【正文】 載量檢測納入艾滋病相關(guān)輔助診斷和治療監(jiān)測工作，但大多數(shù)實驗室開展工作的時間較短，經(jīng)驗不足，因此，急需加強該領(lǐng)域的培訓(xùn)和質(zhì)量控制工作，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。本指南由中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心艾滋病參比實驗室組織有關(guān)專家撰寫，由中國疾病預(yù)防控制中心批準(zhǔn)執(zhí)行。為了加強質(zhì)控和保證檢測質(zhì)量，并得到國際上的認(rèn)可，艾滋病參比實驗室年開始參加美國組織的病毒載量檢測能力驗證工作。為了進一步規(guī)范艾滋病實驗室病毒載量檢測，建立標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制程序，準(zhǔn)確開展各項檢測及質(zhì)量控制工作，特制定本指南。指南編寫過程中，也仔細(xì)聽取了實驗室一線檢測人員的具體需求和建議，并補充了大量的實驗數(shù)據(jù)，包括病毒載量檢測值的穩(wěn)定性、凍融影響實驗與不同檢測方法之間比較的實驗數(shù)據(jù)等。中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心主任吳尊友研究員在本指南編寫過程中提出了重要的修改意見，在此特別致謝。目的 指導(dǎo)病毒載量檢測工作，規(guī)范實驗室質(zhì)量控制與管理。樣品處理區(qū)：：二級（320XXg，可離心 管子）：4℃，20℃，80℃：℃（μ、μ、μ），為專用設(shè)備（無和酶）：震動頻率可調(diào) 一次性工作服、帽、口罩、無粉手套、鞋套試劑準(zhǔn)備區(qū)：（或密閉工作臺）（μ、μ、μ），為專用設(shè)備（18000g，可離心 管子）：4℃，20℃ 計時器，震動頻率可調(diào)（無、酶） 管子（無和酶）和 試管架、帽、口罩、無粉手套、鞋套擴增產(chǎn)物分析區(qū)： 病毒載量檢測儀（μ、μ、μ）：4℃，20℃ ( 41℃ )：震動頻率可調(diào)（無、酶）、帽、口罩、無粉手套、鞋套 病毒載量檢測實驗室設(shè)備分布示意圖病毒載量檢測實驗室設(shè)備分布示意圖病毒載量儀,加樣器離心機冰箱，4℃水浴箱洗手池紫外燈擴增產(chǎn)物分析區(qū)生物安全柜加樣器離心機冰箱，20℃冰箱水浴箱洗手池紫外燈樣品處理區(qū)超凈工作臺加樣器漩渦振蕩器冰箱，4℃實驗臺紫外燈試劑準(zhǔn)備區(qū)：各區(qū)獨立、控制風(fēng)向、因地制宜、方便工作。 擴增產(chǎn)物分析區(qū)可保持低度負(fù)壓狀態(tài)，使空氣流向始終由室外向內(nèi)，以防止擴增產(chǎn)物造成其他區(qū)域的交叉污染。第三章 樣品的采集、處理、保存和運輸 樣品采集、處理、保存和運輸，按照所使用檢測方法的要求嚴(yán)格執(zhí)行。 樣品標(biāo)識：在采血管上貼對應(yīng)的樣品編號，并填寫病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表）。 樣品的處理 一般要求在采血后小時內(nèi)進行離心，室溫下離心分鐘。 做好樣品處理記錄。，核對樣品數(shù)量，檢查樣品狀況，按病毒載量檢測樣品送檢及接收單（附表）核對。技術(shù)是一種等溫擴增系統(tǒng)，其擴增基礎(chǔ)在于系統(tǒng)內(nèi)的混合酶系統(tǒng)，此系統(tǒng)內(nèi)含有逆轉(zhuǎn)錄酶和多聚酶在體外模擬逆轉(zhuǎn)錄病毒體內(nèi)復(fù)制過程。這些復(fù)合體可在讀數(shù)儀中被分別讀取銣元素的激發(fā)信號，根據(jù)野生型病毒核酸測定值與其他三個內(nèi)標(biāo)物測定值的比較可得到野生型病毒的拷貝數(shù)。聚合酶鏈反應(yīng)人類免疫缺陷病毒定量檢測試劑盒版是在聚合酶鏈反應(yīng)全自動診斷儀上定量測定人血漿中人類免疫缺陷病毒型（）水平的體外核酸擴增檢測試劑盒。再用乙醇沉淀。將已知拷貝數(shù)的定量標(biāo)準(zhǔn)品加到每一個樣品中和靶序列一起共同進行樣品制備、逆轉(zhuǎn)錄、擴增、雜交和檢測并和靶序列一起擴增。