畢業(yè)論文巴西橡膠樹乙烯途徑中抑制因子ein3的western印跡-文庫吧
2025-06-08 06:55 本頁面
【正文】 乙烯對(duì)植物的代謝調(diào)節(jié)是貫穿其整個(gè)生活周期的。首先，在種子萌發(fā)期，乙烯可以促進(jìn)下胚軸膨脹變粗，使其容易破土而出；乙烯還對(duì)陸生植物莖的延伸有著抑制作用，可以使樹干變得更粗以抵抗大風(fēng)的侵襲，而對(duì)半水生植物莖的生長有很強(qiáng)的促進(jìn)作用；它還可以幫助水淹植物維持生命，還可以抵抗病菌對(duì)植物的侵襲；其次，在植物成熟期，乙烯可以影響植物的性別分化并促進(jìn)其果實(shí)成熟；乙烯在葉片和花的衰老中亦起到重要的作用。乙烯最重要的生物學(xué)反應(yīng)是黃化胚芽的三重反應(yīng)：即莖桿的偏向水平生長、下胚軸膨脹變粗和頂端鉤狀芽彎曲的加劇。[5]切割、碰撞和擦傷等均可引起植物組織、器官的乙烯釋放量的增加，這種增加釋放的乙烯稱之為傷害乙烯。[6]橡膠的割膠也是一種機(jī)械傷害，因此，橡膠割膠后會(huì)產(chǎn)生大量的傷害乙烯，增加了依稀的釋放量。［7］除此之外，物理壓力、昆蟲或微生物的侵襲、化學(xué)處理、輻射、干旱和極端溫度等也能刺激植物組織產(chǎn)生乙烯。對(duì)巴西橡膠樹木質(zhì)器官進(jìn)行的錘擊實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，巴西橡膠樹木質(zhì)器官遭到機(jī)械創(chuàng)傷后與離體的組織器官一樣，會(huì)產(chǎn)生傷害乙烯。[8]乙烯途徑信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的下游事件是發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)的基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控，由植物特有的核蛋白EIN3/EIL1所介導(dǎo)，EIN3是一個(gè)乙烯反應(yīng)的正調(diào)控因子。[9]大部分與乙烯相關(guān)的生物學(xué)過程都通過核心轉(zhuǎn)錄因子EIN3/EIL1調(diào)控下游的靶基因來實(shí)現(xiàn)的。EIN3 編碼一個(gè)由628個(gè)氨基酸組成的轉(zhuǎn)錄因子. EIN3/EIL1可以劃分為3個(gè)基本的結(jié)構(gòu)域: DNA 結(jié)合結(jié)構(gòu)域(80359aa)、二聚體化結(jié)構(gòu)域(113257aa)和C 端.［10］ 2實(shí)驗(yàn)器材及試劑配方 20度冰箱、80度冰箱、研缽、量筒、試劑瓶、烘箱、氣浴鍋、分析天平、各個(gè)量程的移液槍、通風(fēng)櫥、電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀、滅菌鍋、制冰機(jī)、搖床、50ml離心管、微波爐、鑷子、剪刀、培養(yǎng)皿、各個(gè)規(guī)格的槍頭、離心機(jī)、分光光度計(jì)、真空干燥儀、試劑配方（1）Esen fixing buffer (蛋白固定液） 異丙醇 25% 乙酸 10% 去離子水 65%（2）Esen staining buffer(蛋白染色液） % coomassie brilliant blue G250 dissolved in Esen fixing buffer（3）Protein extraction buffer(蛋白提取液） Triscl Glycerin 20% SDS 2% Bromphend blue a little βmerkapto ethanol 1%（4）SDSPAGE 凝膠 10% 7ml 40% Acrylamid Triscl 10% SDS 70181。l 10% APS 70181。l ddH2O TEMED 7181。l 4% 40% Acrylamid 250181。l 1M Triscl 630181。l 10% SDS 25181。l 10% APS ddH2O TEMED 5181。l（5）Loading buffer(上樣緩沖液） SDS 10% w/v Glycerol 20% v/v Triscl Bromphend blue % w/v βmerkapto ethanol 10mM（6）Staining buffer(蛋白膠染色液） Methanol(甲醇） 91ml Acetate(冰醋酸） coomassie brilliant blue R250 H2O
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