臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)考試輔導(dǎo)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)-文庫(kù)吧
2024-10-13 14:03 本頁(yè)面
【正文】 ：同源雙功能交聯(lián)劑。（1）一步法：連接AP。①優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)便、有效，重復(fù)性好。②缺點(diǎn)：交聯(lián)時(shí)分子間比例不嚴(yán)格，大小不一，影響效果。（2）二步法：連接HRP。先將HRP與戊二醛作用，透析除去戊二醛。優(yōu)點(diǎn)：酶標(biāo)志物質(zhì)量較均一，標(biāo)記效率也較一步法高。HRP標(biāo)記抗體或抗原的最常用方法。（二）酶標(biāo)記物的純化及鑒定常用的純化方法有葡聚糖凝膠G200/G150過(guò)柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。常用免疫電泳或雙相擴(kuò)散法進(jìn)行鑒定。（抗原）具有免疫活性。，滴加酶的底物溶液，若沉淀線(xiàn)上顯色，則酶標(biāo)記物中的酶活性仍保留。三、固相載體除均相酶免疫測(cè)定外，各種非均相酶免疫測(cè)定反應(yīng)最后都需要分離游離和結(jié)合的酶標(biāo)記物。固相抗體或抗原就是把抗體或抗原結(jié)合到固相載體的表面上，是酶免疫技術(shù)中將游離和結(jié)合的酶標(biāo)志物迅速分離的最常用方法。（一）固相載體的要求 結(jié)合抗體或抗原的容量大；可將抗體或抗原牢固地固定在其表面，經(jīng)長(zhǎng)期保存和多次洗滌也不易脫落；不影響所固定的抗體或抗原的免疫反應(yīng)性，而且為使反應(yīng)充分進(jìn)行，最好其活性基團(tuán)朝向反應(yīng)溶液，固相方法簡(jiǎn)便易行，快速經(jīng)濟(jì)。（二）固相載體的種類(lèi)和選擇：聚苯乙烯塑料最常采用?？乖蚩贵w以非共價(jià)或物理吸附方式結(jié)合到此載體上。主要缺點(diǎn)是抗體（抗原）結(jié)合容量不高、固相抗體（抗原）脫吸附率較高且不均一，孔間變異大，重復(fù)性差，從而影響測(cè)定的靈敏度、精確度及檢測(cè)范圍。目前采用非共價(jià)和化學(xué)偶聯(lián)共價(jià)吸附方法進(jìn)行抗原或抗體的固相化可改善上述缺點(diǎn)：易與抗體（抗原）形成化學(xué)偶聯(lián)，且結(jié)合容量大。均勻地分散到整個(gè)反應(yīng)溶液中，因此反應(yīng)速度快?？芍瞥纱呕㈩w粒。自動(dòng)化檢測(cè)中常用。：常有硝酸纖維素膜（Nc）、玻璃纖維素膜及尼龍膜等通過(guò)非共價(jià)鍵吸附抗體（抗原），廣泛用于定性或半定量斑點(diǎn)ELISA的固相載體。（三）包被與封閉：將抗原或抗體結(jié)合在固相載體上的過(guò)程。普遍使用的聚苯乙烯載體，將抗原或抗體溶于緩沖液（）中，加于ELISA板孔中4℃過(guò)夜。包被好的固相載體在低溫可放置一段時(shí)間而不失去免疫活性。：包被的蛋白質(zhì)濃度過(guò)低，固相載體表面不能被此蛋白質(zhì)完全覆蓋，其后加入的血清標(biāo)本和酶結(jié)合物中的蛋白質(zhì)也會(huì)部分地吸附于固相載體表面，最后產(chǎn)生非特異性顯色致本底偏高，在這種情況下，需用1%～5%的牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清再包被一次，消除此干擾，此過(guò)程稱(chēng)為封閉。第二節(jié) 酶免疫技術(shù)的分類(lèi)包括兩種：酶免疫組織化學(xué)技術(shù)：用于組織切片或其他標(biāo)本中抗原的定位。酶免疫測(cè)定技術(shù)（EIA）：用于液體標(biāo)本中抗原或抗體的定性和定量。根據(jù)抗原抗體反應(yīng)后是否需將結(jié)合和游離的酶標(biāo)志物分離，EIA一般可分為均相和異相兩種類(lèi)型。一、均相酶免疫測(cè)定利用酶標(biāo)志物與相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合后，標(biāo)記酶的活性會(huì)發(fā)生改變的原理，可以在不將結(jié)合和游離酶標(biāo)志物分離的情況下，通過(guò)測(cè)定標(biāo)記酶的活性的改變，而確定抗原或抗體的含量。該法主要用于小分子激素和半抗原（如藥物）的測(cè)定，均相法的優(yōu)點(diǎn)是適合于自動(dòng)化測(cè)定，但反應(yīng)中被抑制的酶活力較小，需用靈敏的光度計(jì)測(cè)定，反應(yīng)的溫度也需嚴(yán)格控制。
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