通過單克隆抗體技術(shù)識別肉的種類以及加熱肉品終點(diǎn)溫度的確認(rèn)-在線瀏覽
2025-04-01 15:10本頁面
【正文】 ? 見的環(huán)。瓊脂膠體免疫擴(kuò)散，雙層免疫擴(kuò)散技術(shù)起源于 Ouchyeriony(1948)的描述，同時(shí)也涉及抗血清和抗原在半固體瓊脂 ? 膠體中的擴(kuò)散。 USDAFSIS肉類檢查員對這種技術(shù)做了一定的修繕，使用標(biāo)定的試劑紙片和提前準(zhǔn)備的瓊脂平板使此種 ? 技術(shù)在檢測原料肉的種類時(shí)更加便利 .由于瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)靈敏性易變化，培養(yǎng)的時(shí)間長，并且非肉的成分干擾大，所以限制了它在完整鮮肉分析中的應(yīng)用。 由于 放射免疫分析技術(shù)要用有害的放射材料，并且要用閃爍計(jì)數(shù)器，所以限制了它在日常 ? 檢驗(yàn)和檢測肉種類中的應(yīng)用。經(jīng)常應(yīng)用的有三種 類型 : 間接ELISA競爭， ELISA,夾心 ELISA。 競爭 ELISA 技術(shù)是基于提取樣品中有限的抗 ? 體，而自由抗原和與固體相 結(jié)合的抗原與抗體競爭相結(jié)合。夾 心 ELISA使 用 固體相上 的抗體作為結(jié)合抗體。所以，這便形成 了一個(gè)夾心，抗原位于中間，抗體在抗原 分子的兩側(cè)。最近，單抗體技術(shù)也應(yīng)用在 ELISA中來對原料肉進(jìn)行確認(rèn)， ELISA也用于煮制肉品種類的確認(rèn)中。傳統(tǒng)的來講，在 ELISA中應(yīng)用的 單抗體來自免疫動物的血清。因此可以十分容易的觀測到血清和相關(guān)種類抗原的交叉反應(yīng)。同多克隆抗體技術(shù)相反，單克隆抗體技術(shù)的來源－單細(xì)胞鏈在自然界中 是同源的。融化的產(chǎn)物叫雜交細(xì)胞，可以在培養(yǎng)基中生長，并且可以繼續(xù)的分泌抗體。采用單抗體的方法來對 ? 肉的種類進(jìn)行免疫分析時(shí) ， 應(yīng)保證連續(xù)供應(yīng)統(tǒng)一的免疫試劑 ， 也應(yīng)減少標(biāo)準(zhǔn)分析程序 。因?yàn)檠宓鞍椎拇嬖诳赡苁潜仨毜?，肌肉組織中殘余的血漿成分會發(fā)生變化，那么便意味著肌肉組織的存在，進(jìn)而可以得出結(jié)論：用這些多克隆技術(shù)來定量的估計(jì)攙雜物的量是不可靠的。對于肉種類的多克隆技術(shù)已用于可溶性粗蛋白的分析中或凈化肌肉 成分，例如肌鈣蛋白和肌紅蛋白。不溶性肌肉蛋白如連接蛋白 也可以用于單抗體的分析方法中，來確認(rèn)原料禽肉的種類。這些方法毫無疑 問的可以應(yīng)用于法律事件的檢測中，但 ? 不適用于常規(guī)檢驗(yàn)分析或產(chǎn)地檢驗(yàn)。 對于加熱的肉類的確認(rèn)也應(yīng)用熱穩(wěn)定蛋白。用 IEF方法， Jones和 Mortiner(1985)說明了 來自腎上腺和肌肉組織的 BE抗原蛋白具有熱穩(wěn)定性。 沒有 經(jīng) 過加熱處理 的從 肌肉組織中分離的具有抗熱性 的 糖蛋白應(yīng)用于多克隆抗體技術(shù)中。