高效液相色譜-hplc-文庫吧
2025-08-01 01:28 本頁面
【正文】 romatography) 根據(jù) 樣品組分對活性固定相表面吸附親和力的不同實現(xiàn) 分離 2 分 配色譜 (Partition Chromatography) 分離 基于樣品組分在固定相和流動相中的溶解度 (分配系數(shù) )不同 3 離子交換色譜 (Ion Exchange Chromatography) 根據(jù) 樣品組份離子交換親和力的差異分離 ,簡稱離子色譜 (IC) 4 體積 排除色譜 (Size Exclusion Chromatography) GPC(Gel Permeation Chromatography) ? 固定相是疏水性凝膠 ,流動相是有機溶劑 GFC(Gel Filtration Chromatography) ? 固定相是親水性凝膠 ,流動相是水溶液 液相色譜法的 分類 由五大部分組成： ： 溶劑輸送系統(tǒng)（貯液器，高壓泵） 進樣系統(tǒng)（進樣閥等） 分離系統(tǒng)（色譜柱等） 檢測系統(tǒng)（檢測器等） 記錄及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng) HPLC的組成 1. 高壓輸液泵 為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相 （ 10μm） ， 液體的流動相高速通過時 ， 將產(chǎn)生很高的壓力 ， 因此高壓 、 高速是高效液相色譜的特點之一 應具有壓力平穩(wěn) 、 脈沖小 、 流量穩(wěn)定可調(diào) 、 耐腐蝕等特性 高壓輸液泵： 恒壓泵 （ 流量隨阻力變化重現(xiàn)性差 ） 恒流泵 （ 多用 ） ：往復式 注射式 作用：將流動相在高壓下連續(xù)不斷地送入液路系統(tǒng) 。 性能： ① 有足夠的壓力 ② 輸出流量恒定 ， 可調(diào) ③ 輸出壓力平穩(wěn) ④ 泵室體積小 ⑤ 泵體抗腐蝕 、 耐酸 ?梯度洗脫裝置 作用：將兩種或兩種以上溶劑按一定程序連續(xù)改變配比 ， 以改變流動相極性 、 離子強度 、 PH值 、 提高分離效率 。 ? 低壓梯度洗脫 （ 常壓混合 ， 高壓進柱 ， 1個泵 。 ） ? 高壓梯度洗脫 （ 高壓混合 ， 高壓進柱 ， 2個泵 。 ） ?安捷倫泵： 小視頻 ?色譜學堂：泵 高效液相色譜儀流動相脫氣的 目的 使 色譜泵輸液均勻準確，減小脈動。 提高保留時間和色譜峰面積的重現(xiàn)性。 防止氣泡引起尖峰。 使基線穩(wěn)定，提高信噪比。 降低溶劑的紫外吸收本底。 減少死體積。 防止填料氧化。 視頻 ： 脫氣目的 在線脫氣機 在線脫氣機 2. 進樣裝置 ?進樣視頻： 安捷倫 ?進樣視頻： 島津 3. 分離系統(tǒng) 包括色譜柱 、 恒溫器和連接管等部件 。 色譜柱一般用內(nèi)部拋光的不銹鋼制成 。 其內(nèi)徑為 2 ~ 6mm，柱長為 10 ~50cm， 柱形多為直形 ， 內(nèi)部充滿 3～ 10 mm高效微粒固定相 。 柱溫一般為室溫或接近室溫 勻漿法填充柱： 將填料制成懸浮液 ， 在高壓泵的作用下壓入裝有洗脫 液的色譜柱 。 理論塔板數(shù)可達 8萬 /米 4. 檢測器 ? 要求 : 靈敏度高，噪音低，線形范圍寬，響應快 , 對溫度和流速的變化不敏感 ? 檢測器類型 (UVD) (FD) （ ELSD） (RID) (ED) (CD) 1. 紫外 — 可見光度檢測器： ① 固定波長： 254nm ， 低壓汞燈 。 ② 可調(diào)波長： 190～ 800mm， 鎢燈 ， 氘燈 。 ③ 光電二極管矩陣檢測器： 190～ 700nm。 石英窗 接色譜柱 UV 光電倍增管 廢液 光電二極管矩陣檢測器特點： 靈敏度高 、 分辨率好 、 方便 、 快速 、 準確 ， 可掃描得三維流出曲線 紫外檢測器的應用： 對紫外有吸收的組分 ， 且吸光度與濃度成正比 。 紫外檢測器的特點： 靈敏度高 最小檢測濃度 109g/ml 線性范圍寬 對溫度和流速不敏感 ， 可進行梯度洗脫
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