【正文】 正常排列方式； ?細胞分裂時細胞的變化及其速率； ?運動性的鑑別： ＊自主運動： 鞭毛；路線呈直線規(guī)則，速度快速。 ＊布朗運動： 為粒子與周圍流體的分子產生不帄衡的碰撞而做 不停的攪動。路線呈不規(guī)則，速度緩慢。 ? 鏡檢方式 ： ?乾式： 放大 600倍以下時使用。 ?油浸式：需行高倍率放大時使用。 避免光被空氣折射掉 ,在物鏡與玻片間滴油。 染色技術 由於微生物之細胞很小，因此一般光學顯微鏡並不容易 觀察，所以常需藉助染劑 (Dye)與細胞間的物理或化學 作用，使細胞上色、增加對比以便於觀察 。 原理 ： 細胞表面或細胞內活化位置與染劑發(fā)生離子交換。 作用方式： 低濃度作用長時間較高濃度作用短時間較好。 染色目的： 鑑別不同菌體的型態(tài)、結構，及提高放大效果 並作為分類之依據 染劑的種類 ~依帶電荷分 種類 組成 染劑 例子 鹼性 染劑 帶顏色之陽離子 與不帶顏色之陰離子組成 甲烯藍 細胞核及細胞粒等酸性部位染色 酸性 染劑 由無色之陽離子與 帶顏色之陰離子 組成 伊紅或剛果紅的鈉鹽 細胞質 等鹼性物質之染色 中性 染劑 由 酸性與鹼性染劑形成的複合鹽類 ，所以不含可解離的基團。 甲烯藍與伊紅形成之複合體 可自由進出死細胞之細胞膜，與 死細胞 結合 常用鑑別染色技術 染色法 使用染劑 用途 結果 革蘭氏染色法 (Grams stain) 結晶紫、碘液 、95%酒精、番紅 分 G(+)與 G() G(+)~紫色 G()~紅色 芽胞染色 (spore stain) 孔雀綠、番紅 分 芽胞及菌體 芽胞 ~綠色 菌體 ~紅色 鞭毛染色 (flagella stain) 明礬、鹼性洋紅 觀察鞭毛 鞭毛 ~紅色 菌體 ~藍色 抗酸性染色 (acid fast stain) 石碳酸洋紅、 酸酒精、甲烯藍 觀察分枝桿菌屬與非抗酸細菌 抗酸菌 ~紅色 非抗酸菌 ~藍色 莢膜染色法 (capsule stain) 印地安墨 觀察莢膜 莢膜 ~淡藍色透明 菌體 ~藍紫色 微生物的培養(yǎng) 菌體化學組成份 ? 水分 主要作為代謝時的溶媒。細胞增殖期含量較高，孢子含量較少。 ? 醣類 多存在黏質層、莢膜 (多醣體 )、細胞壁 (勝肽聚醣 )及細胞質中；作為 能量貯存物質 (如酵母菌的肝醣 )及構造物質 (纖維素 藻類細胞壁 )用。 ? 蛋白質 為細胞之基本構成分 (核蛋白、脂蛋白、醣蛋白 ) ，及生化反應中酵素 的組成份。 ? 脂質 主要構成細胞膜、核膜、粒腺體膜之成分 (磷脂質 ) 。 ? 核酸 為 DNA及 RNA之構成份， DNA(遺傳物質 )含量一定，存在細胞核內； RNA則於蛋白質合成旺盛之生長對數期時最高。 ? 維生素 以維生素 B群最多，作為輔酵素之構成份，重要者有 B泛酸、菸鹼 酸 等。 ? 灰份 含量較多者 Na, K, Ca, Mg, P, S, Cl, Fe，在細胞中以有機或無機態(tài)存在 影響微生物生長的因子 ?外在因子 (環(huán)境因子 ) 氣體 溫度 pH Aw或滲透壓 微生物間的相互作用 ?內在因子 (營養(yǎng)要求 ) 能源 碳源 氮源 無機鹽類 維生素 影響微生物生長的因子 外在因子 (環(huán)境因子 )~~溫度 種類 生長溫度 (最適溫度 ) 實例 嗜低溫菌 0~20℃ (15℃ ) 冷藏食品腐敗菌 嗜中溫菌 20~40℃ (37℃ ) 人體和動植物病原菌、 腐敗菌 嗜高溫菌 40~100℃ 或以上 (55℃ ) 溫泉及堆肥 影響微生物生長的因子 外在因子 (環(huán)境因子 )~~pH 種類 生長範圍 實例 嗜酸性 ~ 醋酸菌、乳酸菌、酵母菌、黴菌(pH4~6) 嗜中性 ~ 一般細菌 (~) 腐敗菌 (~) ；病原菌(pH6~8) 嗜鹼性 ~ 霍亂弧菌 (~) 、硝化菌、根瘤菌、尿素分解菌、放線菌 細胞代謝養(yǎng)料會產生酸或鹼 ， 造成 pH的變化 。 pH的改變會影響細胞內酵素活性，因而影響細胞的生長。通常會添加緩衝溶液，可使培養(yǎng)基不因酸或鹼的形成而改變 pH值。 