【正文】 的定值一般而言，檢驗(yàn)工作使用的標(biāo)準(zhǔn)品屬應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)。配制或供應(yīng)這類標(biāo)準(zhǔn)品的實(shí)驗(yàn)室或廠商具有符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的純品。稱取一定量的純品，然后將其溶解，在容量瓶?jī)?nèi)用溶劑稀釋至容積刻度，混勻，標(biāo)準(zhǔn)液配制完成。由稱量法獲得的稱量值和容量法配制的容積，計(jì)算出該標(biāo)準(zhǔn)品濃度。檢定部門(mén)抽樣測(cè)定，結(jié)果在規(guī)定范圍內(nèi)屬合格。即使測(cè)定檢定結(jié)果在范圍的上、下限，也不能將實(shí)測(cè)值作為標(biāo)準(zhǔn)值。因?yàn)闇y(cè)定值的可靠性取決于檢定方法，一般的分析方法的可靠性不如分析化學(xué)公認(rèn)的稱量法和容量法。所以標(biāo)準(zhǔn)品的定值由稱量和容積計(jì)算確定。檢定不合格即報(bào)廢，決不可將實(shí)測(cè)值替代修正。二、校準(zhǔn)品的定值校準(zhǔn)值隨方法而異校準(zhǔn)品的大多來(lái)源為人的樣品混合物，如混合血清。本身內(nèi)含被檢分析物，制備時(shí)可添加某些分析物增加含量。校準(zhǔn)品中被檢分析物的含量無(wú)法由稱量法和容量法確定，只能倚賴于分析方法。校準(zhǔn)品的校準(zhǔn)值必須取決于分析方法或檢測(cè)系列。新鮮病人標(biāo)本是最佳校準(zhǔn)品 由于所有校準(zhǔn)品都是處理過(guò)的樣品，和新鮮病人標(biāo)本有著基體差異。若使用公認(rèn)的參考方法去標(biāo)化測(cè)定校準(zhǔn)品，測(cè)定程序是嚴(yán)密的，測(cè)定值是可靠的。但使用該測(cè)定值去校準(zhǔn)常規(guī)的檢測(cè)系列時(shí)，校準(zhǔn)品中被檢分析物參與反應(yīng)時(shí)的表現(xiàn)明顯不同于新鮮病人標(biāo)本，不能將參考方法系列的準(zhǔn)確度通過(guò)校準(zhǔn)品傳遞給病人標(biāo)本。所有用于檢驗(yàn)中的檢測(cè)方法、儀器、試劑等都是用來(lái)檢測(cè)病人新鮮標(biāo)本的，不是用來(lái)檢測(cè)校準(zhǔn)品這樣的處理過(guò)樣品。如果先用公認(rèn)的參考方法檢測(cè)病人標(biāo)本，再以具有參考值的病人標(biāo)本去校準(zhǔn)某檢測(cè)系列（包括方法、試劑、儀器），此時(shí)該檢測(cè)系列再檢測(cè)其他新鮮病人標(biāo)本時(shí)，這些病人標(biāo)本結(jié)果的溯源性可上溯至公認(rèn)的參考方法。也即用新鮮病人標(biāo)本是校準(zhǔn)檢測(cè)系列的最佳校準(zhǔn)品。用這種方式校準(zhǔn)，能使同一個(gè)檢測(cè)系列在不同實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)新鮮病人標(biāo)本時(shí)，檢驗(yàn)結(jié)果在實(shí)驗(yàn)室間具可比性。一些大公司正是按照這樣的認(rèn)識(shí)為校準(zhǔn)品定值。校準(zhǔn)值不是測(cè)定值，是糾正的調(diào)整值 (Corrected Value) 制備的校準(zhǔn)品，專用于指定的某公司型號(hào)的儀器、試劑、方法和檢測(cè)程序組成的檢測(cè)系統(tǒng)。因此校準(zhǔn)品只能為這樣的系統(tǒng)服務(wù)，起校準(zhǔn)作用，不能對(duì)其他系統(tǒng)作校準(zhǔn)。具多個(gè)校準(zhǔn)值的校準(zhǔn)品 專門(mén)供應(yīng)試劑盒的廠商，為了使他們的試劑盒用于各種類型、型號(hào)的儀器和方法，也同時(shí)為客戶提供校準(zhǔn)品。同一個(gè)校準(zhǔn)品適用于不同系統(tǒng)必須有不同的校準(zhǔn)值，這樣的做法充分說(shuō)明校準(zhǔn)值的專用特性。決不能一個(gè)校準(zhǔn)品、一個(gè)校準(zhǔn)值、一種試劑盒用于各種不同的儀器；也不能一個(gè)校準(zhǔn)品、一個(gè)校準(zhǔn)值，用于不同的、已具有原試劑配套的儀器系列；無(wú)論哪一種方式均使病人樣品的檢測(cè)結(jié)果不可靠，也不具有溯源性。