【正文】 1。 測溫觀察 家兔接種后，上、下午各測體溫一次，24h后，每隔6h測體溫一次。 熱型判定 接種家兔的體溫反應分為四類 A 定型熱反應(++) 潛伏期24～48h，體溫上升呈明顯曲線，超過常溫1℃以上，至少有3個溫次，并稽留18～36h。 B 輕熱反應(+) 潛伏期24～72h，體溫上升有一定曲線，超過常溫0．5℃以上，至少有2個溫次，并稽留12～36h。 C 可疑反應(177。) 潛伏期不到24h，或超過72h以上，體溫曲線起伏不定，或稽留不到12h，或稽留超過36h而不下降。 D 無反應(一) 體溫正常者。 注：常溫 家兔接種前3天所測體溫的平均溫度。 潛伏期 由接種時算起，到體溫上升超過常溫0．5℃以上的間隔時間。 稽留期 ℃算起，到體溫下降到常溫或接近常溫的間隔時間。 毒種收獲 選擇定型熱反應兔，從體溫下降及其以后的24h內(nèi)剖殺，以無菌操作采取脾臟冷凍或凍干保存，作為生產(chǎn)用毒種。 本毒種對家兔無特征性病變，各臟器可以有輕度充血、出血，脾、淋可能有不同程度的腫脹。如發(fā)現(xiàn)有異樣病變或任何時期死亡的兔，均不得使用。 細胞毒的繁殖用細胞維持液，%～%的病毒懸液，接種生長良好的牛細胞，置36～37℃繼續(xù)培養(yǎng)。每隔4～5日收獲換液一次，取二收、三收細胞培養(yǎng)毒液作為生產(chǎn)用毒種。 毒種鑒定 對細胞的感染性 毒種接種牛睪丸或羊腎細胞均不致細胞病變。 對家兔的感染性 毒種接種家兔僅產(chǎn)生特異性熱反應，不致死家兔。 病毒含量 脾毒對家兔的最小感染量為≤105/m1。 安全性 脾毒用無菌生理鹽水作10倍稀釋，細胞毒用原液接種無豬瘟中和抗體的健康敏感豬4頭，每頭肌肉注射5ml，接種后每天上、下午各測體溫、觀察一次，觀察21天。體溫、精神、食欲應正常。 純凈 毒種應無細菌、霉菌(見《無菌（純粹）檢驗標準操作規(guī)程》)、支原體(見《支原體檢驗標準操作規(guī)程》)及外源病毒（見《外源病毒檢驗標準操作規(guī)程》）污染。 特異性 將毒種用抗豬瘟病毒特異性血清中和后，接種家兔2只，在96h內(nèi)不引起熱反應及發(fā)病死亡。 基礎(chǔ)種子代次 為478～490代。 毒種保存在15℃以下保存，脾毒不超過25天，細胞毒不超過6個月。 毒種繼代，脾毒不超過5代，細胞毒不超過3代。 清場和記錄 工作結(jié)束后，應全面清場，對工作間、所用器具、玻璃器皿、物料及廢棄物等應按規(guī)定分別進行處理。 全面填寫《生產(chǎn)工序記錄》。 3 半成品的制備 條件準備 根據(jù)毒液繁殖所需物料及設(shè)備條件，進行全面準備。 按使用時間，將準備好的各種物品提前移入潔凈工作間待用。 在工作開始前30～40min，按凈化級別要求調(diào)整送風量，達到潔凈級別要求。 操作規(guī)則 接種 取已形成良好單層的牛睪丸次代細胞培養(yǎng)瓶，棄去營養(yǎng)液，接種含3％～5％生產(chǎn)用細胞毒種或0．2％～0．3％脾毒種的維持液，置36～37℃繼續(xù)培養(yǎng)。 收獲 接毒后5天作第1次收獲換液，以后每隔4天收獲換液1次。收獲換液時，每個細胞培養(yǎng)瓶須備下列溶液：乳漢液，%碳酸氫鈉，雙抗，健馬血清。收毒的次數(shù)依細胞生長狀況而定，一般收毒在六收左右。 收獲的半成品置15℃以下保存，應不超過3個月。 