【正文】 檢測(cè)方法研究v 方法選擇： 查文獻(xiàn)/化合物理化性質(zhì)/分析儀器/方法評(píng)價(jià)v 最低檢測(cè)濃度： MRL /儀器方法/前處理方法v 標(biāo)準(zhǔn)曲線：至少5個(gè)濃度v 回收率：至少2個(gè)添加濃度，5個(gè)重復(fù)v 精密度：相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)添加濃度（mg/kg）平均回收率（70%）添加濃度（mg/kg）平均回收率（70%）170110110701101570110206012030≤50120≤35結(jié)果計(jì)算和表達(dá)v 殘留量應(yīng)為農(nóng)藥母體及其有毒代謝物，降解物的總和，以mg/kg表示。v 當(dāng)檢測(cè)值低于LOQ時(shí)，應(yīng)寫LOQ值v 應(yīng)真實(shí)記載實(shí)際檢測(cè)結(jié)果，分別計(jì)算各樣品重復(fù)檢測(cè)值和平均值，不能用回收率校正。v 結(jié)果一般以兩、三位有效數(shù)字表達(dá)，回收率采用整數(shù)位的百分?jǐn)?shù)表示即可。v 土壤樣品以干重計(jì)算，植物樣品以鮮重計(jì)算。v 消解動(dòng)態(tài)和半衰期 動(dòng)態(tài)方程： CT=C0eKT C為時(shí)間T時(shí)的農(nóng)藥殘留量（mg/kg） C0為施藥后原始沉積量（mg/kg） K為消解系數(shù) T為施藥后時(shí)間（天） 半衰期: T(1/2)=ln2/k檢測(cè)記錄標(biāo)準(zhǔn)樣品購(gòu)買、使用記錄試劑、玻璃器皿、氣源購(gòu)買、使用記錄天平使用、維護(hù)記錄氣相、液相等儀器使用、維護(hù)記錄標(biāo)準(zhǔn)溶液配制記錄方法摸索前處理記錄樣品檢測(cè)記錄、數(shù)據(jù)處理記錄6 試驗(yàn)報(bào)告的撰寫v 農(nóng)藥殘留試驗(yàn)報(bào)告的組成 封面 目錄 正文（前言、田間試驗(yàn)、檢測(cè)方法、殘留試驗(yàn)結(jié)果、結(jié)論與合理使用建議） 圖表（表格、曲線圖、譜圖）農(nóng)藥殘留試驗(yàn)報(bào)告的總體要求v 農(nóng)藥殘留試驗(yàn)報(bào)告的用途 農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)申請(qǐng)農(nóng)藥殘留登記提交材料 制定農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則的依據(jù) 制定農(nóng)藥殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)v 農(nóng)藥殘留試驗(yàn)報(bào)告的基本原則——真實(shí)、明確、規(guī)范 真實(shí)——科學(xué)的試驗(yàn)設(shè)計(jì)、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)脑囼?yàn)操作、真實(shí)的檢測(cè)數(shù)據(jù)。明確——報(bào)告表述內(nèi)容應(yīng)數(shù)據(jù)充足、內(nèi)容詳盡、結(jié)論明確。規(guī)范——報(bào)告的編寫格式應(yīng)符合有關(guān)要求。