【正文】 T y r U A C , U A U GUA C UA U A GS u p C ( s u 4 ) T y r U A C /U A U GUA U UA U A A /U A GS u p G ( s u 5 ) L y s A A A /A A G UUU UU A U A A /U A GS u p U ( s u 7 ) T r p UGG CCA U CA U G A /U G G2） 錯義抑制 ?抑制 tRNA識別錯義突變位點，通過插入原來的氨基酸或其它的氨基酸而抑制錯義突變，從而能完全恢復或部分恢復蛋白質活性 。 ? 有兩種方式可以形成抑制型 tRNA： ? 1） tRNA反密碼子發(fā)生突變 ， ? 2） tRNA其他的結構變化或是氨酰 tRNA合成酶的突變而改變了其荷載氨基酸的變化 。 錯義突變 錯義突變A U G A G A U A A A U G G G A U A A A U G A G A U A AUC U C C U U CU 抑制突變 A r g Gl y Gl y圖 14 18 反密碼子發(fā)生突變可抑制錯義突變4）抑制突變的特點： 1）不是所有終止密碼子的抑制基因都產(chǎn)生有功能的蛋白質，起到抑制或校正的作用，關鍵是要看氨基酸取代的情況。 2） 校正的作用不可能是完全的，抑制基因的效率很低，通常為 1~5%。 ? tRNA怎樣接受特定的氨基酸： 氨基酰－ tRNA合成酶 (AARS) ? 氨基酰 tRNA合成酶 (AARS)怎樣識別 tRNA； ? tRNA中的哪些結構和接受特定氨基酸有關 。 ? 蛋白質合成的真實性主要決定于 AARS是否能使氨基酸與對應的 tRNA相結合 。 3 tRNA對氨基酸的識別 氨?；?tRNA ? 模板 mRNA只能識別特異的 tRNA而不是 AA。 ? 氨基酰 tRNA合成酶 (AARS)特異 識別連接氨基酸和 tRNA，成為氨基酰 tRNA 。 ? 氨?；?tRNA在蛋白質合成中扮演重要作用： ? 為肽建的合成提供能量； ? 執(zhí)行遺傳信息的解讀。 AA– tRNA合成酶（ AARS ） ★ 需要三種底物 AA tRNA ATP ★ 因此有三個位點 aa binding site tRNA binding site ATP site ★ 反應： 活化：氨基酸 +ATP+E→ 氨基酰 ATPE+PPi 轉移：氨基酰 ATPE +tRNA→aa tRNA+AMP+E ★ Prok中 AARS有 20種 ，對 AA及 tRNA高度專一，準確結合； ★ 40kDa~100kDa之間，有單聚體、二聚體和四聚體。 ★ 可分為兩類： 反應機制的差別： Ⅰ 類酶 先將氨基酰轉移到 tRNA 3’ 端 A的 2’OH 然后通過轉酯反應轉移到 3’OH上。 Ⅱ 類酶 直接將氨基酰轉移至 3’OH 上。 ? AARS 上有 4種活性區(qū)域： ? 催化區(qū)域： ATP和氨基酸結合位點 ? tRNA接受臂螺旋結合區(qū)域 ? tRNA反密碼子結合區(qū)域 ? 聚合區(qū)域（ II類沒有聚合） ? 催化過程： ? 接受臂結合區(qū)域先介入至催化區(qū)域中 ， 使得 tRNA的 3’末端接近催化位點 ， 然后進行反應 。 ? I類合成酶有聚合區(qū)域 ， 使酶分子聚合 ， ? II類合成酶沒有聚合方式 。 AARS 識別 tRNA的活性區(qū)域； 兩類酶與 tRNA反應時－－接近模式不同 蛋白沿 L型分子的一側束縛 tRNA（ tRNA的兩端被束縛） tRNA兩個端點與合成酶結合，大部分的序列并不被合成酶識別。 I類和 II類合成酶與 tRNA的相互作用有所區(qū)別。 經(jīng)晶體結構分析，兩類酶與 tRNA接觸的方位正好相反， tRNA中和接受特定氨基酸有關的結構 表 1 4 5 每種合成酶通過幾個特殊堿基來識別其同質 t R N At R N A 合成酶識別的堿基一類氨基酰 t R N A 合成酶V al 反密碼子上的三個堿基Me t 反密碼子上的三個堿基I l e 反密碼子上的 C 3 4 修飾堿基G l n U 3 5 （反密碼子） 。 U 1 A 7 2 和 G 7 3 （受體臂）二類氨基酰 t R N A 合成酶Ph e （酵母） 反密碼子上的三個堿基， G 2 0 (D 環(huán) )。 A 7 3 ( 末端 )Se r G 1 C 7 2 。 G 2 C 7 1 。 A 3 U 7 0 ( 受體臂 ) 。 C 1 1 G 2 4 (D 環(huán) )Ala G 3 U 7 0 ( 受體臂 )Paracodon of tRNA 裝載 Amino Acid（ R） AARS tRNA binding site aa binding site tRNA中的副密碼子與 AARS 的 tRNA binding site的特異基團間的分子識別結合 副密碼子 (paracodon) ? tRNA 分子上決定其攜帶氨基酸分子的區(qū)域， ? 被氨酰 tRNA合成酶識別的堿基。 副密碼子特點 ： ① 一組同功 tRNA 的副密碼子有共同的特征； ② 副密碼子沒有固定的位置，亦不止 1個堿基對； ③ AARS對副密碼子 識別與結合是通過氨基酸與堿基之間的連接實現(xiàn)的。 按 AAtRNA合成機制將 AARS分為兩類 相應的 tRNA上的副密碼子的空間位置不同 type I Val,Arg,Gln,Glu,Ile,Leu,Met,Trp,Tyr 副密碼子大多位于反密碼子臂 type II 副密碼子大多位于氨基酸接受臂 個別還同時在附加臂上有相應堿基 第三節(jié) mRNA的特點 1 mRNA 分子的組成： ?轉錄啟動區(qū) ?5’UTR AUG之前的 5’ 端非編碼區(qū)（前導序列） ?編碼區(qū) 起始碼、閱讀框、終止碼 ?3’UTR 終止密碼子之后，不翻譯的 3’ 端 ?轉錄終止區(qū) CAA A ATT CGA TCG A TTC GAT CGC AA AT TCG ATC GCA 1） 3） 2） ?但只有一種具有編碼的作用，稱為 開放閱讀框（ open reading frame， ORF）。 ? 根據(jù)密碼子的起始位置， 一個 DNA順序可能有 3種 閱讀框 （ reading frames） ? 例如，序列 ATTCGATCGCAA （ 2） 其他特征 a、 5’ 端有 300個左右 NT的非翻譯區(qū)（ A/G－－－－ AUG） b、 AUG作為起始密碼子（ GUG、 UUG） 2 原核生物 mRNA的特征 （ 1） 大部分為多順反子 c、 S – D 序列 S – D序列（ ShineDalgarno sequence）： 位于 AUG上游 4 ~13 個 NT處的富含嘌呤的 3 ~9 個 NT的共同序列， AGGAGG。 ? 與核糖體結合； ? 與核糖體小亞基內 16S rRNA 的 3’端富含嘧啶的序列 3’UCCUCC5’互補，使 tRNA正確定位于起始密碼子。 S t r u c t r u e o f 3 ’ e n d o f 1 6 5 r i b o s o m a l R N A A G U A G C A C C U G C G G U U A CCUCCU U U A 3 ’ G G G A U G C C A A U G G A r R N A du pl ex G 1 6 S r R N A