【正文】 器材：一次性抗凝真空采血管、持針器、蝶形針等。 抗凝劑： 通常采用（乙二胺四乙酸）或（枸櫞酸鈉） ，并符合不同檢測方法對樣品的要求。 樣品標(biāo)識：在采血管上貼對應(yīng)的樣品編號，并填寫病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表）。 樣品采集量：通常采集全血～, 采集的樣品量應(yīng)盡可能與定量采血管的刻度一致，采集量過多或不足，會造成血液凝固或被稀釋。 樣品的混勻：采集血液后，立即輕輕上下顛倒抗凝管約次，使血液與抗凝劑充分混勻。 獲取其它信息：包括采集對象的基本信息和流行病學(xué)資料，抗病毒藥物使用情況，以往的實驗室檢測結(jié)果，在病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表）上備注欄注明。 樣品的處理 一般要求在采血后小時內(nèi)進(jìn)行離心，室溫下離心分鐘。 分離后，吸出血漿，分裝到無菌的聚丙烯螺口凍存管中，并注明分裝時間。在凍存管上貼樣品編號。 血漿樣品不能滅活。 做好樣品處理記錄。 樣品的保存：根據(jù)血漿檢測時間而定，天內(nèi)可在4℃暫時保存，個月以內(nèi)應(yīng)凍存于20℃以下，個月以上應(yīng)置于70℃以下。不推薦使用自動除霜冰箱。、泄漏及污染。 樣品的運輸根據(jù)《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運輸管理規(guī)定》的要求運輸，并嚴(yán)格控制運輸?shù)睦鋬鰻顟B(tài)，防止樣品凍融。 樣品的發(fā)送和接收（附表）。，核對樣品數(shù)量，檢查樣品狀況，按病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表）核對。. 樣品管破損造成樣品溢出、出現(xiàn)明顯溶血、凝血的樣品，不宜作病毒載量檢測；如果樣品已經(jīng)融化， 4℃保存并盡快檢測，記錄凍融一次。第四章 常用病毒載量檢測方法簡介目前常用的 測定方法為核酸序列依賴性擴(kuò)增() 技術(shù)，代表產(chǎn)品為 及其升級產(chǎn)品熒光實時技術(shù) 儀；逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)（）技術(shù)，代表產(chǎn)品為 ；分枝信號放大系統(tǒng)（）技術(shù)，代表產(chǎn)品為 分析儀；實時熒光定量擴(kuò)增技術(shù)（ ），與國產(chǎn)試劑盒均屬此類技術(shù)。． 核酸序列依賴性擴(kuò)增()技術(shù)最早產(chǎn)品為 定量測定方法，最近被 新一代熒光實時定量所取代。技術(shù)是一種等溫擴(kuò)增系統(tǒng)，其擴(kuò)增基礎(chǔ)在于系統(tǒng)內(nèi)的混合酶系統(tǒng)，此系統(tǒng)內(nèi)含有逆轉(zhuǎn)錄酶和多聚酶在體外模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒體內(nèi)復(fù)制過程。此方法可分成四個步驟：核酸釋放、提取、擴(kuò)增和測定。擴(kuò)增后的產(chǎn)物使用 電化學(xué)發(fā)光（）系統(tǒng)進(jìn)行檢測和定量，此系統(tǒng)包括親和素標(biāo)記的磁珠、生物素標(biāo)記的核苷酸片段（此片段可與新合成的產(chǎn)物的一端互補(bǔ)結(jié)合）及可特異與四種產(chǎn)物結(jié)合的探針（探針上標(biāo)記有銣元素），這四種探針可分別與不同的產(chǎn)物結(jié)合。將四種探針分別置于不同的反應(yīng)管內(nèi)，在適當(dāng)?shù)臈l件下（410C）幾種成分將結(jié)合在一起，形成復(fù)合體。這些復(fù)合體可在讀數(shù)儀中被分別讀取銣元素的激發(fā)信號，根據(jù)野生型病毒核酸測定值與其他三個內(nèi)標(biāo)物測定值的比較可得到野生型病毒的拷貝數(shù)。 結(jié)合（核酸序列基礎(chǔ)分析）技術(shù)與分子熒光探針技術(shù)（ ）檢測血漿中的 水平。這種結(jié)合的方法使用了實時擴(kuò)增分析（ ），提高了對診斷質(zhì)量的要求。． 逆轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)技術(shù)目前用得最廣泛的儀器為 和相應(yīng)的檢測試劑 版。聚合酶鏈反應(yīng)人類免疫缺陷病毒定量檢測試劑盒版是在聚合酶鏈反應(yīng)全自動診斷儀上定量測定人血漿中人類免疫缺陷病毒型（）水平的體外核酸擴(kuò)增檢測試劑盒。該檢測試劑盒可以通過兩種樣品處理程序進(jìn)行檢測，即標(biāo)準(zhǔn)的和超敏感的操作步驟，定量測定含量為拷貝毫升 。標(biāo)準(zhǔn)的樣品處理程序中， 通過應(yīng)用裂解液裂解病毒顆粒從而直接從血漿中分離出來，然后用乙醇沉淀。