（術(shù)語使用；量、單位及符號(hào)；數(shù)值；引用數(shù)據(jù)）第三章 農(nóng)藥殘留分析的前處理技術(shù)一、樣品制備的目的和原理樣品制備（sample preparation）是農(nóng)藥殘留分析方法的重要部分。包括從樣品中提取殘留農(nóng)藥，濃縮提取液和去除提取液中干擾性雜質(zhì)的分離凈化等步驟，是將實(shí)驗(yàn)室樣品處理成適合測(cè)定的檢測(cè)溶液的過程。v 樣品制備的目的 1）提高靈敏度和降低檢測(cè)限。 2）提高測(cè)試精度。 3）提高方法的選擇性。（衍生化） 4）延長(zhǎng)儀器的使用壽命。樣品制備原理 主要是利用殘留農(nóng)藥與樣品基質(zhì)的物理化學(xué)特性差異，使其從對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)有干擾作用的樣品基質(zhì)中提取分離出來。 農(nóng)藥的極性和溶解性是選擇提取和凈化條件的重要依據(jù)，在殘留農(nóng)藥的溶劑提取中常采用“相似相溶”原理：使用與農(nóng)藥極性相近的溶劑為提取劑，使殘留農(nóng)藥在溶劑中達(dá)到最大溶解度。1）極性：共價(jià)鍵電子密度不均衡分布結(jié)果產(chǎn)生了鍵偶極。 常用溶劑的極性大?。? 己烷（石油醚）苯乙醚氯仿二氯甲烷丙酮乙酸乙酯乙腈二甲亞砜甲醇水 2）溶解性 指農(nóng)藥在水相和有機(jī)相中的溶解能力。 溶解度的大小很大程度上取決于農(nóng)藥分子所含官能團(tuán)的種類、數(shù)量、溶劑的性質(zhì)和其他外部因素。 農(nóng)藥的水溶性還受溫度、含鹽量、有機(jī)質(zhì)、PH值的影響。二、樣品制備常規(guī)技術(shù)1 提取技術(shù) 提?。╡xtraction）是指通過溶解、吸著或揮發(fā)等方式將樣品中的殘留農(nóng)藥分離出來的操作步驟，也稱為萃取。提取原則：根據(jù)農(nóng)藥理化性質(zhì)按“相似相溶”原理進(jìn)行。? 溶劑的選擇是關(guān)鍵。 1. 溶劑的極性（“相似相溶”原理） 2. 溶劑的純度（分析純以上） 3. 溶劑的沸點(diǎn)（45~80℃之間）。v 常用的提取溶劑： 石油醚、正己烷、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、乙腈、甲醇、水等v 提取方法 液固提取法：將固體放入提取劑中，加以振蕩，必要時(shí)加熱，再利用離心或過濾的方法使液、固分離，欲提取的農(nóng)藥組分進(jìn)入溶劑。 常用提取方法有振蕩法、搗碎法、超聲波法、索氏提取法、吹掃捕集法。 振蕩提取法v 振蕩浸提法是最常用的一種方法。它是將樣品粉碎后置于具塞三角瓶中，加入一定量的提取溶劑，用振蕩器振蕩1~3次，~1h，過濾出溶劑后，再用溶劑洗滌濾渣一次或數(shù)次，合并提取液后進(jìn)行濃縮凈化。v 適用于土壤、谷物等樣品中農(nóng)藥的提取。組織搗碎法v 組織搗碎法也是一種常用的方法。它是將樣品先進(jìn)行適當(dāng)?shù)那兴椋俜湃虢M織搗碎機(jī)中，加入適當(dāng)?shù)娜軇?，快速搗碎3~5min，過濾后進(jìn)行濃縮凈化。v 適用于蔬菜、水果等新鮮動(dòng)植物組織樣品中農(nóng)藥的提取。超聲波法v 目前一般是用超聲波清洗機(jī)來進(jìn)行超聲波提取。在超聲波清洗槽中裝入一定量的水，將裝有樣品和提取溶劑的玻璃瓶放入其中，提取溶劑的液面要與槽中水面齊平。