【正文】 的正確折疊 . 2. 伴侶素 (chaperonins) Ecoil 包括 GroEL和 GroES (真核細(xì)胞同源物 HSP60, HSP10)家族，作用為 非自發(fā)折疊的蛋白質(zhì) 創(chuàng)造折疊的微環(huán)境． Hsp60:具有桶狀結(jié)構(gòu) 伴侶素 GroEL/GroES系統(tǒng)促進(jìn)蛋白質(zhì)折疊過程 hsp60 hsp60 hsp60 三、蛋白質(zhì)的加工和修飾 一 .蛋白質(zhì)翻譯后 的 加工修飾 ：即個(gè)別氨基酸的化學(xué)修飾如 。 一、側(cè)鏈氨基酸的微小修飾 二硫鍵形成異構(gòu)酶 谷胱甘肽 常見的加工修飾方式： 1. 二硫鍵形成和正確配對(duì)： １． 二硫鍵異構(gòu)酶 部位 :內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 二硫鍵異構(gòu)酶在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔活性很高 ,多肽鏈內(nèi)或肽鏈之間二硫鍵的正確形成對(duì)穩(wěn)主要在細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行。 一級(jí)結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)空間構(gòu)象和特異生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。 肽 脯氨酰順反異構(gòu)酶 多肽鏈中肽酰 脯氨酸間形成的肽鍵有順反兩種異構(gòu)體，空間構(gòu)象明顯差別。 肽酰 脯氨酰順反異構(gòu)酶是蛋白質(zhì)三維構(gòu)象形成的限速酶， （ 二 ） 剪切和剪接加工 1. N端 fMet或 Met的切除 ? 脫甲酰酶 （ deformylase） :除去 N端 fMet甲酰基 ，留下 Met作為第一個(gè)氨基酸； ?氨肽酶去除 Met。 N C 信號(hào)肽 PMOC KR KR 103肽 ( ？ ) ACTH ?LT ?MSH ?MSH Endophin 促黑素 脂解釋放激素 蛋白質(zhì)前體經(jīng)多肽的剪輯 ,剪除 某些氨基酸片段 ,再以一定的順序 連接 起來最終成為成熟有活性的蛋白質(zhì)過程 . 被剪接的無活性的氨基酸序列稱為蛋白質(zhì)的內(nèi)含子 ,它是由轉(zhuǎn)座子編碼的 .也是翻譯后的調(diào)節(jié)形式之一 . ? 蛋白質(zhì)的脂?；焊郀柣w內(nèi)進(jìn)行，?；D(zhuǎn)移酶催化脂肪酸與肽鏈的 Ser或 Thr的羥基以酯鍵相連。 ? : N連接 ： O連接 ： 蛋白質(zhì)的糖基化修飾 : 一種或多種糖以共價(jià)鍵連接到肽鏈上的蛋白質(zhì)。 糖基化位點(diǎn) N連接糖蛋白中 AsnXSer/Thr三個(gè)氨基酸殘基的序列子稱為糖基化位點(diǎn)。 1. 對(duì)新生肽鏈的影響 促進(jìn)肽鏈的折疊 。 是細(xì)胞運(yùn)輸和分揀的 信號(hào)。 3. 參與分子的 識(shí)別作用 糖基化修飾作用 一．蛋白質(zhì)的分選和運(yùn)輸?shù)囊话慵?xì)胞學(xué)過程 。 ?蛋白質(zhì)的靶向輸送 (protein targeting) 所有靶向輸送的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中存在 分選信號(hào) ， 主要為 N末端特異氨基酸序列 ，可引導(dǎo)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞的適當(dāng)靶部位 ，這一序列稱為信號(hào)序列 。 ? N端為帶正電荷的氨基酸殘基組成的序列； ? 