第三章 分析性能的評(píng)估第一節(jié) 分析誤差分析性能的評(píng)估是對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)作病人標(biāo)本檢測(cè)時(shí)可能具有的誤差。實(shí)驗(yàn)室一定要使用可靠的檢測(cè)系統(tǒng)，它的穩(wěn)定狀態(tài)誤差較小，在臨床上屬可接受低水平之內(nèi)，方可用于常規(guī)工作。這是保障檢驗(yàn)結(jié)果質(zhì)量的前提。從誤差的性質(zhì)上，可以將誤差分為隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差。性能評(píng)估實(shí)驗(yàn)也相應(yīng)設(shè)計(jì)為了解不同性質(zhì)的誤差。最后，還需綜合起來(lái)反映總的誤差水平。一、隨機(jī)誤差（Random Error,RE）或不精密度 (Imprecision)這類誤差可正可負(fù)，亦無(wú)一定的大小，稱為隨機(jī)誤差。若將某標(biāo)本作多次檢測(cè)，用均值（）表示這組檢測(cè)值的平均水平，標(biāo)準(zhǔn)差（s）為各檢測(cè)值對(duì)于均值的離散程度的指標(biāo)。檢驗(yàn)的特點(diǎn)是每個(gè)標(biāo)本只做一次就發(fā)出檢驗(yàn)報(bào)告，因此檢驗(yàn)結(jié)果Xi是對(duì)標(biāo)本作多次檢測(cè)的一個(gè)抽樣。所有重復(fù)檢驗(yàn)的Xi值以值為中心，它們和的差異有大有小，方向各異；這即是隨機(jī)誤差的表現(xiàn)。臨床希望同一標(biāo)本的各次檢測(cè)值Xi重復(fù)性好，這是人們對(duì)精密度的追求。精密度的定義是重復(fù)檢測(cè)值間的一致性。度量精密度好壞是不精密度。重復(fù)檢測(cè)值的s大小反映在均值下的精密度水平，也可以變異系數(shù)(CV)表示相對(duì)變異大小。檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告內(nèi)具有的隨機(jī)誤差，常以95 % 可能性出現(xiàn)的最大隨機(jī)誤差量表示。也即發(fā)出的報(bào)告都認(rèn)為是均值，但是實(shí)際報(bào)告值Xi和具有的最大差異（95 % 可能性），以這樣大小的差異量表示標(biāo)本只做一次檢驗(yàn)發(fā)出的報(bào)告中具有的隨機(jī)誤差估計(jì)量。寫(xiě)作RE=(在時(shí))。須注意的是，實(shí)際報(bào)告結(jié)果中的隨機(jī)誤差（相對(duì)于而言），有大有小。有的和均值很接近。若這樣的隨機(jī)誤差小于臨床允許誤差，是實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為該檢測(cè)系統(tǒng)可用來(lái)檢測(cè)病人標(biāo)本的前提。二、系統(tǒng)誤差(Systematic Error,SE)或不準(zhǔn)確度(Inaccuracy)這類誤差有一定的方向和大小，稱為系統(tǒng)誤差。有系統(tǒng)誤差的結(jié)果是不準(zhǔn)確的。準(zhǔn)確度的廣義定義是：檢測(cè)值和真值的一致性。但是它們之間的差異既有隨機(jī)誤差，也有系統(tǒng)誤差。檢驗(yàn)中為了確切表示準(zhǔn)確度常以相對(duì)準(zhǔn)確度表示，即：檢測(cè)均值和真值的一致性。它們的差異稱為偏倚，亦即系統(tǒng)誤差。它使檢測(cè)結(jié)果偏高或偏低，有一定的大小。度量準(zhǔn)確度亦以不準(zhǔn)確度即偏倚來(lái)表示。造成檢測(cè)系統(tǒng)不準(zhǔn)確的因素大致上有兩方面：一是檢測(cè)系統(tǒng)自身的，如方法特異性差或嚴(yán)重的基體效應(yīng)等；二是檢測(cè)系統(tǒng)和某一認(rèn)可的檢測(cè)系統(tǒng)或方法，同時(shí)對(duì)一批病人標(biāo)本作對(duì)比檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果的差異是兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)間的系統(tǒng)誤差。后一種系統(tǒng)誤差更被大家重視?