影響微生物生長的因子 外在因子 (環(huán)境因子 )~~Aw或滲透壓 微生物種類 Aw 實例 一般細菌 金黃色葡萄球菌 一般酵母菌 麵包酵母菌 一般黴菌 醬油黑麴菌 好鹽性細菌 腸炎弧菌生長在含 3%NaCl之培養(yǎng)基中 耐旱性黴菌 Xeromyces bisoporus 存在半乾性食品 耐滲透壓酵母菌 Zygosaccharomyces蜜餞、果醬 等之腐敗菌 培養(yǎng)基 含微生物生長所需之養(yǎng)分的培養(yǎng)液 培養(yǎng)基種類 ~依組成分 ? 天然培養(yǎng)基： 牛奶、馬鈴薯等含有多樣天然營養(yǎng)素者。 ? 化學合成培養(yǎng)基： 依微生物營養(yǎng)之需求，以一定含量之特定化學成分所 配製而成者。 ? 複合培養(yǎng)基： 於化學合成培養(yǎng)基中，再添加一些有機抽出物的成分 (如：酵母萃取液、牛肉萃取液、血清 )而組成者。 種類 配方 天然培養(yǎng)基 脫脂乳粉 100g； 蒸餾水1000mL 化學合成培養(yǎng)基 檸檬酸培養(yǎng)液： 磷酸氫銨鈉 ； 檸檬酸鈉 3g； 磷酸氫二鉀 1g； 硫酸鎂 ； 蒸餾水 1000mL 複合培養(yǎng)基 營養(yǎng)肉湯 (NB) ： 蛋白腖 10g；牛肉抽取物 3g； 氯化鈉 5g； 蒸餾水 1000mL 培養(yǎng)基種類 ~依形態(tài)分 ? 液體培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基中 無添加洋菜或明膠 等硬化劑，以利於微生物 的大量繁殖及化學藥劑加入的直接反應。 ? 半固體培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基中 含 %或更少的洋菜 ，使培養(yǎng)基變成半固體 狀態(tài)，方便觀察微生物在培養(yǎng)基中的運動或產氣體的 情形。 ? 固體培養(yǎng)基： 培養(yǎng)基中 添加 ~2%洋菜 ，當培養(yǎng)基冷凝後會變成 固體狀態(tài)，以利於微生物的純化、計數及保存。 培養(yǎng)基種類 ~依作用分 ? 基礎培養(yǎng)基 (basical medium)： 含微生物生長之基本營養(yǎng)素者。 ? 滋養(yǎng)培養(yǎng)基 (enriched medium)： 在基礎培養(yǎng)基中添加特殊成分，使難於一般培養(yǎng)基生長的菌體能生長。如血清。 ? 選擇培養(yǎng)基 (selective medium)： 於培養(yǎng)基中添加特殊物質，選擇性的抑制某些種類菌體 生長，使欲分離培養(yǎng)的菌體藉此篩選出來。 如：培養(yǎng)基中加入高濃度鹽、抗生素 等。 ? 鑑別培養(yǎng)基 (differential medium)： 培養(yǎng)基中加某種特殊物質，用來區(qū)分微生物對它利用情形，也藉以鑑定特殊菌體。 如：加血液 測該菌有無溶血能力。 配方 Lactose broth BGLB broth EMB agar 蛋白腖 (Peptone) 乳糖 (Lactose) 牛肉抽出物 (Beef extract) 蛋白腖 乳糖 膽粉 (Oxgall powder) 煌綠 (Brilliant green) 蛋白腖 乳糖 伊紅 (Eosin Y) 甲烯藍 (Methylene blue) 磷酸氫二鉀 (K2HPO4) 洋菜 微生物的培養(yǎng)法 ?液態(tài)培養(yǎng) ：將菌株接種在液體培養(yǎng)基中。 (可動態(tài) ) ?斜面培養(yǎng) ：將菌株接種在製成斜面之固體培養(yǎng)基中。 ?穿刺培養(yǎng) ：將菌株以接種針穿刺接種至固體培養(yǎng)基中。 ?半固態(tài)穿刺培養(yǎng) ：將菌株以接種針穿刺接種至半固體 培養(yǎng)基中。 ?帄板培養(yǎng) ?劃線培養(yǎng) ：利用接種環(huán)在培養(yǎng)皿帄盤上之固態(tài)培養(yǎng)基 表面逐次劃直線，每次起始點均含蓋上次 直線之末段，使達到逐漸稀釋之效應。 ?塗抹培養(yǎng) ：將預先稀釋好的菌液滴在固體培養(yǎng)基上， 再使用塗抹棒將之塗抹開。 ?混合倒皿培養(yǎng) ：將預先稀釋好的菌液加在含有溶融洋