采用超敏感的制備方法，血漿中病毒顆粒首先通過高速離心濃縮，然后用裂解試劑裂解病毒顆粒。再用乙醇沉淀。 試劑盒版包括個主要步驟：試劑準(zhǔn)備；樣品制備；靶的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生；用特異互補(bǔ)引物進(jìn)行靶 擴(kuò)增；通過比色與探針結(jié)合的擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。病毒的定量檢測是采用定量標(biāo)準(zhǔn)品來完成的。定量標(biāo)準(zhǔn)品是包括作為 靶引物結(jié)合部位和擴(kuò)增子單一探針結(jié)合區(qū)的非感染性 轉(zhuǎn)錄物。將已知拷貝數(shù)的定量標(biāo)準(zhǔn)品加到每一個樣品中和靶序列一起共同進(jìn)行樣品制備、逆轉(zhuǎn)錄、擴(kuò)增、雜交和檢測并和靶序列一起擴(kuò)增。 分析儀根據(jù)定量標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)據(jù)計算每一個樣品的 的含量。該定量標(biāo)準(zhǔn)品補(bǔ)償了抑制因素的影響并且擴(kuò)增過程的質(zhì)控使每一個樣品的– 得以準(zhǔn)確定量。． 分枝（）技術(shù)分枝測定技術(shù)基于其獨特的信號放大系統(tǒng)，即分枝信號放大系統(tǒng)，這是一個人工合成的分枝，分枝的分枝可結(jié)合多個酶標(biāo)記物，從而將病毒的信號放大，以便進(jìn)行檢測。此檢測系統(tǒng)不涉及核酸擴(kuò)增反應(yīng)。本方法定量系統(tǒng)中沒有內(nèi)標(biāo)記物，每次實驗設(shè)置一系列外部標(biāo)記，通過實驗樣品反應(yīng)強(qiáng)度與外部標(biāo)記樣品強(qiáng)度的比較確定實驗樣品的病毒拷貝數(shù)。每一種檢測都有各自的步驟或試劑。檢測通常包括以下步驟：（）將患者血清或血漿連同含有特異的合成寡聚核苷酸靶探針的裂解液加到微孔中；（）孵育。此步驟可釋放病毒核酸，降解酶或使變性, 然后靶探針結(jié)合到靶或并固定在固相板上；（）冷卻洗板；（）加信號放大探針()到各孔內(nèi)；（）孵育. 此步驟使雜交到靶探針的相應(yīng)部位；（）冷卻洗板；（）加標(biāo)記探針到各孔內(nèi)；（）孵育，此步驟使酶標(biāo)記的探針雜交到上；（）冷卻洗板；（）加化學(xué)發(fā)光底物到各孔中；（）孵育，此步驟讓酶和底物相互作用，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。發(fā)射的光強(qiáng)以相對光量值()表示。產(chǎn)生的光強(qiáng)直接與各樣品中病毒或的載量成正比。各樣品中病毒核酸的含量由與樣品一同處理的標(biāo)準(zhǔn)所制作的標(biāo)準(zhǔn)曲線計算獲得。． 實時（）熒光定量擴(kuò)增實時熒光定量技術(shù)，是指在反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標(biāo)代表值）。因此，只要獲得未知樣品的值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。實時熒光定量擴(kuò)增的實驗檢測過程可分為：（）樣品制備,抽提和濃縮目標(biāo)分子，并除去可能存在的抑制因子。（） ，檢測的產(chǎn)物使用熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針。檢測的原理基于熒光信號增長曲線與循環(huán)數(shù)相關(guān)。（）反應(yīng)，病毒利用逆轉(zhuǎn)錄酶將逆轉(zhuǎn)錄為，然后通過聚合酶對特定片段進(jìn)行擴(kuò)增。（）擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測，基于檢測閾值的設(shè)定，當(dāng)病毒載量高時，低循環(huán)數(shù)即能檢測到熒光信號，當(dāng)病毒載量低時，高循環(huán)數(shù)時才能檢測到熒光。循環(huán)數(shù)與樣品載量成線性關(guān)系。利用標(biāo)準(zhǔn)品制作循環(huán)數(shù)與載量的標(biāo)準(zhǔn)曲線就能對樣品載量進(jìn)行定量檢測。第五章 室內(nèi)質(zhì)量控制內(nèi)部質(zhì)量控制是在良好實驗室整體環(huán)境支持下，從樣品接收到發(fā)出報告整個過程每個環(huán)節(jié)的管理過程，包括：（）人員；（）實驗室分區(qū)和環(huán)境；（）儀器；（）檢測過程（試劑、操作過程，質(zhì)控品使用）；（）數(shù)據(jù)。人員病毒載量檢測人員分為檢驗人、復(fù)核人、簽發(fā)人。 所有相關(guān)檢驗人員需經(jīng)操作培訓(xùn)，能獨立熟練地操作，并經(jīng)考核合格，持證上崗。、簽發(fā)