【正文】 tRNA進(jìn)位。 c 重復(fù)上述循環(huán)，肽鏈在 N端加入一個氨基酸，使 P位依次出現(xiàn) 3肽、 4肽等。 3 終止 ? 肽鏈合成的終止包括：肽鏈釋放， tRNA逐出，核糖體與 mRNA解聚。 c. RF3 與 GTP 結(jié)合為肽基轉(zhuǎn)移及隨后的 核糖體釋放 提供能量。 ? 同時核糖體在 IF3作用下，解離出大、小亞基。 ? mRNA翻譯的多肽鏈沒有功能，稱為 新生蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)前體 ，需要經(jīng)過 加工改造 才能成為有功能的蛋白質(zhì)。 第六節(jié) 真核生物的蛋白質(zhì)生物合成過程 1 合成起始 Euk機(jī)制與 ， a. 核糖體較大， 80S（ 60S + 40S） ； b. mRNA 是單順反子； c. mRNA 有 5’帽子結(jié)構(gòu)，起始識別需要起始因子 eIF eIF4E的幫助； d. MettRNAMet不甲?；?； e. 有較多的起始因子。 Euk的起始因子 起始機(jī)制 a 對 AUG的識別： ? 核糖體首先 識別 5?端甲基化的帽子結(jié)構(gòu) ? 內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn) (internal ribosome entry site, IERS)，位于 5’UTR， 25bp，選擇起始點(diǎn)。 2 GTP 6 0 S + 4 0 S e I F 2 e I F 3 M e t tR N A eI F 2 β eI F 2 β 〔 40S GTP eI F 3 GTP eI F 3 4B GTP (eI F 2 m R N A tR N A ( 8 0 S 起始復(fù)合體 ) 圖 15 19 真核生物蛋白質(zhì)合成中 80S 起始復(fù)合物的形 三元復(fù)合物 48S起始復(fù)合物 43S前起始復(fù)合物 80S起始復(fù)合物 2 延伸 ? 與 Prok 相似，進(jìn)位、成肽和轉(zhuǎn)位三個步驟。 延伸因子 亞基 GTP結(jié)合能力 生物學(xué)活性 eEF1 至少 αβγδ四個亞基 + eEF1α與 GTP結(jié)合，結(jié)合氨基酰 tRNA（延伸 tRNA）進(jìn)入核糖體A位與 mRNA結(jié)合 eEF2 + 依賴于 GTP水解的移位酶 ,使肽基 tRNA從核糖體的 A位向 P位移動 eEF3 參與維持翻譯的準(zhǔn)確性 3 終止 ? 釋放因子 eRF, ? 識別三種終止密碼子 UAA、 UAG、 UGA。 4 準(zhǔn)確翻譯的機(jī)制 氨基酸與 tRNA間的負(fù)載專一性 (1) 氨酰 tRNA合成酶（ AARS）對氨基酸的特異識別與結(jié)合 (2) AARS 的介導(dǎo)下 tRNA 的副密碼子對 aa 的準(zhǔn)確負(fù)載 反密碼子對密碼子的準(zhǔn)確識別 搖擺假說 反密碼子的堿基修飾 對第一個 Met （ AUG）的準(zhǔn)確起譯 (1) Prok. SD序列與 16S rRNA 3’端的準(zhǔn)確識別 (2) Euk. eIF4F 對 5’ 帽子的準(zhǔn)確識別及對 GCC(A/G) CCAUGG 的掃描 (3) IF2（ eIF2）和 Tu（ EF1）酶的專效性 Φ Prok. IF2與 fMettRNAfMet 間有嚴(yán)格的專一性 Euk. eIF2與 MettRNAiMet間 ……………….. Φ Prok. EFTu識別 MettRNAmMet Euk. EF1 原因在于兩種 tRNA之間存在明顯的結(jié)構(gòu)差異。 Euk. EF1 Φ 密碼子和反密碼子結(jié)合能力的第二次校對 A位上的正確的密碼子和反密碼子的結(jié)合能力比錯誤的高3000倍。 Prok IF EFTu 、 EFG Euk eIF eEF1 、 eEF2 （ 2） GTP 水解釋放的能量提高核糖體結(jié)合氨酰 tRNA 和移 位的能力； （ 3） GTP 還有使翻譯準(zhǔn)確的功能。 