此檢測系統(tǒng)不涉及核酸擴增反應(yīng)。此步驟可釋放病毒核酸，降解酶或使變性, 然后靶探針結(jié)合到靶或并固定在固相板上；（）冷卻洗板；（）加信號放大探針()到各孔內(nèi)；（）孵育. 此步驟使雜交到靶探針的相應(yīng)部位；（）冷卻洗板；（）加標(biāo)記探針到各孔內(nèi)；（）孵育，此步驟使酶標(biāo)記的探針雜交到上；（）冷卻洗板；（）加化學(xué)發(fā)光底物到各孔中；（）孵育，此步驟讓酶和底物相互作用，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。． 實時（）熒光定量擴增實時熒光定量技術(shù)，是指在反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個進程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量擴增的實驗檢測過程可分為：（）樣品制備,抽提和濃縮目標(biāo)分子，并除去可能存在的抑制因子。（）擴增產(chǎn)物的檢測，基于檢測閾值的設(shè)定，當(dāng)病毒載量高時，低循環(huán)數(shù)即能檢測到熒光信號，當(dāng)病毒載量低時，高循環(huán)數(shù)時才能檢測到熒光。人員病毒載量檢測人員分為檢驗人、復(fù)核人、簽發(fā)人。不同檢測方法的分區(qū)功能和要求可有所不同。 實驗室環(huán)境的要求；，應(yīng)避免陽光直射設(shè)備；℃；；，病毒載量檢測儀應(yīng)配備穩(wěn)壓電源；，無灰塵。 病毒載量檢測儀、離心機可以委托公司校準(zhǔn)，每年一次。按實際使用量的要求配制大樣品量的血漿（推薦每次配置量可使用兩年），用μ濾膜過濾除菌，充分混勻。在質(zhì)控圖上顯示所有次質(zhì)控品檢測值的值、平均值以及 值范圍。 試劑盒質(zhì)控品的使用每次實驗按照試劑盒說明書的要求使用試劑盒提供的質(zhì)控品，并滿足質(zhì)控品的要求。 復(fù)核人對檢測結(jié)果進行仔細(xì)復(fù)核并對結(jié)果提出結(jié)論、簽字。艾滋病參比實驗室自年開始參加由美國國立衛(wèi)生研究院（）組織的病毒載量檢測考核工作，考核盤有個樣品組成，分別考核實驗室檢測的靈敏度、特異性、穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，通過將結(jié)果與國際上參與考核的所有實驗室結(jié)果進行比對評估，給出綜合評估結(jié)果。建議國內(nèi)所有從事病毒載量檢測的實驗室參加該項目，在規(guī)定時間內(nèi)使用有效試劑與實驗樣品一起檢測，填寫病毒載量實驗結(jié)果報告單（附表），上報艾滋病參比實驗室。 T頻率：一年次，分別為月和月。 T樣品的檢測：要求將考核樣品同實驗室常規(guī)樣品一起檢測，由常規(guī)檢測人員進行，不應(yīng)作為特殊樣品處理。：一個樣品結(jié)果在177。 評估結(jié)果反饋：艾滋病參比實驗室根據(jù)各實驗室的兩次考核結(jié)果，每年反饋最后的評估結(jié)果。第七章 實驗室生物安全相關(guān)依據(jù)《病原微生物實驗室生物安全管理條例》、《實驗室生物安全通用要求》、《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣品運輸管理規(guī)定》、《人間傳染的高致病性病原微生物實驗室和實驗活動生物安全審批管理辦法》和《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》。，以防樣品濺出或產(chǎn)生交叉污染。每個人的安全教育均應(yīng)記錄在實驗室和人事檔案中。、檢測和報告，注意做好保密工作。176。靶序列吸光度偏低( )所有的稀釋度的數(shù)值低于檢測的線性范圍。（）如果采用標(biāo)準(zhǔn)樣品處理程序，用陰性的人血漿稀釋原始樣品并用標(biāo)準(zhǔn)的樣品處理程序重新檢測。結(jié)果偏低（）計算的拷貝數(shù)低于測定下限。結(jié)果偏高（）計算的拷貝數(shù)高于測定上限。報告的結(jié)果應(yīng)乘以稀釋因子。如果需要定量的結(jié)果，稀釋原始樣品用標(biāo)準(zhǔn)的樣品處理程序重新檢測。提示有不合乎稀釋順序的值出現(xiàn)。（三） 問題