半成品檢驗 無菌檢驗 將每組抗原分別取樣，、各2支，一組置37℃，另一組置25℃培養(yǎng)，觀察3～5天，應無細菌和霉菌生長（見《無菌（純粹）檢驗標準操作規(guī)程》）。 毒價測定 各收次病毒培養(yǎng)液分別用家兔測定，每1ml病毒含量≥60000個家兔感染量，方可用于配苗。 清場和記錄 工作結(jié)束后，應全面清場，對工作間、所用器具、玻璃器皿、物料及廢棄物等應按規(guī)定分別進行處理。 全面填寫《生產(chǎn)工序記錄》。4 配苗 條件準備 根據(jù)配苗所需物料及設(shè)備條件，進行全面準備。 按使用時間，將準備好的各種物品提前移入潔凈工作間待用。 在工作開始前30～40min，按凈化級別要求調(diào)整送風量，達到潔凈級別要求。 將檢驗合格的半成品于配苗前取出，融化待用。 操作規(guī)則 將檢驗合格的半成品和凍干穩(wěn)定劑，以及抗生素放到100級工作臺上。 把半成品混合在同一容器內(nèi)，按一定比例加入凍干穩(wěn)定劑、適量抗生素，充分混勻。 清場和記錄 工作結(jié)束后，應全面清場，對工作間、所用器具、玻璃器皿、物料及廢棄物等應按規(guī)定分別進行處理。 全面填寫《生產(chǎn)工序記錄》。5 疫苗的分裝 操作內(nèi)容見《分裝崗位標準操作規(guī)程》。6 疫苗的凍干 操作內(nèi)容見《凍干崗位標準操作規(guī)程》。7 軋蓋、貼簽 操作內(nèi)容見《軋蓋、貼簽崗位標準操作規(guī)程》。8 包裝 操作內(nèi)容見《包裝崗位標準操作規(guī)程》III 成品檢驗見《豬瘟活疫苗成品質(zhì)量內(nèi)控標準》。檢驗方法見《豬瘟活疫苗成品檢驗操作規(guī)程》 二標準操作規(guī)程（SOP）1 概念 是指經(jīng)批準用于指示操作的通用性文件或管理辦法，SOP（standard operating procedure）包括生產(chǎn)操作、輔助操作以及管理操作規(guī)程。2 SOP主要內(nèi)容。、頒發(fā)部門、生效日期。 所屬生產(chǎn)（或管理）部門、產(chǎn)品、崗位、適用范圍。（或工作方法）及程序。（中間產(chǎn)品、包裝材料）的名稱、規(guī)格。、規(guī)格及用量。例 題 目細胞制備崗位操作規(guī)程編 碼頁 數(shù)共 頁起 草 人審 核 人批 準 人制定日期審核日期批準日期頒發(fā)部門GMP認證辦公室頒發(fā)數(shù)量生效日期分發(fā)單位公司各部門一、目 的：確保活疫苗生產(chǎn)工作的質(zhì)量。保證生產(chǎn)的順利進行。二、適用范圍：適用于活疫苗細胞制備工序。三、責 任 者：生產(chǎn)車間活疫苗細胞制備人員。四、正 文： 1 條件準備 根據(jù)計劃，提前準備好細胞制備所需物品如萬瓶、瓶皿、三角瓶、漏斗、玻璃珠、解剖用眼科剪子、鑷子、吸管等，按要求分別進行高壓及干熱滅菌備用。 使用前按物品的物流及消毒要求移入潔凈工作間待用。 在工作開始前30～40min，按要求調(diào)整送風量，直至達到所需潔凈級別。 在操作前對所準備的各種用品進行全面的檢查核對。2 操作規(guī)則 雞胚成纖維細胞單層（CEF）的制備 選擇9－10日齡發(fā)育良好的ＳＰＦ雞胚，先用碘酒棉再用酒精棉消毒蛋殼氣室部位，無菌取出雞胚，去頭、四肢和內(nèi)臟，放入滅菌和玻璃器皿內(nèi)，用漢克氏液洗滌胚體，用滅菌的剪刀剪成米粒大的小組織塊，再用漢克氏液洗2－3次，然后加0．25％胰酶溶液（每個雞胚約加４ml），