6 真核與原核蛋白質(zhì)合成的異同 真核 原核 核糖體 80S 70S 含蛋白數(shù)量 多于 80 少于 60 小亞基結(jié)構(gòu) 無嘧啶區(qū)和互補(bǔ)區(qū) 含嘧啶區(qū)與互補(bǔ) 起始 tRNA tRNAimet tRNAfmet 啟動 eIF 910種 需 ATP 小亞基先與 tRNA結(jié)合 先與 mRNA結(jié)合 延長 EF1,EF2 EFTu EFTs EFG 終止 RF RF1， RF2， RF3 第七節(jié) 蛋白質(zhì)生物合成初始 產(chǎn)物的后加工 1 細(xì)菌中蛋白質(zhì)的越膜 信號肽 （ N端信號序列）（ signal sequence .） : 分泌蛋白的 N端 15～ 30個 AA的前導(dǎo)序列為越膜信號。 疏水區(qū)段嵌入磷脂膜內(nèi)或形成 αhelix, 并對磷脂雙層膜產(chǎn)生擾動效應(yīng)， 誘發(fā)形成非脂雙層結(jié)構(gòu)， 以保證 信號肽 所牽引的蛋白質(zhì)順利穿膜 作用機(jī)制： α α Helix hairping . 酶 原核生物分泌性蛋白質(zhì)穿膜的分子模式 2 真核生物中蛋白質(zhì)的越膜 （共翻譯轉(zhuǎn)運(yùn)） 信號肽序列（ .）和原核類似 （ 1）越膜機(jī)制： a. 信號識別顆粒 （ signal recognition particle， SRP）的幫助下插入到粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中。 功能： 識別信號肽，與核糖體結(jié)合并暫時阻斷多肽鏈的合成 （肽鏈約 70個 AA時） 。 d. SRP的存在使得： 分泌性蛋白及早進(jìn)入細(xì)胞的膜性細(xì)胞，能夠正確的折疊、進(jìn)行必要的后期加工與修飾并順利分泌出細(xì)胞。 參與蛋白質(zhì)折疊的兩類蛋白質(zhì)－－ 助折疊蛋白： 1) 酶 ： 例如蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶可以識別和水解非正確配對的二硫鍵 ， 使它們在正確的半胱氨酸殘基位置上重新形成二硫鍵； 2) 分子伴侶： 細(xì)胞內(nèi)幫助新生肽鏈正確組裝為成熟蛋白質(zhì) ， 而本身卻不是最終功能蛋白質(zhì)分子的組成成分的分子 。 ? 和部分折疊或沒有折疊的蛋白質(zhì)分子結(jié)合 ， 穩(wěn)定其構(gòu)象 ， 免遭其它酶的水解或促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊成正確的空間結(jié)構(gòu) 。 ? 某些蛋白質(zhì)分子 N端要進(jìn)行乙?；?， C端也要進(jìn)行修飾 。 例 1： 促進(jìn)糖原分解的磷酸化酶，無活性的磷酸化酶 b經(jīng)磷酸化以后，變成有活性的磷酸化酶 a。 b 糖基化： ? 質(zhì)膜蛋白質(zhì)和許多分泌性蛋白質(zhì)都具有糖鏈， ? 這些寡糖鏈結(jié)合在絲氨酸、蘇氨酸的羥基上或者天門冬酰胺連接； ? 糖基化的 類型： （ 1）糖蛋白是由寡糖連接在天冬氨酸的氨基的形成的，連接的鏈叫 N糖苷鍵。 ? N糖苷鍵是在 ER開始，而在高爾基體中進(jìn)一步完成； O糖苷鍵的形成僅發(fā)生在高爾基體中。 d 二硫鍵的形成： ? mRNA上沒有胱氨酸的密碼子，多肽鏈中的二硫鍵，是在肽鏈合成后，通過二個半胱氨酸的硫氫基氧化而形成的， ? 二硫鍵的形成對于許多酶和蛋白質(zhì)的活性是必需的。 ? 例如成人血紅蛋白由兩條 α鏈，兩條 β鏈及四分子血紅素所組成，大致過程如下： α鏈在多聚核糖體合成后自行釋下，并與尚未從多聚核糖體上釋下的 β鏈相連，然后一并從多聚核糖體上脫下來，變成 α、 β二聚體。 (4) 信號肽的去除 (5) 剪切 ?Prok和 Euk 蛋白經(jīng)剪切后才能成為成熟的蛋白。其它兩個基因的產(chǎn)物也要經(jīng)過加工才能產(chǎn)生核心蛋白和外殼蛋白。分子由 A鏈（ 21aa） B鏈（ 31aa）和 C鏈（ 33aa）三個連續(xù)的片段構(gòu)成。 1. tRNA的二維結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)是什么？ 2. 什么是抑制突變？有幾種類型？ 3. 細(xì)菌核糖體有哪些活性位點(diǎn)及其功能 ? 4. 氨?；?tRNA是如何形成的？ 5. 說出細(xì)菌翻譯起始中的起始因子、延伸因子、終止因子及各自功能。 8. 簡要說明原核生物與真核生物的翻譯過程的差別 9. 簡要說明真核生物蛋白質(zhì)的不同轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制 思考題 名詞解釋 單（多）順反子 mRNA SD序列 副密碼子 同工 tRNA 同義密碼子 密碼子的簡并性 分子伴侶 信號肽 簡答題