索式提取法v 用適當(dāng)?shù)奶崛∪軇┰谒魇教崛∑髦羞B續(xù)回流提取幾小時(shí)，獲得提取液。v 提取效率高，但耗時(shí)長(zhǎng)8h以上）v 適用于勻漿法等難提取樣品中殘留農(nóng)藥的提取或是作為其他提取方法提取效率的參照標(biāo)準(zhǔn)。不適合于熱不穩(wěn)定農(nóng)藥的提取。吹掃捕集法v 主要用于水樣中揮發(fā)性有機(jī)物的分析。v 主要構(gòu)件有吹沸器、捕集管，氣相色譜儀v 操作步驟： 吹沸→捕集→解吸→GC分析2 液液提取法：常用于水樣或其他液體樣品中殘留農(nóng)藥的提取。將一種溶劑加入被測(cè)溶液中，利用被測(cè)組分在兩相中的分配不同而進(jìn)入有機(jī)相，其他組分仍留在原液中而達(dá)到分離的目的。通常使用的是分液漏斗。v 常用的二相溶劑對(duì)系統(tǒng)有：乙酸乙酯水、二氯甲烷水，石油醚水、石油醚丙酮等。v 液液分配提取效率的高低取決于化合物與提取溶劑的親和性、二相的體積比和提取次數(shù)三個(gè)因素。v 影響提取效率的因素： 1. 提取溶劑的選擇 2. 水相的鹽濃度 3. 水相的PH值有機(jī)相、水相、乳化物和外力是乳化形成的主要因素。 破除乳化的方法：v 離心(2000rpm，2min）v 過濾（濾紙或無水硫酸鈉）v 在水相中加入一定量的鹽（氯化鈉或其水溶液）v 加入少量不同的有機(jī)溶劑（無水乙醇） v 在振搖時(shí)，采用輕緩地向一個(gè)方向振搖的方式。2 凈化技術(shù) 凈化（cleanup）是指通過物理的或化學(xué)的方法除去提取物中對(duì)測(cè)定有干擾作用的雜質(zhì)的過程。主要是利用分析物與基體中干擾物質(zhì)的理化特性的差異，將干擾物質(zhì)的量減少到能正常檢測(cè)目標(biāo)殘留農(nóng)藥的水平。主要干擾雜質(zhì)及性質(zhì)類別化合物及其性質(zhì)脂類色素蠟質(zhì)肽、氨基酸碳水化合物木質(zhì)素脂肪、油脂（動(dòng)物樣品），不溶于水，溶于多少有機(jī)溶劑葉綠素、葉黃素、胡蘿卜素等（植物樣品），不溶于水，能溶于乙醇、丙酮和石油醚蠟質(zhì)（許多蔬菜），易溶于有機(jī)溶劑含氮，對(duì)NPD、FPD檢測(cè)器有干擾糖、淀粉等，對(duì)低揮發(fā)性和高水溶性農(nóng)藥有干擾酚類及其衍生物，影響氨基甲酸酯類和苯氧羧酸類農(nóng)藥酚類代謝物的分析常用凈化方法v 柱層析法v 濃硫酸處理法（水解脂類和色素，如凈化含有機(jī)氯類樣品）v 低溫冷凍（80℃）法（凈化動(dòng)物樣品，除去脂肪和某些色素）柱層析法 柱層析法是應(yīng)用最普遍的傳統(tǒng)凈化方法。 原理是將提取液中的農(nóng)藥和雜質(zhì)一起通過一支裝有吸附劑的層析柱，它們即被吸附在具有表面活性的吸附劑上，然后用溶劑進(jìn)行淋洗，以達(dá)到目標(biāo)物與雜質(zhì)分離的目的。 吸附劑的基本要求：具有較大的比表面；適宜的表面孔徑和吸附活性；粒度分布范圍盡量窄，并具有一定的強(qiáng)度。常用四種吸附劑的比較吸附劑名稱主要成分活性強(qiáng)弱活化處理方法弗羅里硅土（Florisil)硫酸鎂與硅酸鈉作用生成的沉淀物適合脂肪含量高的樣品的凈化650℃烘烤3h ，干燥器存放。使用前再于130 ℃活化12h。氧化鋁(alumina)氧化鋁（酸性、中性、堿性）對(duì)色素、脂肪、蠟質(zhì)有較強(qiáng)吸附能力柱層析法操作步驟：先550 ℃加熱4h，用前130 ℃活化12h。