shù)有限公司 ； DNA限制性內(nèi)切酶 HinfⅠ 購 自晶美生物工程有限公司 ； 分子量標(biāo)準(zhǔn) 100bp DNA Ladder和 PBR322DNA/MspI購自上海生工生物工程技術(shù)有限公司 ； 三羥甲基氨基甲烷（ Tris） 、苯酚、蛋白酶 K、十二烷基硫酸鈉（ SDS）、甲酰胺、丙烯酰胺（ Acrylamide， Acr）、 N－ N’ －亞甲基丙烯酰胺（ Bisacrylamide）、瓊脂糖、溴化乙錠（ EB）、 瓊脂糖、 乙二胺乙二酸二鈉鹽（ EDTANa2）等均購自武漢凌飛科技有限公司 。 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)本科畢業(yè)論文（或設(shè)計(jì)） 8 主要儀器設(shè)備 表 1 主要儀器設(shè)備 Table 1 Laboratory equipment and instruments 儀器設(shè)備名稱 型號 生產(chǎn)廠家 電熱恒溫水浴鍋 GD120 英國 Grant 公司 臺式離心機(jī) TGL16G 上海安亭科學(xué)儀器廠 梯度 PCR 儀 T1 Thermo cyler 德國 Biometra 公司 冷凍離心機(jī) C