【正文】 ? 麥康凱平板： 具中等強(qiáng)度選擇性，抑菌力略強(qiáng)，有較少革蘭陰性菌不生長(zhǎng)。 ? SS瓊脂： 有較強(qiáng)的抑菌力，用于志賀菌和沙門菌的分離。 ? 堿性瓊脂： 用于從糞便中分離霍亂弧菌及其它弧菌。 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 選擇培養(yǎng)基分離 ? 新型 顯色培養(yǎng)基 ? 利用微生物自身代謝產(chǎn)生的 酶與相應(yīng)顯色底物反應(yīng)顯色 的原理來(lái)檢測(cè)微生物的培養(yǎng)基。 Organism Enzyme Substrate Color Coliforms βgalactosidase XGAL Blue Escherichi a coli β galactosidase β Glucuronidase MUG fluorescence Escherichia coli O157 β galactosidase XGAL Blue 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 選擇培養(yǎng)基分離 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 基于酶與底物反應(yīng)的顯色培養(yǎng)基技術(shù) ? CHROMagar 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 ? Petrifilm 3M Aerobic Count Plate Coliform Count Plate Rapid Coliform Count Plate E. coli /Coliform Count Plate Enterbacteriaceae Count Plate Yeast and Mold Count Plate Staph. aureus Express Count Plate Environmental Listeria Plate 基于酶與底物反應(yīng)的顯色培養(yǎng)基技術(shù) 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 ? 多相鑒定（分類 )（ polyphasic taxonomy）是利用微生物從 分子特性 到 生態(tài)特征 的多種不同信息，綜合 表型 和 基因型 特征進(jìn)行微生物分類鑒定的方法。 形態(tài)學(xué)觀察 細(xì)胞特征 培養(yǎng)特征 生理生化試驗(yàn) 生長(zhǎng)溫度 耐鹽性 碳源利用 發(fā)酵產(chǎn)酸 其他 化學(xué)成分分析 呼吸醌 極性脂 脂肪酸 分枝菌酸 氨基酸和糖 其他 基因型分析 核酸序列 分析 功能基因 分析 DNA雜交 指紋圖譜、 菌株分型 其他 系統(tǒng)發(fā)育分析 16S rDNA ITS區(qū) 26S D1/D2區(qū) 其他 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 形態(tài)學(xué)觀察 細(xì)菌 酵母 絲狀真菌 宏觀 形態(tài)（培養(yǎng)特征） 將培養(yǎng)物劃線或稀釋涂布， 30℃ 培養(yǎng) 16~24小時(shí)，選取劃線或稀釋涂布分離得到單菌落，觀察和記錄菌落的形狀、大小、質(zhì)地、邊緣、顏色、光澤、透明度、隆起等 。 將 培養(yǎng)物 劃線接種于葡萄糖 酵母提取物 蛋白胨固體培養(yǎng)基上， 25℃ 培養(yǎng)2～ 3 d后，進(jìn)行菌落形態(tài)觀察，菌落質(zhì)地 、 菌落顏色 、 菌落表面是否為反光或暗淡 、 菌落是平伏還是隆起 、 菌落邊緣 等 。 標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基 （ CA、 CYA、 WA）平板倒轉(zhuǎn)，向上接種三點(diǎn)，每個(gè)菌株接種兩個(gè)平板，倒置于 25℃溫箱中進(jìn)行培養(yǎng) 7天。觀察菌落直徑、顏色、質(zhì)地、滲出液、菌落反面顏色等特征 。 微觀 形態(tài)（細(xì)胞特征） 將培養(yǎng)物在 30℃ 條件下培養(yǎng) 16~24小時(shí)，挑取對(duì)數(shù)期的單菌落，涂布于事先滴加少量無(wú)菌水的載玻片上，自然干燥，加熱固定，進(jìn)行革蘭氏染色，將制好的染色涂片在 100X40倍的顯微鏡下觀察革蘭氏染色情況、菌體形狀、排列行狀、菌體大小 等細(xì)胞特征。 培養(yǎng)物 劃線接種于葡萄糖 酵母提取物 蛋白胨固體培養(yǎng)基上， 25℃ 培養(yǎng) 2～ 3 d后 ，取酵母菌制作成水浸片，在顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài) 和 無(wú)性繁殖方式 等 。 用無(wú)菌接種針挑取少量培養(yǎng)物，浸入滴有一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液的載玻片上，用接種針將菌絲團(tuán)分散開(kāi)，蓋上蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡），制成水浸片，顯微鏡下觀察菌體形態(tài)特征，包括分生孢子梗、分生孢梗莖、頂囊、?