《細(xì)胞周期調(diào)控》ppt課件-文庫吧
2025-04-18 03:43 本頁面
【正文】 ，前 9次細(xì)胞分裂都是同步化進(jìn)行的。 3．增殖抑制解除后的同步分裂 如真菌的休眠孢子移入適宜環(huán)境后，它們一起發(fā)芽，同步分裂。 （二）人工同步化 1．選擇同步化 1）有絲分裂選擇法： 使單層培養(yǎng)的細(xì)胞處于對數(shù)增殖期，此時分裂活躍， MI高。有絲分裂細(xì)胞變圓隆起，與培養(yǎng)皿的附著性低，此時輕輕振蕩，M期細(xì)胞脫離器壁，懸浮于培養(yǎng)液中，收集培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液，依法繼續(xù)收集，則可獲得一定數(shù)量的中期細(xì)胞。其優(yōu)點是，操作簡單，同步化程度高，細(xì)胞不受藥物傷害，缺點是獲得的細(xì)胞數(shù)量較少。（分裂細(xì)胞約占 1%～ 2%） 2）細(xì)胞沉降分離法： 不同時期的細(xì)胞體積不同，而細(xì)胞在給定離心場中沉降的速度與其半徑的平方成正比，因此可用離心的方法分離。其優(yōu)點是可用于任何懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞 , 省時，效率高，成本低 ，缺點是同步化程度較低。 2．誘導(dǎo)同步化 1） DNA合成阻斷法： 選用 DNA合成的抑制劑，可逆地抑制 DNA合成，而不影響其他時期細(xì)胞的運轉(zhuǎn)，最終可將細(xì)胞群 阻斷在 S期或 G/S交界處 。 5氟脫氧尿嘧啶、羥基脲、阿糖胞苷、氨甲蝶呤、高濃度 ADR、 GDR和 TDR，均可抑制 DNA合成使細(xì)胞同步化。其中高濃度 TDR對 S期細(xì)胞的毒性較小，因此常用 TDR雙阻斷法誘導(dǎo)細(xì)胞同步化： 在細(xì)胞處于對數(shù)生長期的培養(yǎng)基中加入過量 TDR。 S期細(xì)胞被抑制，其它細(xì)胞繼續(xù)運轉(zhuǎn)，最后停在 G1/S交界處。移去 TDR。洗滌細(xì)胞并加入新鮮培養(yǎng)液、細(xì)胞又開始分裂。當(dāng)釋放時間大于 TS時，所有細(xì)胞均脫離 S期，再次加入過量 TDR，細(xì)胞繼續(xù)運轉(zhuǎn)至 G1/S交界處，被過量 TDR抑制而停止。 優(yōu)點是同步化程度高，適用于任何培養(yǎng)體系?？蓪缀跛械募?xì)胞同步化。缺點是產(chǎn)生非均衡生長，個別細(xì)胞體積增大。 2）中期阻斷法： 利用破壞微管的藥物將細(xì)胞阻斷在中期，常用的藥物有秋水仙素和秋水仙酰胺，后者毒性較少。優(yōu)點是無非均衡生長現(xiàn)象，缺點是可逆性較差。 將與細(xì)胞周期調(diào)控有關(guān)的條件依賴性突變株轉(zhuǎn)移到限定條件下培養(yǎng)，所有細(xì)胞便被同步化在細(xì)胞周期中某一特定時期。 四、特異的細(xì)胞周期 特異的細(xì)胞周期是指那些特殊的細(xì)胞所具有的與標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞周期相比有著鮮明特點的細(xì)胞周期。 ⑴ 爪蟾早期胚胎細(xì)胞的細(xì)胞周期 細(xì)胞分裂快 ,無 G1 期 , G2 期非常短 ,S 期也短 (所有復(fù)制子都激活 ), 以至認(rèn)為僅含有 S 期和 M 期 無需臨時合成其它物質(zhì) 子細(xì)胞在 G G2 期并不生長，越分裂體積越小 細(xì)胞周期調(diào)控因子和調(diào)節(jié)機制與一般體細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞周期基本是一致的 ⑵ 酵母細(xì)胞的細(xì)胞周期 酵母細(xì)胞的細(xì)胞周期與標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞周期在時相和調(diào)控方面相似，酵母細(xì)胞周期明顯特點 :酵母細(xì)胞周期持續(xù)時間較短；封閉式細(xì)胞分裂 ， 即細(xì)胞分裂時核膜不解聚；紡錘體位于細(xì)胞核內(nèi)；在一定環(huán)境下，也進(jìn)行有性繁殖 ⑶ 植物細(xì)胞的細(xì)胞周期 植物細(xì)胞的細(xì)胞周期與動物細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞周期非常相似，含有 G1 期、S 期、 G2期和 M 期四個時期。 植物細(xì)胞 不含中心體，但在細(xì)胞分裂時可以正常組裝紡錘體。 植物細(xì)胞以形成中板的形式進(jìn)行胞質(zhì)分裂 中期 (metaphase) ◆ 所有染色體排列到赤道板 (Metaphase Plate)上 ， 標(biāo)志著細(xì)胞分裂已進(jìn)入中期 ◆ 是什么機制確保染色體正確排列在赤道板上 ？ 著絲粒微管動態(tài)平衡形成的張力 關(guān)于細(xì)胞分裂： . MT behavior during formation of the metaphase plate. Initially,MT from opposite poles are different in length. Experimental demonstration of the importance of mecha nical tension in metaphase checkpoint control. 后期 (anaphase) ◆ 排列在赤道面上的染色體的姐妹染色單體分離 產(chǎn)生向極運動 ◆ 后期 (anaphase)大致可以劃分為連續(xù)的兩個階段 ， 即后期 A和后期 B 后期 A， 動粒微管去裝配變短 ， 染色體產(chǎn)生兩極運動 后期 B， 極間微管長度增加 ， 兩極之間的距離逐漸拉 長 ， 介導(dǎo)染色體向極運動 第二節(jié) 細(xì)胞周期調(diào)控 ◆ 在適當(dāng)時候激活細(xì)胞周期各個時相的相關(guān)酶 和蛋白 ,然后自身失活 (正調(diào)控 ) ◆ 確保每一時相事件的全部完成 (負(fù)調(diào)控 ) ◆ 對外界環(huán)境因子起反應(yīng) (如多細(xì)胞生物對增殖信號的反應(yīng) ) 細(xì)胞周期調(diào)控系統(tǒng)的主要作用 一、研究背景 Rao和 Johnson(1970、 197 1974)將 Hela細(xì)胞同步于不同階段，然后與 M期細(xì)胞混合，在滅活仙臺病毒介導(dǎo)下，誘導(dǎo)細(xì)胞融合，發(fā)現(xiàn) 與 M期細(xì)胞融合的間期細(xì)胞產(chǎn)生了形態(tài)各異的早熟凝集染色體 (prematurely condensed chromosome， PCC)，這種現(xiàn)象叫做早熟染色體凝集 (premature chromosome condensation)。 G1期 PCC為單線狀，因 DNA未復(fù)制。 S期 PCC為粉末狀，因 DNA由多個部位開始復(fù)制。 G2期 PCC為雙線染色體，說明 DNA復(fù)制已完成。 不同形態(tài)的 PCC 不僅同類 M期細(xì)胞可以誘導(dǎo) PCC，不同類的
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