《答辯鐵皮石斛多糖》ppt課件-文庫(kù)吧
2025-04-17 18:30 本頁(yè)面
【正文】 濃縮 脫脂 脫蛋白 脫色 干燥 組培鐵皮石斛多糖 8 破碎 90℃ ， 1h，料水比 1:20 60℃ ， 1h 氯仿，正丁醇 活性炭 60℃ 3. 操作要點(diǎn) (1) 破碎：組培石斛苗要充分的研磨破碎，有利于多糖的溶解分離。 (2) 提?。浩扑榈氖M織于 90℃ 、料水比 1:20的條件下回流提取 1小時(shí)，重復(fù)三次，合并提取液。 (3) 脫脂：濃縮液中加入 100 mL石油醚水浴回流至沸騰，抽真空過濾。 (4) 脫蛋白：以 50 mL多糖濃縮液， 15 mL氯仿， 5 mL正丁醇為標(biāo)準(zhǔn)比例混合振蕩，不加熱，離心機(jī)離心至離液面交界處無白色混懸物，也就是蛋白質(zhì)介于提取液與試劑交界處即可，并分別提取。 9 (5) 干燥：脫色后的多糖液于烘箱中用 60℃ 熱風(fēng)干燥至恒重，保存?zhèn)溆谩? 3. 2 組培鐵皮石斛多糖含量的測(cè)定 試驗(yàn)采用蒽酮硫酸法測(cè)定組培鐵皮石斛多糖含量。 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取經(jīng) 105℃ 干燥恒重的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖 （精確到 ），用溫蒸餾水溶解，并定容至 1000 mL。此溶液質(zhì)量濃度為50μgmL1。分別取上述葡萄糖溶液 0 mL、 mL、 mL、 mL、 mL、 mL、 mL、 mL到 25 mL具塞試管中，用蒸餾水補(bǔ)足到 2mL；在冰水浴中加入 4 mL的 2g/ mL的蒽酮 硫酸溶液，搖勻，置于沸水中加熱煮沸 5min，取出后用流動(dòng)水冷卻至室溫，以零管為空白，于 625nm處測(cè)定吸光度，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)吸光值為縱坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，如下圖所示。 10 組培鐵皮石斛多糖含量的測(cè)定 分別取組培鐵皮石斛多糖儲(chǔ)備液 (50μgmL1)和組培鐵皮石斛苗儲(chǔ)備液 (50μgmL1) 25mL具塞試管中，用蒸餾水補(bǔ)足到 2mL；在冰水浴中加入 4 mL的 2g/ mL的蒽酮 硫酸溶液，搖勻，置于沸水中加熱煮沸 5min，取出后用流動(dòng)水冷卻至室溫，以葡萄糖樣品中零管為空白，于 625nm處測(cè)定吸光度。由標(biāo)準(zhǔn)曲線求得對(duì)應(yīng)的多糖濃度，以葡萄糖計(jì)。 11 y = R178。 = 625nm吸光值 葡萄糖溶液質(zhì)量溶度 / FRAP法測(cè)定組培鐵皮石斛的總抗氧化能力 硫酸亞鐵標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取不同體積 5～ 140μL的 1mmol/LFeSO4 溶液，用蒸餾水補(bǔ)足至2mL，再加入配制好的 FRAP工作液 3mL，混勻后于 37℃ 反應(yīng) 30min，在 593nm下測(cè)定樣品液的吸光度值，確定還原力標(biāo)準(zhǔn)曲線。 以吸光度（ Y）對(duì)葡萄糖質(zhì)量濃度（ X）回歸，得到回歸方程 y = ，所得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線如下圖 1所示。 12 y = x R178。 = 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45593nm吸光值 FeSO4濃度 /* 組培鐵皮石斛多糖總抗氧化能力的測(cè)定 分別精密移取不同樣品質(zhì)量 50～ 300μg的 3種待測(cè)樣品加入到有刻度試管中，加蒸餾水至 2mL，再加入 FRAP工作液 3mL，混勻后于 37℃ 反應(yīng) 30min，取出后立即在 593nm處測(cè)定吸光度。以不加樣品組為參照，測(cè)定樣品吸光度值，每個(gè)樣品平行測(cè) 3次，取平均值。根據(jù)還原力標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算相同吸光度值的 FeSO4當(dāng)量濃度，記為 FRAP值。 組培鐵皮石斛多糖清除羥基自由基的能力 根據(jù) Fenton反應(yīng)的方法，建立 OH自由基產(chǎn)生體系模型。 在刻度試管中加入 5mL的蒸餾水 ,30μL的 ,
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