；?、瓶梗、產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)、分生孢子頭、分生孢子等 。 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 裂 葉 狀波 浪 狀圓 鋸 齒 狀細(xì) 圓 鋸 齒 狀齒 形鋸 齒 狀四、微生物鑒定 形態(tài)學(xué)觀察 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 碳源和氮源 運(yùn)動(dòng)性 細(xì)胞壁組成 滲透耐性 能源 氧關(guān)系 發(fā)酵產(chǎn)物 最適 pH和生長(zhǎng)范圍 一般營(yíng)養(yǎng)類型 光合作用色素 最適生長(zhǎng)溫度和范圍 鹽需求及耐性 發(fā)光 次級(jí)代謝產(chǎn)物形成 能量轉(zhuǎn)換機(jī)制 對(duì)代謝抑制劑和抗生素的敏感性 貯藏內(nèi)含物 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 Division based on membrane position: a) gramnegative – have outer and inner membranes and a thin cell wall (Escherichia coli) b) grampositive – have no outer membrane, but have a thicker cell wall (Bacillus subtilis) c) neither gram nor gram+ no cell walls (mycoplasm) 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 ? API (bioMerieux)(biochemical) 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 生理生化 ? BBL Crystal (Becton Dickinson) ? 將傳統(tǒng)的生化反應(yīng)、酶 —底物呈色反應(yīng)與熒光增強(qiáng)顯色技術(shù)結(jié)合，設(shè)計(jì)鑒定反應(yīng)最佳組合。 ? 六類鑒定試驗(yàn)板，可鑒定 500種細(xì)菌 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 化學(xué)成分分析 ? 細(xì)胞質(zhì)膜： 呼吸醌 （甲基萘醌和泛醌） ? 細(xì)胞質(zhì)膜： 極性脂 ? 細(xì)胞質(zhì)膜： 脂肪酸 除放線菌外的細(xì)菌 ? 外膜： 分枝菌酸 ? 細(xì)胞壁： 肽聚糖 （氨基酸和糖） ? 全細(xì)胞： 糖和蛋白質(zhì) 放線菌 m i n2 . 5 5 7 . 5 10 1 2 . 5 15 1 7 . 5 20pA131415161718 F I D 1 A , ( E 1 2 6 1 9 . 6 0 2 \ A 0 0 4 1 0 8 0 . D ) 1.748 2.032 2.110 3.638 4.066 7.066 8.578 8.720 10.226 10.851 11.529 11.696 11.952 12.116醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 基因型分析 ? G+Cmol% ? 16S rDNA, 26S rDNA D1/D2, rDNA ITS region, ? βtubulin gene, calmodulin gene, gyrA gene, pheS gene, recN gene, rpoB gene and other housekeeping genes. ? DNA Barcoding gene sequence analysis, MultiLocus Sequence Analysis (MLSA) ? DNADNA hybridization ? RAPD, RFLP, AFLP, SSCP, EricPCR, BOXPCR, RepPCR , LAMP. 醫(yī)療器械無(wú)菌檢驗(yàn)員操作實(shí)務(wù)與潔凈室管理，北京， 2022 四、微生物鑒定 基因型分析 DNA 指紋圖譜分析 1 2 3 4 EricPCR BOXPCR RepPCR SSCP ERIC－ PCR 以細(xì)菌 DNA中串聯(lián)重復(fù)序列為引物， 通過(guò)擴(kuò)增細(xì)菌基因組中廣泛分布的短重復(fù)序列，在不同種屬個(gè)體間表現(xiàn)為在染色體上存在的位置和拷貝數(shù)不同，以電泳條帶比較分析，揭示基因組間的差異，應(yīng)用于菌株分型。 BOXPCR 根據(jù) BOX插入因子 (大小為 154 bp, 由保守性不同的 box A(57 bp) 、 box B(43 bp)