，F(xiàn)今，在表達(dá)檢測(cè)系統(tǒng)或方法的準(zhǔn)確度時(shí)，直接指的是檢測(cè)系統(tǒng)間或方法學(xué)比較的系統(tǒng)誤差。兩個(gè)檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)同批標(biāo)本檢測(cè)后，以公認(rèn)的檢測(cè)系統(tǒng)或方法（亦稱為比較方法，Comparative method）為X，被評(píng)價(jià)的檢測(cè)系統(tǒng)或方法（Test method）為Y。度量系統(tǒng)誤差(SE)的方式有兩種。在標(biāo)本的檢測(cè)值都比較集中時(shí)，兩個(gè)系統(tǒng)檢測(cè)病人標(biāo)本的結(jié)果均值間的差，表示在X方法的均值時(shí)兩方法間具有的系統(tǒng)誤差。寫(xiě)作：－ （在時(shí)）。在標(biāo)本檢測(cè)值分布較寬、有較大的范圍，如果各標(biāo)本的成對(duì)結(jié)果在坐標(biāo)紙上具有直線趨勢(shì)時(shí)，可以用直線回歸統(tǒng)計(jì)歸納。這個(gè)方式可以了解兩方法在檢測(cè)過(guò)的濃度范圍的任一處的系統(tǒng)誤差。若某醫(yī)學(xué)決定水平濃度為Xc；在回歸式上，相對(duì)與Xc的被評(píng)價(jià)方法的估計(jì)值為,則。三、總誤差（Total Error,TE）病人檢測(cè)結(jié)果內(nèi)含的誤差應(yīng)包括隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差。所以反映檢測(cè)系統(tǒng)穩(wěn)定狀態(tài)總誤差是隨機(jī)誤差和系統(tǒng)誤差的加成，為T(mén)E=RE+SE。因?yàn)椴∪藰?biāo)本的每個(gè)項(xiàng)目只做一次檢測(cè)，結(jié)果中的誤差的“最壞”表現(xiàn)即為T(mén)E。實(shí)驗(yàn)室人員習(xí)慣將誤差分別看成不精密度（隨機(jī)誤差）和不準(zhǔn)確度（偏倚），而醫(yī)生和病人關(guān)心的是總誤差有多大。總誤差反映了客戶和消費(fèi)者對(duì)檢測(cè)性能的估計(jì)，這也是判斷檢測(cè)系統(tǒng)可接受性中最重要的參數(shù)。第二節(jié) 不精密度的估計(jì)醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室對(duì)病人標(biāo)本檢測(cè)時(shí)，由于該行業(yè)的沿襲特點(diǎn)，一直是對(duì)每份標(biāo)本只作一次檢測(cè)發(fā)出報(bào)告。這也是為什么國(guó)際上將不精密度性能列為實(shí)驗(yàn)方法、儀器或試劑盒分析性能的第一位的原因。檢測(cè)結(jié)果必須具重現(xiàn)性，也即有良好的精密度。對(duì)某樣品作多次重復(fù)測(cè)定，均值是這組測(cè)定值的平均水平。標(biāo)準(zhǔn)差s是各重復(fù)測(cè)定值對(duì)于均值的離散程度指標(biāo)。標(biāo)準(zhǔn)差大小反映了該檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度水平。影響標(biāo)準(zhǔn)差大小的因素很多。因此表示檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度時(shí)，應(yīng)在使用什么樣品，在什么分析物濃度下，作精密度估計(jì)的實(shí)驗(yàn)周期多長(zhǎng)等的條件下才具有意義?，F(xiàn)今應(yīng)使用真正的病人標(biāo)本，其內(nèi)含分析物含量濃度在醫(yī)學(xué)決定水平時(shí)，并且綜合各類測(cè)定周期條件去評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度。長(zhǎng)期來(lái)，國(guó)內(nèi)往往將不精密度分為批內(nèi)、批間和天間的水平。在實(shí)際使用中臨床只關(guān)心的是檢測(cè)系統(tǒng)總的不精密度。