林業(yè)生物技術(shù)復(fù)習(xí)資料-文庫吧
2025-07-20 17:25 本頁面
【正文】 工程流程包括生產(chǎn)菌種的選育、發(fā)酵條件的優(yōu)化與控制、反應(yīng)器的設(shè)計(jì)及產(chǎn)物的分離、提取與精制。 微生物發(fā)酵類型：微生物菌體發(fā)酵、微生物酶發(fā)酵、微生物代謝產(chǎn)物發(fā)酵、微生物的轉(zhuǎn)化發(fā)酵和生物工程細(xì)胞發(fā)酵。 DNA聚合酶合成DNA方向：5’→3’ DNA功能是遺傳和表達(dá)。 工業(yè)化植物細(xì)胞培養(yǎng)方法：固定化培養(yǎng)、懸浮培養(yǎng)。 酶制劑的制備過程：破碎細(xì)胞、溶劑抽提、分離純化、濃縮、干燥。 植物組織培養(yǎng)包括胚胎培養(yǎng)、器官培養(yǎng)、組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)、原生質(zhì)體培養(yǎng)。 基因工程載體的改造方向：分子量小多拷貝、具有多種限制酶的單切位點(diǎn)、能插入加大的外源DNA片段、具有容易檢測的表現(xiàn)型、去掉大部分非必需序列。 1 標(biāo)記基因是指轉(zhuǎn)入細(xì)胞中對某種抗生素或除草劑具有抗性的基因，該基因的存在表明（目的基因必須轉(zhuǎn)錄到受體細(xì)胞中）。1 發(fā)酵的一般過程（菌種制備）（種子擴(kuò)大培養(yǎng)）（發(fā)酵和提取精制）1 蛋白質(zhì)工程的核心內(nèi)容：（創(chuàng)造和改造）（結(jié)構(gòu)、功能的設(shè)計(jì)和預(yù)測）（蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析）1 一個完整的gene克隆過程包括：目的基因的獲取，基因載體的選擇與構(gòu)建，目的基因與載體的拼接，重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞，篩選并無性繁殖含重組分子的受體細(xì)胞。 1 克隆載體必須具備的條件是（自主復(fù)制能力）（多克隆位點(diǎn)）（選擇性標(biāo)記基因）（載體安全且分子量小拷貝數(shù)高）1 蛋白質(zhì)工程的基本內(nèi)容：（設(shè)計(jì)預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)）（推測應(yīng)有的氨基酸序列）（找到相對應(yīng)的RNA）（找到相對應(yīng)的DNA）1 Ⅱ類限制性內(nèi)切酶回文序列：AAATTT，GATATC；Ⅰ類非特異切割；Ⅲ類特異切割位點(diǎn)和識別位點(diǎn)不同；Ⅱ類是基因工程中主要的限制酶，切割位點(diǎn)分平末端和粘性末端（P23）。1 DNA連接酶的連接方式及產(chǎn)物：催化DNA中相鄰的5′磷酸基與3′羥基間形成磷酸二酯鍵。1 目的基因分離克隆方法：化學(xué)法合成目的基因、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增目的基因、基因文庫技術(shù)分離目的基因。 重組體導(dǎo)入受體細(xì)胞方法：轉(zhuǎn)化、感染、轉(zhuǎn)染。2 常用的轉(zhuǎn)基因方法：氯化鈣導(dǎo)入法、PEG介導(dǎo)的細(xì)菌原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化、電穿孔法。2 植物土壤農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化方法：點(diǎn)擊法、基因槍法。2 重組體鑒定方法：載體遺傳標(biāo)記法（抗藥性篩選法、β半乳糖苷酶顯色反應(yīng)選擇法）、根據(jù)插入序列的表型特征選擇重組體分子的直接選擇法、限制性酶切鑒定、核酸雜交鑒定方法（菌落原位雜交法、Southern雜交）、PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析鑒定、核苷酸序列測定法、免疫化學(xué)檢測法（放射性抗體檢測法、免疫沉淀檢測法）。2 酶的提取方法：酸、堿、鹽溶液提??；有機(jī)溶液提??；變性劑提取。2 固定化酶的特點(diǎn)：(1)優(yōu)點(diǎn)：不溶于水，易于與產(chǎn)物分離；可反復(fù)使用；可連續(xù)化生產(chǎn)；穩(wěn)定性好。(2)缺點(diǎn)：固定化過程中往往會引起酶的失活。2 酶的分子修飾方法：通過化學(xué)方法對已分離出來的酶進(jìn)行分子修飾，或通過基因工程的方法改變酶的編碼基因來改造酶。2 遺傳標(biāo)記的種類：形態(tài)學(xué)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、生化標(biāo)記、分子標(biāo)記。2 植物基因工程中常用的標(biāo)記基因：抗生素類選擇標(biāo)記基因（鑒定良性基因）、除草劑類選擇標(biāo)記基因、gus基因、熒光素酶基因。2 基因工程又稱DNA重組技術(shù)，實(shí)施四個必要條件：工具酶、目的基因、載體和受體細(xì)胞。 cDNA克隆與基因組克隆的不同：基
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