兩段 α 螺旋會(huì)形成一個(gè)易于嵌入細(xì)胞膜內(nèi)的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。 Helix . 切割位點(diǎn) 反向平行，形成 hairpin 1015 α螺旋 靶向輸送蛋白 信號(hào)序列或成分 分泌蛋白 信號(hào)肽 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔蛋白 信號(hào)肽 ， C端 LysAspGluLeuCOO(KDEL序列 ) 線粒體蛋白 N端靶向序列（ 20～ 35氨基酸殘基） 核蛋白 核定位序列 （ ProProLysLysLysArgLysVal， SV40 T抗原） 過氧化體蛋白 SerLysLeu（ PST序列） 溶酶體蛋白 Man6P（甘露糖 6磷酸） 靶向輸送蛋白的信號(hào)序列或成分 導(dǎo)肽 導(dǎo)肽 分泌性蛋白信號(hào)肽的作用( function of signal peptide) 將肽鏈引向并跨過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜 .這個(gè)過 程需要 信號(hào)肽識(shí)別顆粒 (signal recongnition particle SPR)及 受體 協(xié)助 . 信號(hào)肽引導(dǎo)真核分泌蛋白進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 目 錄 蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)因子 hsp70 信號(hào)肽引導(dǎo)真核分泌蛋白進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 導(dǎo)肽 線粒體 ,葉綠體，過氧化物體 ，等細(xì)胞器的膜蛋白是由 導(dǎo)肽牽引和定位的 .是肽鏈先合成后再分選和運(yùn)輸?shù)?. 定義 ? 導(dǎo)肽 是位于跨膜蛋白 N端的一段可被水解的片段，導(dǎo)肽被水解后，成熟蛋白失去繼續(xù)跨膜能力。 (3) 有形成兩性 α螺旋的能力 結(jié)構(gòu)特征 : 導(dǎo)肽靶向引導(dǎo)肽鏈進(jìn)入線粒體 三 .與 靶向輸送相關(guān)的分子 分子伴侶（ chaperon) 分子伴侶是細(xì)胞一類保守蛋白質(zhì)，能 識(shí)別肽鏈的非天然構(gòu)象， 通過與疏水 肽段結(jié)合和釋放作用（消耗 ATP),消 除蛋白質(zhì)不正確的疊折， 促進(jìn)各功能 域和整體蛋白質(zhì)的正確折疊。 ? 跨膜后時(shí)蛋白質(zhì)折疊為正確的構(gòu)象。 COPⅡ ?逆向轉(zhuǎn)運(yùn) ：某些蛋白質(zhì)進(jìn)入高爾基體后通過特殊的信號(hào)，從 高爾基體返回內(nèi)質(zhì)網(wǎng) 的小泡的運(yùn)輸過程。對(duì)保持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜體系的穩(wěn)定十分重要。 流體鑲嵌模型 質(zhì)膜蛋白的跨膜次數(shù)取決于特殊的拓?fù)洚悩?gòu)序列： 包括 N端信號(hào)序列， 內(nèi)部信號(hào)序列， 停止序列。 鈣結(jié)合蛋白中結(jié)合鈣離子的模體 鋅指結(jié)構(gòu) ① 定義： ? 分子量大的蛋白質(zhì)三級(jí)結(jié)構(gòu)?？杀环指畛梢粋€(gè)或一個(gè)以上的球狀或纖維狀的區(qū)域，折疊的較為緊密，各行其功能，稱為結(jié)構(gòu)域。 整合酶的作用就是將病毒 DNA插入到宿主基因組中。在抗原 抗體、配體 受體、酶 底物的相互識(shí)別和結(jié)合中，都是這種局部肽鏈間的相互作用。 ? 隨機(jī)多肽文庫 ? 