這些方法在商業(yè)檢測中是十分有效的， 并且也應(yīng)用于 USDA對加熱肉品種類確認(rèn)的調(diào)查中。用于加熱處理肉類蛋白鑒別的單克隆抗體技術(shù)也可用于原料肉的鑒 別 中，因?yàn)樵跍?zhǔn)備檢測樣品時(shí)這些原料肉可以十分容易的被加熱處理。熱穩(wěn)定性這一個(gè)詞在字典中被十分清晰的定義，大多情況下，它指經(jīng)過加熱處理的肉類浸提物中保持可溶性 和抗原性的完整蛋白或蛋白碎 片。然而對于雜交瘤的分泌物并不一定完全需要提純蛋白作為抗原，由于在挑選適宜特定種類蛋白主要方面缺少足夠多的知識技術(shù)， ? 所以在單克隆抗體技術(shù)中我們使用加熱處理過的可溶性粗肌肉蛋白作為免疫源。對期望的特性應(yīng)用 MABS（單克隆抗體技術(shù)）檢測 ? 時(shí)應(yīng)選擇雜交克隆分泌物，而且必須要經(jīng)過仔細(xì)的鏡檢和亞克隆。 ? 2）瘦肉混于 ，沸水加熱并且離心 .上層液 121℃ 30分鐘高溫滅菌過濾，用 90﹪ 乙醇進(jìn)行萃取，沉淀，干燥物溶于鹽溶液中備用。在我們的實(shí)驗(yàn)室中， 遵 守由 Kohler 和 Milstern描述的一般程序，那便是在隨后 ? 的步驟中要進(jìn)行必要的修飾。雜交產(chǎn)物具有我們所期望的特性 ， 之后通過限定性稀釋程序?qū)χ寺≈? 少兩次以獲得穩(wěn)定的單克隆細(xì)胞鏈。 單克隆抗體的特點(diǎn) ? 目前為止，五種免疫球蛋白單克隆抗體技術(shù)在實(shí)驗(yàn)中已用于摻雜肉種類的 檢測。 3E12同禽肉 反應(yīng)，5D2主要用于雞和火雞的鑒別中。 第一 組 四種單克隆抗體技術(shù)用于經(jīng)水或鹽水浸 提過的經(jīng)過加熱處理的肌肉蛋白，它 們 同 ? 特別的加熱肉提取物發(fā)生了強(qiáng)烈的反應(yīng)，但不同原料肉和加熱處理后的肉相作用。 5H9也同原料豬肉浸提物的三個(gè)蛋白帶發(fā)生反應(yīng)，帶有 24KD的蛋白質(zhì)可以被確認(rèn) 為豬 肉特 定的熱穩(wěn)定肌肉蛋白。表 3說明了 5H9對于不同豬肉組織和食物蛋白的免疫反應(yīng)，也 ? 同時(shí)說明了 5D2的特性反應(yīng) .這些單克隆抗體對于特定骨骼肌而具有的特點(diǎn)不同于別的已報(bào)道的結(jié)果，別的報(bào)道講已觀 ? 察到這些抗體對器官，心肌，或平滑肌 ? 的交叉反應(yīng)。對于定量分析來講抗原均勻的分布在不同動物的半天肌肉組織中是十分 ? 重要的，所以抗原的量決定于同樣品中一定目標(biāo)肌肉組織的分析反應(yīng)，而不用考慮肌肉切面的位置。無論是使用間接非競爭還是競爭性 ELISA技術(shù)，都表示在肉不同的切 面整個(gè)浸提物蛋白濃度和豬肌肉組織得測定數(shù)量水平?jīng)]有不同。 ? 表 4 確認(rèn)加熱肉種類時(shí)作用于加熱處理蛋白質(zhì)的單克隆抗體的鑒別特性 ? 單克隆抗體類型 亞型 鑒別種類 抗原蛋白質(zhì)分子重量（ kD)
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