加入5%~10%重量的水，混勻，放置過夜。硅膠硅酸鈉溶液加入鹽酸而制得的溶膠沉淀物對(duì)糖等極性雜質(zhì)有較強(qiáng)吸附能力先110 ℃加熱1h，再加入0%~10%重量的水，混勻后使用?；钚蕴刻亢趯?duì)植物色素有很強(qiáng)的吸附能力，對(duì)脂肪、蠟質(zhì)吸附不強(qiáng)常與弗羅里硅土或氧化鋁按一定比例配合使用。柱層析法操作步驟：v 裝柱（濕法或干法，一般2~10g）：用適當(dāng)?shù)娜軇ㄈ鯓O性）預(yù)淋柱子，讓柱處于濕潤(rùn)和適于接受溶液的狀態(tài)。v 上樣：將用溶劑稀釋的樣品溶液加在柱上，使樣品通過柱子。v 洗脫：以洗脫分析物而讓雜質(zhì)保留的溶劑（一般為混合淋洗液）梯度洗脫柱子，回收分析物。3 樣品濃縮技術(shù)樣品濃縮的目的是使檢測(cè)溶液中待測(cè)物達(dá)到分析儀器靈敏度以上的濃度。 常用的濃縮方法有：v 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法v KD濃縮法v 氮?dú)獯蹈煞?減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法v 減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)法是利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器在較低溫度下使大體積（50~500mL）提取液得到快速濃縮的方法，操作方便，但殘留農(nóng)藥容易損失，且樣品還須轉(zhuǎn)移、定容。v 原理是利用旋轉(zhuǎn)濃縮瓶對(duì)濃縮液起攪拌作用，并在瓶壁上形成液膜，擴(kuò)大蒸發(fā)面積，同時(shí)又通過減壓，使溶劑的沸點(diǎn)降低，從而達(dá)到高效率濃縮目的。KD濃縮法v KD濃縮法是利用KD濃縮器直接濃縮到刻度試管中的方法，適合于中等體積(10~50mL)提取液的濃縮。v 特點(diǎn)是可有效減少濃縮過程中農(nóng)藥的損失，且能直接定容測(cè)定，無需轉(zhuǎn)移樣品。但只適用于少量體積的的樣品，且操作較煩瑣。氮?dú)獯蹈煞╲ 氮?dú)獯蹈煞ㄊ侵苯永玫獨(dú)饬鬏p緩吹拂提取液及提高水浴溫度，加速溶劑的蒸發(fā)速度來濃縮樣品，可以有效防止氧化反應(yīng)但只適合于小體積濃縮。三、樣品制備新技術(shù)1 固相提取法（SPE）v SPE利用顆粒細(xì)小的多孔固相吸附劑將液體樣品中的目標(biāo)化合物選擇性地吸附，然后再用洗脫液洗脫或加熱解吸附，達(dá)到分離和富集目標(biāo) 化合物的目的。v 只能分離性質(zhì)差別較大的物質(zhì)。固相萃取分離模式v 正相萃?。何絼O性大于洗脫液極性，用于萃取極性物質(zhì)。如硅膠、弗羅里硅土、氧化鋁、氨基等。 反相萃?。何絼O性小于洗脫液極性，用于萃取中等極性到非極性化合物。如C1C8等。 離子交換萃?。何絼┒际菐в须姾傻碾x子交換樹脂，用于萃取帶有電荷的化合物。如SAX，SCX等。固相萃取流程v 吸附柱的選擇：根據(jù)待分離對(duì)象的特點(diǎn)選擇合適的吸附柱。v 活化吸附劑：萃取樣品前用適當(dāng)?shù)娜軇┝芟垂滔嘀?。v 加樣：將已經(jīng)濃縮后的樣品采用適當(dāng)溶劑溶解后加入到吸附小柱上。v 洗去干擾雜質(zhì)：選擇合適的淋洗溶劑將干擾雜質(zhì)先淋洗出小柱，農(nóng)藥保留在小柱中。