chapter1蛋白質(zhì)(1)-文庫吧
2025-08-01 01:53 本頁面
【正文】 蛋白質(zhì)的旋光度則不能這樣簡單相加 。 凈電荷的計(jì)算 (P166167) ?在生物體中，多肽最重要的存在形式是作為蛋白質(zhì)的亞單位。 ?但是，也有許多分子量比較小的多肽以游離狀態(tài)存在。這類多肽通常都具有特殊的生理功能，常稱為 活性肽 。 ?如：腦啡肽；激素類多肽；抗生素類多肽； 谷胱甘肽(GSH)；蛇毒多肽等。 NHCOC H 2 N H COC H N H COC H3C HC HO HC H2O HC HH N C N H C H C N H C H 2 CC OC HNHH OC H 2 N HN HC H C HC H 3C H 2 C H 3C OOOOC H 2C H2SOO H鵝 膏 覃 堿 的 化 學(xué) 結(jié) 構(gòu) 谷胱甘肽（ GSH） ：三肽（ GluCysGly），廣泛存在于生物細(xì)胞中，含有自由的巰基，具有很強(qiáng)的還原性，可作為體內(nèi)重要的還原劑，保護(hù)某些蛋白質(zhì)或酶分子中的巰基免遭氧化，使其處于活性狀態(tài)。 +H3NTyrGlyGlyPheMetCOO +H3NTyrGlyGlyPheLeuCOO Met腦啡肽 Leu腦啡肽 C y sT y rI L eG l nA s nC y sP r oL e uG l y N H2SS牛 催 產(chǎn) 素C y sT y rG l nA s nC y sP r oSSP h eA r gG l y N H2牛 加 壓 素 二 . 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu) 1. 蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu) (Primary structure)包括： (1)組成蛋白質(zhì)的多肽鏈數(shù)目 . (2)多肽鏈的氨基酸順序， (3)多肽鏈內(nèi)或鏈間二硫鍵的數(shù)目和位置。 ★其中最重要的是多肽鏈的氨基酸順序，它是蛋白質(zhì)生物功能的基礎(chǔ)。 的測定 蛋白質(zhì)氨基酸順序的測定是蛋白質(zhì)化學(xué)研究的基礎(chǔ)。自從1953年 ，現(xiàn)在已經(jīng)有上萬種不同蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)被測定 。 (1) 測定蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)的要求 （ 97%以上）； ； (2)測定步驟 ① 測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目： 通過測定末端氨基酸殘基的摩爾數(shù)與蛋白質(zhì)分子量之間的關(guān)系，即可確定多肽鏈的數(shù)目。 ② 多肽鏈的拆分： 由多條多肽鏈組成的蛋白質(zhì)分子，必須先進(jìn)行拆分。幾條多肽鏈借助非共價(jià)鍵連接在一起，稱為寡聚蛋白質(zhì)，如，血紅蛋白為四聚體，烯醇化酶為二聚體；可用 8mol/L尿素或 6mol/L鹽酸胍 處理，即可分開多肽鏈 (亞基 ). ③ 二硫鍵的斷裂： 幾條多肽鏈通過二硫鍵交聯(lián)在一起?？稍谟?mol/L尿素或 6mol/L鹽酸胍 存在下，用過量的 ?巰基乙醇 處理，使二硫鍵還原為巰基，然后用烷基化試劑保護(hù)生成的巰基，以防止它重新被氧化。 可以通過加入鹽酸胍方法解離多肽鏈之間的非共價(jià)力；應(yīng)用過甲酸氧化法或巰基還原法拆分多肽鏈間的二硫鍵。 ★ 巰基的保護(hù) O O C C H C H2 S HN H 3 +I C H 2 C N H 2OC H 2 O C C lOC H 2 C l O O C C H C H2 SN H 3 +O C C H 2OC H 2 O O C C H C H 2 SN H 3 +C H 2 C N H 2O O O C C H C H2 SN H 3 +④ 測定每條多肽鏈的氨基酸組成，并計(jì)算出氨基酸成分的分子比； ⑤ 分析多肽鏈的 N末端和 C末端 ★ 末端氨基酸的測定： 多肽鏈端基氨基酸分為兩類， N端氨基酸和 C端氨基酸。在肽鏈氨基酸順序分析中，最重要的是 N端氨基酸分析法。末端氨基酸測定的主要方法有： A、二硝基氟苯（ DNFB）法： N末端 游離氨基 ① 酸水解后， N末端 AA成為黃色 DNPAA衍生物 ② 排除側(cè)鏈 DNP衍生物的干擾：用有機(jī)溶劑抽提， 側(cè)鏈 DNP衍生物留在水相 B、丹磺酰氯法 : 在堿性條件下，丹磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯）可以與 N端氨基酸的游離氨基作用，得到丹磺酰 氨基酸。此法的優(yōu)點(diǎn)是丹磺酰 氨基酸有很強(qiáng)的熒光性質(zhì)，檢測靈敏度可以達(dá)到1?109M。 N ( C H 3 ) 2S O 2 C lH 2 N C H CR OH N C H CR OS O 2N ( C H 3 ) 2+水解N ( C H 3 ) 2S O 2 H N C H CR OO H+ 氨基酸丹磺酰氯多肽 N 端丹磺酰 N 端氨基酸丹磺酰氨基酸C、苯異硫氰酸酯 (PITC)法： N末端 游離氨基的反應(yīng)，生成PTHAA衍生物可用有機(jī)溶劑抽提、干燥后做鑒定 D、肼解法： 此法是多肽鏈 C端氨基酸分析法。多肽與肼在無水條件下加熱， C端氨基酸即從肽鏈上解離出來，其余的氨基酸則變成肼化物。肼化物能夠與苯甲醛縮合成不溶于水的物質(zhì)而與 C端氨基酸分離 。 H 2 N C H CR OH N C H CR O OR nCC HH N O Hn 1N 端氨基酸 C 端氨基酸OR nCC HH 2 N O HH 2 N C H CR ON H N H 2 +H+N H 2 N H 2氨基酸酰肼 C 端氨基酸(n1) D、氨肽酶法： 氨肽酶是一種肽鏈 外切酶 ，它能從多肽鏈的 N端逐個(gè)的向里水解。根 據(jù) 不同的反應(yīng)時(shí)間測出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，按反應(yīng)時(shí)間和氨基酸殘基釋放量作動(dòng)力學(xué)曲線，從而知道蛋白質(zhì)的 N末端殘基順序。最常用的氨肽酶是 亮氨酸氨肽酶 ，水解以亮氨酸殘基為 N末端的肽鍵速度最大 。 E、羧肽酶法： 羧肽酶是一種肽鏈外切酶，它能從多肽鏈的 C端逐個(gè)的水解。根 據(jù) 不同的反應(yīng)時(shí)間測出酶水解所釋放出的氨基酸種類和數(shù)量，從而知道蛋白質(zhì)的 C末端殘基順序。目前常用的羧肽酶有四種： A,B,C和 Y； A和 B來自胰臟； C來自柑桔葉； Y來自面包酵母。 羧肽酶 A能水解除 Pro,Arg和 Lys以外的所有 C末端氨基酸殘基； B只能水解 Arg和 Lys為 C末端殘基的肽鍵
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