《生物免疫分析技術》ppt課件-文庫吧
2025-04-27 12:35 本頁面
【正文】 在這種測定方法中有 3種必要的試劑： ①固相的抗原或抗體（ 免疫吸附劑） ②酶標記的抗原或抗體（ 標記物） ③酶作用的底物（ 顯色劑） ? 測量時，抗原（抗體）先結合在固相載體上，但仍保留其免疫活性， ? 然后加一種抗體（抗原）與酶結合成的偶聯(lián)物（標記物），此偶聯(lián)物仍保留其原免疫活性與酶活性， ? 當偶聯(lián)物與固相載體上的抗原（抗體）反應 結合后，再加上酶的相應底物，即起催化水解或氧化還原反應而呈顏色。 ? 顏色反應的深淺與相應的抗體或抗原量成正比，因此可借助于顏色反應的深淺來定量抗體或抗原。 ? 這種有色產(chǎn)物可用肉眼、光學顯微鏡、電子顯微鏡觀察，也可以用分光光度計（酶標儀）加以測定。 ? 其方法簡單，方便迅速，特異性強。 酶及其底物 酶結合物是酶與抗體或抗原 , 半抗原在交聯(lián)劑作用下聯(lián)結的產(chǎn)物。是 ELISA成敗的關鍵試劑，它不僅具有抗體抗原特異的免疫反應，還具有酶促反應，顯示出生物放大作用，但不同的酶選用不同的底物 ，將得到不同的顏色反應。 酶 底 物 顯色反應 測定波長 辣根過氧化物酶 鄰苯二胺 四甲替聯(lián)苯胺 氨基水楊酸 鄰聯(lián)苯甲胺 2,2‘連胺基 2(3乙基 并噻唑啉磺酸 6)銨鹽 橘紅色 黃色 棕色 蘭色 藍綠色 492 460 449 425 642 堿性磷酸酯酶 4硝基酚磷酸鹽 (PNP) 萘酚 ASMx磷酸鹽 +重氮鹽 黃色 紅色 400 500 葡萄糖氧化酶 ABTS+HRP+葡萄糖 葡萄糖 +甲硫酚嗪 +噻唑蘭 黃色 深藍色 405 420 β Ｄ 半乳糖苷酶 甲基傘酮基半乳糖苷 (4MuG) 硝基酚半乳糖苷 (ONPG) 熒光 黃色 360,450 420 ELISA的種類和變化 （一）雙抗體夾心法 （二）間接法 （三）競爭法 （四）雙位點一步法 （五）捕獲法測 IgM抗體
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