自20世紀(jì)90年代起，國(guó)際上推薦使用總不精密度，并且為了更好地檢出不穩(wěn)定的誤差，已明確提出檢測(cè)系統(tǒng)的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差s或變異系數(shù)CV應(yīng)為美國(guó)的臨床實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)量評(píng)估允許誤差（CLIA’88）的四分之一，天間標(biāo)準(zhǔn)差s或變異系數(shù)CV應(yīng)為該允許誤差的三分之一。達(dá)到這樣要求的檢測(cè)系統(tǒng)，可認(rèn)為它的隨機(jī)誤差屬于可接受的低水平。 一、重復(fù)性實(shí)驗(yàn)基本要求精密度評(píng)價(jià)最普及的是對(duì)穩(wěn)定的樣品作多次測(cè)定，求這些重復(fù)測(cè)定值的均值和標(biāo)準(zhǔn)差s，以及變異系數(shù)CV。重復(fù)次數(shù)一般要求20次。若在一批內(nèi)的重復(fù)測(cè)定，這是批內(nèi)不精密度；若每天做1次，連做1個(gè)月，這是對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)天間不精密度的觀察。進(jìn)行精密度實(shí)驗(yàn)要注意以下幾點(diǎn)：1．樣品基本要求 做重復(fù)檢測(cè)的樣品一定要穩(wěn)定；它的基體組成應(yīng)盡可能相似于實(shí)際檢測(cè)的患者標(biāo)本；樣品中的分析物含量應(yīng)在該項(xiàng)目的醫(yī)學(xué)決定水平處。有可能的話，做2個(gè)水平的精密度實(shí)驗(yàn)。2．樣品穩(wěn)定 采用冰凍保存的樣品一定要注意內(nèi)含分析物的穩(wěn)定，要嚴(yán)格控制凍融、混勻的操作。3．凍干控制品的使用 若每天復(fù)溶凍干控制品作實(shí)驗(yàn)，要注意選擇產(chǎn)品的穩(wěn)定性和瓶間差。要嚴(yán)格控制每次復(fù)溶凍干品時(shí)使用的復(fù)溶液的質(zhì)量、開(kāi)瓶的小心謹(jǐn)慎、加液的準(zhǔn)確性、使凍干塊浸潤(rùn)并復(fù)溶的時(shí)間、以及混勻的操作手法等等。4．收集實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù) 計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，變異系數(shù)。從允許誤差表中查閱評(píng)價(jià)的該項(xiàng)目允許誤差范圍。小于或等于判斷限的，檢測(cè)系統(tǒng)的不精密度屬可接受；大于判斷限的表示不精密度不符要求。二、精密度實(shí)驗(yàn)示例 統(tǒng)計(jì)歸納表控制品水平中高檢測(cè)周期批內(nèi)天間批內(nèi)天間重復(fù)次數(shù)（n）20202020均值（，mmol/L）標(biāo)準(zhǔn)差（s, mmol/L）變異系數(shù) (CV, %)允許誤差EA ( %)10％判斷指標(biāo)（％）1/4 EA％1/3 EA％1/4 EA％1/3 EA％判斷結(jié)論％＜％符合要求％＜％符合要求％＜％符合要求％＜％符合要求雙份檢測(cè)差異的標(biāo)準(zhǔn)差：有些檢驗(yàn)項(xiàng)目平時(shí)送檢的標(biāo)本很少，或者標(biāo)本很難保存；也沒(méi)有合適的控制品。無(wú)法按照上例的模式進(jìn)行精密度評(píng)價(jià)。雙份檢測(cè)差異的方法可以大致上了解它們的精密度性能。第三節(jié) 分析靈敏度一、分析靈敏度（檢測(cè)限）可檢測(cè)的最低分析物濃度為檢測(cè)系統(tǒng)的分析靈敏度或稱檢測(cè)限。確定檢測(cè)系統(tǒng)的可報(bào)告低限是重要的分析性能。二、檢測(cè)低限 (Lower Limit of Detection, LLD)檢測(cè)低限定義為樣品單次檢測(cè)可以達(dá)到的、確實(shí)為非空白檢測(cè)響應(yīng)量對(duì)應(yīng)的分析物量。檢測(cè)系統(tǒng)或方法對(duì)小于或等于檢測(cè)低限的分析物量只能報(bào)告“無(wú)分析物檢出”。通常估計(jì)95%%的兩種可能性：95%可能性：LLD=%可能性：LLD=要注意的是，直接讀出濃度單位的檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)低于零的檢測(cè)將報(bào)告零，其分布不是正態(tài)的，因此計(jì)算的均值和標(biāo)準(zhǔn)差不能如實(shí)表達(dá)檢測(cè)低限的真實(shí)情況。