分子生物學(xué)復(fù)習(xí)提綱答案-文庫(kù)吧
2025-05-25 23:17 本頁(yè)面
【正文】 ，兩個(gè)引物的堿基組成一致，可以應(yīng)用相同的退火溫度，確保PCR的成功。4) 引物內(nèi)部避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)——不超過(guò)3bp。5) 引物之間沒(méi)有互補(bǔ)性——會(huì)造成引物之間退火，發(fā)生引物擴(kuò)增，降低擴(kuò)增效率。6) 引物的3’端最好是G/C7) 引物的5’端可以修飾——即使不互補(bǔ)，也基本不影響PCR的特異性。8) 引物嚴(yán)格特異9) 引物的濃度合適10) 引物的質(zhì)量好印跡雜交過(guò)程：樣品制備—電泳分離—印跡—預(yù)雜交—雜交—洗膜—分析二、試述DNA印跡法的原理、操作過(guò)程及其應(yīng)用原理：將通過(guò)凝膠電泳分離的待測(cè)核酸轉(zhuǎn)移并結(jié)合到固相支持物上，然后與探針進(jìn)行雜交并分析。過(guò)程：提取DNA、用限制酶切割，獲得DNA片段混合物。瓊脂糖凝膠電泳分離DNA片段用堿處理電泳凝膠，將DNA片段原位變性解鏈。將變性的DNA片段從凝膠轉(zhuǎn)移到固相膜上。用封閉物預(yù)雜交，然后漂洗除去未結(jié)合封閉物。用探針雜交液浸泡固相膜，與待測(cè)DNA片段進(jìn)行雜交。用不同離子強(qiáng)度的溶液依次漂洗固相膜，除去未雜交探針和形成非特異性雜交體的探針。通過(guò)顯影或顯色分析固相膜上的雜交體，將雜交體位置和凝膠電泳圖譜進(jìn)行對(duì)比，可計(jì)算待測(cè)DNA片段的分子量。應(yīng)用：檢出特異的DNA片段，測(cè)定分子量，分析DNA限制酶圖譜、DNA指紋、基因突變、基因擴(kuò)增和DNA多態(tài)性等。三、根據(jù)被測(cè)定的對(duì)象，簡(jiǎn)述分子雜交印跡的種類、特點(diǎn)及其應(yīng)用上優(yōu)缺點(diǎn)DNA印跡法RNA印跡法l RNase 無(wú)處不在，要絕對(duì)消除外源RNase的污染。l 先變性后電泳、轉(zhuǎn)移。l 不能采用堿變性，只能采用甲醛、乙二醛、二甲基亞砜等變性。l 可以用于定性或定量分析組織細(xì)胞內(nèi)的總RNA或某一種特異RNA，特別是分析mRNA的長(zhǎng)度和含量。蛋白質(zhì)印跡法l 也是由電泳分離、轉(zhuǎn)移固定和檢測(cè)分析等組成。l 只能用電轉(zhuǎn)移法進(jìn)行轉(zhuǎn)移。l 用抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)目的蛋白四、原癌基因是如何被激活的點(diǎn)突變 ——某一個(gè)核苷酸發(fā)生改變——蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)改變——功能異常——癌變?；驍U(kuò)增——基因拷貝數(shù)的增加。原癌基因的擴(kuò)增如果在不恰當(dāng)?shù)碾A段發(fā)生，會(huì)造成持續(xù)性高水平表達(dá)，導(dǎo)致其表達(dá)產(chǎn)物癌蛋白的增加，從而引起細(xì)胞的功能紊亂?；蛑嘏拧旧w易位——使無(wú)活性或低活性的原癌基因轉(zhuǎn)移到某些強(qiáng)啟動(dòng)子或增強(qiáng)子附近而激活，從而使原癌基因表達(dá)產(chǎn)物顯著增加，導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。插入突變——在原癌基因附近插入某種DNA序列，從而引起基因表達(dá)改變。DNA去甲基化——DNA的甲基化程度對(duì)于保持雙螺旋結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性、阻抑基因表達(dá)具有重要作用。甲基化程度越低，腫瘤惡性程度和轉(zhuǎn)移能力就越高，臨床分期也越晚。五、試述人類基因組計(jì)劃的主要內(nèi)容及意義內(nèi)容：研究人類基因組，主要目標(biāo)是繪制人類基因組的遺傳圖譜、物理圖譜、轉(zhuǎn)錄圖譜和序列圖譜，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行基因定位和分離，建立人類遺傳物質(zhì)的全套信息數(shù)據(jù)庫(kù)，破解人類的全部遺傳信息。意義：人類基因組序列圖譜的完成宣告了“功能基因組時(shí)代”的到來(lái)。功能基因組學(xué)研究基因結(jié)構(gòu)，闡明所有基因產(chǎn)物的功能，研究基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)制并繪制基因表達(dá)調(diào)控
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