通過單克隆抗體技術識別肉的種類以及加熱肉品終點溫度的確認-文庫吧
2025-02-18 15:10 本頁面
【正文】 的原料肉。但是，當混合肉中存在多種肉或蛋白添加劑時 ,很難解釋其檢測結果。色譜法如氣相色譜 ,液體色譜和高精度色譜已經被廣泛用于肉種類的確認，這種方法是基于對肉樣中脂肪酸成分，組氨基酸或蛋白質形狀的檢驗來實現(xiàn)的。這些方法可以區(qū)分不同個體肉的種類，但是由于色譜類型復雜度的增加，這些方法在檢測復合肉品中摻雜肉的種類時會 失效。 ? 隨著分子生物學技術的高速發(fā)展，包括 DNA雜交技術，聚合酶鏈 反應和碎片分析技術已對法醫(yī)學產生了 革命性的變革，對于食品科學也是如此。 DNA 雜交技術已被用于多中肉類品種的 確認 ,下一步準備也進行基因組 DNA或克 隆 DNA同目標DNA的雜交，同時用顏色或自行 x射線照相技術進行檢測工作。 這些方法在用于煮制肉類品種 確認 方面是獨特的并且十分有用 , 但是在確認聯(lián)系密切肉類 時效果不好下一步準備顯示牛， 綿羊，山羊 ? 基因組 DNA水平上 的相互交叉反應。通過混合未標記 DNA修飾 DNA 雜交可以減少交叉反應， 從而可以從交叉雜交種類中區(qū)分綿羊和山羊，大約有 10﹪ 的區(qū) 別限度。綿羊和山羊 肉類的區(qū)分是使用直接連續(xù)技術來對比 核苷酸的次序而實現(xiàn)的， 同時也分析了限制核苷酸內切酶聚合酶鏈反應的產物， 由于費用高和操作的復雜性，這些基于 DNA 水平的技術未被常規(guī)分析方法所采納。 免疫學方法 ? 免疫學方法是基于特定抗體－抗原反應，它適用于分析復雜混合物中的成分，同時此成分有最低的檢測量。從本世紀開始，免疫技術已被用于動物肉類品種的確認。免疫技術的先進之處在于它可以在很大程度是提高檢測的敏感性和結果的準確性。沉淀環(huán)實驗是免疫分析方法的一個簡單形式，它的原理是在實驗管中抗血清和肉的抗原相匯處可產生可 ? 見的環(huán)。血凝抑制實驗是基于阻止抗原血 清 和 它的同類抗原之間積極的反應，而此同種類抗原被同種外來羊的紅血細胞所包裹。瓊脂膠體免疫擴散，雙層免疫擴散技術起源于 Ouchyeriony(1948)的描述，同時也涉及抗血清和抗原在半固體瓊脂 ? 膠體中的擴散。經過隔夜培養(yǎng)后在抗體和它對應的抗原相匯處形成一個可見的不透光的帶。 USDAFSIS肉類檢查員對這種技術做了一定的修繕，使用標定的試劑紙片和提前準備的瓊脂平板使此種 ? 技術在檢測原料肉的種類時更加便利 .由于瓊脂凝膠免疫擴散實驗靈敏性易變化，培養(yǎng)的時間長，并且非肉的成分干擾大，所以限制了它在完整鮮肉分析中的應用。免疫分析經常用在臨床處置中，但是一項研究指出 ,用 I 標記免疫試劑檢 測出牛肉中存在 5﹪ 的 其他成分。 由于 放射免疫分析技術要用有害的放射材料，并且要用閃爍計數(shù)器，所以限制了它在日常 ? 檢驗和檢測肉種類中的應用。 ? ELISA由于下面的優(yōu)點而在肉種類 ? 的確認中得到了十分廣泛的應用：不用太貴的科學儀器，易于操作，免疫試劑用量小，可應用于大數(shù)量，寬領域的檢測。經常應用的有三種 類型 : 間接ELISA競爭， ELISA,夾心 ELISA。間 接ELISA,先把抗原吸入一個微量平板上，之后相反動物的抗體與抗原結合吸附在固體層上，通過二者與隨后加入的反免疫球蛋白的結合，通過外來添加酶而形成的顏色 .它可以檢測到抗原與抗體的結合物 。 競爭 ELISA 技術是基于提取樣品中有限的抗 ? 體，而自由抗原和與固體相 結合的抗原與抗體競爭相結合。固體相 抗原結合的特定種類抗原的限制數(shù)同液 體相中的抗原數(shù)成正比。夾 心 ELISA使 用 固體相上 的抗體作為結合抗體。另一 種抗體用作檢測抗體。所以，這便形成 了一個夾心，抗原位于中間，抗體在抗原 分子的兩側。在表 1中對不同類型 ELISA用 各種肉的抗原對原料肉的確認進行了總結。最近，單抗體技術也應用在 ELISA中來對原料肉進行確認， ELISA也用于煮制肉品種類的確認中。 抗體的來源 ? 在使用酶免疫測定來確認肉的種類成功的發(fā)展的過程中，最重要的是特定種類的抗體，不同種動物需要不同的免疫試劑。傳統(tǒng)的來講，在 ELISA中應用的 單抗體來自免疫動物的血清。多克隆抗體技術在自然界中是外源的，亞群和特定種類抗原或相反種類抗原相結合。因此可以十分容易的觀測到血清和相關種類抗原的交叉反應。在檢測程度標準化的發(fā)展過程中，一組抗體親和力和結合 ? 特性的變化也引起了人們的關注。同多克隆抗體技術相反，單克隆抗體技術的來源－單細胞鏈在自然界中 是同源的。它們來自融化得抗體分泌物 Blymphocytes,而這種分泌物又來自患有骨髓瘤的免疫老鼠。融化的產物叫雜交細胞，可以在培養(yǎng)基中生長，并且可以繼續(xù)的分泌抗體。經過仔細的鏡檢和亞克隆后，可以挑選出穩(wěn)定的雜交細胞鏈，它可以分泌出針對某一特定抗原的抗體，而且產生抗體十分頻繁。采用單抗體的方法來對 ? 肉的種類進行免疫分析時 ， 應保證連續(xù)供應統(tǒng)一的免疫試劑 ， 也應減少標準分
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