若檢測(cè)響應(yīng)可以初始值表示，如：吸光度、熒光、等，此時(shí)S空白是有效的。所以應(yīng)使用初始值來(lái)計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差，然后再轉(zhuǎn)換成濃度單位。三、生物檢測(cè)限（Biological Limit of Detection, BLD）生物檢測(cè)限定義為：以檢測(cè)低限加2或3倍檢測(cè)限樣品標(biāo)準(zhǔn)差的方式，確定檢測(cè)系統(tǒng)或方法可定量報(bào)告分析物的最低濃度或其他量值的限值。生物檢測(cè)限（BLD）的具體度量方式為：95%的可能性：%的可能性：四、功能靈敏度（Functional Sensitivity, FS）功能靈敏度定義為：以天間重復(fù)CV為20%時(shí)對(duì)應(yīng)檢測(cè)限樣品具有的平均濃度，確定檢測(cè)系統(tǒng)或方法可定量報(bào)告分析物的最低濃度或其他量值的限值。為了估計(jì)FS，須用多個(gè)檢測(cè)限濃度來(lái)確定在低濃度處的精密度表現(xiàn)，從中選擇具20% CV的濃度。在證實(shí)廠商的 FS的說(shuō)明時(shí)，使用的檢測(cè)限樣品濃度應(yīng)和廠商的說(shuō)明相同。第四節(jié) 病人結(jié)果可報(bào)告范圍評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)一、病人結(jié)果可報(bào)告范圍病人標(biāo)本未經(jīng)任何預(yù)處理，由檢測(cè)方法得到可靠結(jié)果范圍為病人結(jié)果可報(bào)告范圍（簡(jiǎn)稱為可報(bào)告范圍）。也即在此范圍內(nèi)不同病人標(biāo)本報(bào)告結(jié)果值間的比值反映各標(biāo)本內(nèi)含有的分析物確實(shí)有這樣的比例關(guān)系。近年來(lái)，具計(jì)算機(jī)的自動(dòng)分析儀已經(jīng)普及。儀器可對(duì)實(shí)驗(yàn)響應(yīng)呈不同表現(xiàn)的結(jié)果作適當(dāng)?shù)奶幚?，直接以最終計(jì)量單位方式報(bào)告檢測(cè)結(jié)果，符合臨床要求。在此情況下，評(píng)價(jià)檢測(cè)結(jié)果可報(bào)告范圍時(shí)，不必再去評(píng)價(jià)響應(yīng)結(jié)果的真實(shí)曲線狀態(tài)，只要將樣品作不同程度稀釋或配制后，將預(yù)期值和實(shí)際檢測(cè)值作比較，繪制在座標(biāo)紙上應(yīng)呈一條通過(guò)原點(diǎn)、斜率為1的直線。直線所達(dá)的限值即為該方法的檢測(cè)結(jié)果可報(bào)告范圍。二、評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行可報(bào)告范圍實(shí)驗(yàn)的樣品必須和真實(shí)標(biāo)本盡可能相似，即要和真實(shí)標(biāo)本具相同的基體狀態(tài)。最好有5個(gè)或以上的系列濃度的實(shí)驗(yàn)樣品，濃度范圍遍布整個(gè)預(yù)期可報(bào)告范圍。最高濃度的樣品應(yīng)達(dá)到可報(bào)告范圍的上限。各實(shí)驗(yàn)樣品內(nèi)含分析物濃度呈等比例關(guān)系，不要呈倍比關(guān)系。若能收集到含低濃度分析物的患者樣品(如血清)，將外觀澄清的混合樣品離心或過(guò)濾后，一分為二。在一份混合樣品中加入高濃度分析物貯存液，加入體積不得超過(guò)混合樣品體積的1/10，但又可使樣品中分析物濃度達(dá)到高限，充分混勻后為高值(H)樣品。在另一份混合樣品中加入配制分析物貯存液的溶劑，加入量等于前一份樣品中加入的貯存液體積，充分混勻后為低值(L)樣品。將H和L樣品按：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H關(guān)系各自配制混合，形成系列評(píng)價(jià)樣品。難以收集到低限樣品，可以只收集高值樣品，用生理鹽水作系列不同程度稀釋，形成系列評(píng)價(jià)樣品。如進(jìn)行載脂蛋白A1或B測(cè)