v 洗脫分析物：選擇合適的淋洗溶劑將保留在小柱中的目標(biāo)農(nóng)藥洗脫出來并收集。 影響萃取效率的因素 吸附劑選擇：盡量選擇與目標(biāo)化合物極性相似的吸附劑。 淋洗劑選擇：與目標(biāo)化合物性質(zhì)及吸附劑有關(guān)。 流速：樣品溶液的流速一般不超過5mL/min。固相萃取的優(yōu)缺點(diǎn) 高的回收率和富集系數(shù) 不需要大量溶劑 萃取時(shí)間短（是液液萃取的1/2） 操作簡(jiǎn)單、快速、易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化 缺點(diǎn)：復(fù)雜樣品有時(shí)會(huì)堵塞填料空隙；復(fù)雜樣品的雜質(zhì)干擾等2 固相微萃?。⊿PME）v SPME是在SPE基礎(chǔ)上發(fā)展起來高效的樣品預(yù)處理技術(shù)。它是利用固相提取的方法實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品的分離和凈化，但所用的固相材料和分離機(jī)制不同。v SPME不是將待測(cè)物全部分離出來，而是通過殘留農(nóng)藥在樣品與固相涂層之間的平衡來達(dá)到分離目的。v 其固相是一支覆蓋著一層高聚物固定相（聚丙烯酸酯）的熔融石英纖維。浸入樣品中，待測(cè)組分?jǐn)U散吸附到石英纖維表面的涂層，當(dāng)吸附平衡后，與GC或HPLC聯(lián)用進(jìn)行分析測(cè)定。固相微萃取流程v 吸附：萃取過程中應(yīng)用磁力攪拌、超聲振蕩等方式，可縮短達(dá)到平衡的時(shí)間。v 解吸：高溫解吸（GC）或溶劑洗脫（HPLC）v 纖維的老化和清洗：。固相微萃取的影響因素v 固相涂層的性質(zhì)：非極性固相涂層（聚二甲基硅氧烷）；極性固相涂層（聚丙烯酸酯）v 液膜厚度：液膜越厚，吸附量越大，但平衡時(shí)間越長(zhǎng)。v 攪拌效率：有利于縮短平衡時(shí)間。v 溫度：有利于縮短平衡時(shí)間，但會(huì)減少吸附量。v 鹽的作用和溶液酸度：可改變被分離物質(zhì)在水中的溶解度，提高靈敏度。SPME的優(yōu)缺點(diǎn) 操作時(shí)間短(一般只需15min，是液液萃取的30%) 操作簡(jiǎn)便 無需萃取溶劑 所需樣品量少 適用范圍廣泛 缺點(diǎn)：石英纖維非常脆弱，易折斷，重復(fù)性較差。3 基質(zhì)固相分散萃?。∕SPD）v MSPD是將樣品與吸附填料（與SPE吸附材料一致）一起混合研磨，得到半干狀態(tài)的混合物并將其作為填料裝柱，然后用不同的溶劑淋洗柱子，將各種待測(cè)物洗脫下來。 v 反相吸附劑，如C8，C18，主要用來分離親脂性物質(zhì) v 正相吸附劑，用于分離極性較大的農(nóng)藥 優(yōu)點(diǎn)： v 樣品分析時(shí)間短 v 溶劑用量少 v 避免了樣品均化、轉(zhuǎn)溶、乳化等帶來的損失 缺點(diǎn)： v 取樣量小造成檢測(cè)限較高 v 雜質(zhì)凈化方面不如其他提取技術(shù)理想 4 QuEChERS 法v QuEChERS法是利用固相分散材料與樣品或樣品提取液充分接觸，吸附其中的雜質(zhì)而得到凈化的目的，或者是利用固相吸附劑吸附目標(biāo)分析物，再進(jìn)行解析而凈化。 v 其核心技術(shù)是凈化材料或萃取劑能夠選擇性地吸附樣品溶液中的目標(biāo)化合物或干擾物質(zhì)，以達(dá)到凈化樣品的目的，P