抗原決定簇文庫 （ 1）定義： 人工合成隨機(jī)肽段（ 6～ 9肽）的編碼 DNA片段，并將其插入絲狀噬菌體的外膜蛋白基因中，使其展示在噬菌體表面；每一個(gè)噬菌體表面展示一種多肽序列，它們的集合體即構(gòu)建成一類多肽文庫。 （二）噬菌體表面肽庫 —— 隨機(jī)多肽文庫 （ 3）基本原理 ：含有 關(guān)鍵氨基酸殘基的短肽能模擬蛋白質(zhì)分子中的功能 ； 蛋白質(zhì)分子間的相互作用或識(shí)別是通過 局部肽段間 的相互作用來實(shí)現(xiàn)的； （ 4）特點(diǎn)： 模擬肽是基于肽與酶、肽與抗原 /抗體、肽與受體 /配體之間實(shí)際 結(jié)合的親和力 而篩選出來的，而不是從純理論推導(dǎo)出來的，因而更符合生物體內(nèi)的情況。 ? 這種文庫的基本思路與隨機(jī)多肽文庫沒什么本質(zhì)的區(qū)別，只 是通過 DNA酶 I降解一個(gè)特定的基因片段形成隨機(jī)的 DNA片段（一般 100~300bp大?。?， 用以替代多肽文庫構(gòu)建時(shí)完全隨機(jī)合成的 DNA片段，這樣做可以減小文庫的復(fù)雜性和提高文庫的篩選效率；而且還可以簡(jiǎn)化與載體的連接過程。 ? 目前，又建立了細(xì)菌表面多肽展示文庫等新的展示技術(shù)和種類、真核細(xì)胞和全身在體篩選技術(shù)，為多肽文庫的研究提供了進(jìn)一步完善和發(fā)展的前景。其中我國完成了第 3號(hào)染色體中的 3千萬個(gè)堿基序列測(cè)定任務(wù) 。 其具體內(nèi)容主要包括以下方面： （ 1）鑒定 DNA序列中的基因 即對(duì)基因組序列進(jìn)行 “ 注釋 ” ， 包括鑒定和描述所推測(cè)的基因、非基因序列及其功能。 ? 因?yàn)橥椿蛟谶M(jìn)化過程來自共同的祖先，因此通過核苷酸或氨基酸序列的同源性比較，就可以推測(cè)基因組內(nèi)相似功能的基因。在這方面， YKO（酵母基因剔除）工程（ yeast knockout project）為研究者提供了很多可借鑒的經(jīng)驗(yàn)。轉(zhuǎn)錄組就是指一個(gè)細(xì)胞內(nèi)的一套 mRNA轉(zhuǎn)錄物，包含了某一環(huán)境條件、某一生命階段、某一生理或病理（功能）狀態(tài)下，生命體的細(xì)胞或組織的表達(dá)的基因種類和水平。 ? 在整體水平上研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組成及其活動(dòng)規(guī)律的科學(xué)。 蛋白質(zhì)組學(xué) :是對(duì)一定時(shí)間內(nèi)或某一特定的環(huán)境下 ,組織或有機(jī)體內(nèi)所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)的 ,總的研究的一門科學(xué) .是以動(dòng)態(tài)的方式研究那些可表達(dá)的基因組部分 . ① 通過二維 PAGE（ 2DPAGE） 電泳將細(xì)胞或組織中個(gè)別蛋白質(zhì)加以分離 ②從膠中回收個(gè)別的蛋白質(zhì)進(jìn)行微測(cè)序 或用質(zhì)譜儀進(jìn)行鑒定 ③利用生物信息學(xué)的手段對(duì)上述資料 進(jìn)行比較、分析和儲(chǔ)存。 ? 三大基本技術(shù) ? 雙向電泳技術(shù) ? 計(jì)算機(jī)圖像分析與大規(guī)模數(shù)據(jù)處理技術(shù) ? 質(zhì)譜技術(shù) 指以闡明藥物代謝、藥物運(yùn)轉(zhuǎn)和藥物靶分子的基因的多態(tài)性與藥物作用的一門學(xué)科。 ? 對(duì)比健康狀態(tài)與疾病狀態(tài)的細(xì)胞和組織的蛋白質(zhì)組表達(dá)的分析，用于藥物研究或藥物受體研究或藥物治療前后蛋白質(zhì)表達(dá)的總體分析，以評(píng)價(jià)藥物類似物得結(jié)構(gòu)與活性關(guān)系，尋找高活性的藥物，而發(fā)展起來的一門學(xué)科。