《rna轉(zhuǎn)錄》ppt課件-文庫(kù)吧
2025-04-13 22:20 本頁(yè)面
【正文】 35bp處 ,該序列的堿基富含 TTGACA。 2022/5/25 18 結(jié)合部位： ? 是 DNA分子上與 RNA聚合酶的 核心酶 結(jié)合的部位，其長(zhǎng)度為 7bp， 中心部位在 –10bp處。 ? 堿基序列具有高度保守性，富含 TATAAT序列，故稱之為 TATA盒（ TATA box） ， 又稱普里布諾序列 （ Pribnow box） 。 ? 該序列中 富含 AT堿基，維持雙鏈結(jié)合的氫鍵相對(duì)較弱，導(dǎo)致該處雙鏈 DNA易發(fā)生解鏈 ，有利于 RNA聚合酶的結(jié)合。 2022/5/25 19 RNA聚合酶保護(hù)法 2022/5/25 20 開(kāi)始轉(zhuǎn)錄 T T G A C A A A C T G T 35 區(qū) (Pribnow box) T A T A A T Pu A T A T T A Py 10 區(qū) 1 30 50 10 10 40 20 5 ? 3 ? 3 ? 5 ? RNApol辨認(rèn)位點(diǎn) (recognition site) 5? 5? RNA聚合酶保護(hù)區(qū) 結(jié)構(gòu)基因 3? 3? ?用 RNA聚合酶保護(hù)法研究轉(zhuǎn)錄起始區(qū) 結(jié)合 2022/5/25 21 第二節(jié) 原核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程 The Process of Transcription in Prokaryote ? 大腸桿菌轉(zhuǎn)錄過(guò)程包括轉(zhuǎn)錄 起始、延長(zhǎng)、終止 三步。 2022/5/25 22 一、轉(zhuǎn)錄起始需要 RNA聚合酶全酶 ? 轉(zhuǎn)錄起始 不需引物 ，兩個(gè)與模板配對(duì)的相鄰核苷酸，在 RNApol催化下生成磷酸二酯鍵直接連接起來(lái)。轉(zhuǎn)錄生成的第一個(gè)核苷酸總是 GTP或 ATP ,以 GTP更為常見(jiàn)。 ? 轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物 ： RNA聚合酶的全酶 、DNA模板和四磷酸二核苷酸（ pppGpNOH 3’） 三者結(jié)合在一起的復(fù)合體。 2. DNA雙鏈局部解開(kāi) ， 形成 開(kāi)放轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(open transcription plex) ； 1. RNA聚合酶全酶 (?2????)與模板結(jié)合 ， 形成 閉合轉(zhuǎn)錄復(fù)合體 (closed transcription plex) ； 3. 在 RNA聚合酶作用下發(fā)生第一次聚合反應(yīng) ， 形成轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物： RNApol (?2????) DNA pppGpN OH 3? 轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物 : 5?pppG OH + NTP ? 5?pppGpN OH 3? + ppi ? 轉(zhuǎn)錄起始過(guò)程： 2022/5/25 24 ? 第一個(gè)磷酸二酯鍵生成后 ， σ亞基即從轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物上脫落 ， 核心酶連同四磷酸二核苷酸 ， 繼續(xù)結(jié)合于 DNA模板上， 酶沿 DNA鏈前移 ， 進(jìn)入延長(zhǎng)階段 。 2022/5/25 25 ? 2022/5/25 26 二、 原核生物的轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)時(shí)蛋白質(zhì)的翻譯也同時(shí)進(jìn)行 1. ?亞基脫落， RNA–pol聚合酶核心酶變構(gòu)，與模板結(jié)合松弛，沿著 DNA模板前移； 2. 在 核心酶 作用下， NTP不斷聚合， RNA鏈不斷延長(zhǎng)。 (NMP) n + NTP ?? (NMP) n+1 + PPi 轉(zhuǎn)錄空泡 (transcription bubble)： RNApol （ 核心酶） DNA RNA 2022/5/25 28 轉(zhuǎn)錄空泡的形成： ? 轉(zhuǎn)錄空泡（ transcription bubble）： 也稱轉(zhuǎn)錄復(fù)合物 ，是由 RNA聚合酶的核心酶、 DNA模板和轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 RNA三者結(jié)合在一起的復(fù)合體。 ? RNA 聚合酶 ?亞基辨認(rèn)啟動(dòng)子識(shí)別部位。在這一區(qū)段，酶與模板的結(jié)合很松弛，酶隨即移向啟動(dòng)子的結(jié)合部位，并跨入了轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)，開(kāi)始轉(zhuǎn)錄。 ? 第一個(gè)磷酸二酯鍵生成后， ?亞基從轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物上脫落，形成轉(zhuǎn)錄空泡。 核心酶沿模板 DNA前移，進(jìn)入延長(zhǎng)階段。 ? 轉(zhuǎn)錄延長(zhǎng)： 5? 3? DNA ? 原核生物轉(zhuǎn)錄過(guò)程中的羽毛狀現(xiàn)象 核糖體 RNA RNA聚合酶 ?在同一 DNA模板上，有多個(gè)轉(zhuǎn)錄同時(shí)在進(jìn)行； ?轉(zhuǎn)錄尚未完成，翻譯已在進(jìn)行。 這種形狀說(shuō)明： 2022/5/25 31 ? 依賴 Rho 因子的轉(zhuǎn)錄終止 ? 非依賴 Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止 三、原核生物轉(zhuǎn)錄終止分為依賴 ρ(Rho)因子與非依賴 ρ因子兩大類 轉(zhuǎn)錄終止 指 RNA聚合酶在 DNA模板上停頓下來(lái)不再前進(jìn) ， 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 RNA鏈從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物上脫落下來(lái) 。 ? 依據(jù)是否需要蛋白質(zhì)因子的參與 ， 原核生物轉(zhuǎn)錄終止分為： 2022/5/25 32 ? ρ因子是由相同亞基組成的六聚體蛋白質(zhì) ， 亞基分子量 46kD。 ? ρ因子能結(jié)合 RNA， 又以對(duì) poly C的結(jié)合力最強(qiáng) 。 ? ρ因子還有 ATP酶活性和解螺旋酶(helicase)的活性 。 （一）依賴 ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止 ? ρ因子： 2022/5/25 33 ? ρ因子的作用原理： 2022/5/25 34 ? 目前認(rèn)為 ， ρ因子終止轉(zhuǎn)錄的作用是：與 RNA轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物結(jié)合 ， 結(jié)合后 ρ因子和RNA聚合酶都可發(fā)生構(gòu)象變化 ， 從而使RNA聚合酶停頓 ， 解螺旋酶的活性使DNA/RNA雜化雙鏈拆離 ， 利于產(chǎn)物從轉(zhuǎn)錄復(fù)合物中釋放 。 2022/5/25 35 ρ因子 DNA RNA RNA聚合酶 2022/5/25 36 （二） 非依賴 Rho因子的轉(zhuǎn)錄終止 DNA模板上靠近終止處，有些特殊的堿基序列，轉(zhuǎn)錄出 RNA后， RNA產(chǎn)物形成特殊的結(jié)構(gòu)來(lái)終止轉(zhuǎn)錄。 ? RNA產(chǎn)物 3’端往往形成 莖環(huán)結(jié)構(gòu) ，該結(jié)構(gòu)阻礙 RNA聚合酶前移。 ? 莖環(huán)結(jié)構(gòu)后有一串 寡聚 U。 寡聚 U有利于RNA不再依附 DNA模板鏈而脫出。 5`UUGCAGCCUGACAAAUCAGGCUGAUGGCUGGUGACUUUUUAGUCACCAGCCUUUUU... 3` AGCCUUUUU 3` RNA 5?TTGCAGCCTGACAAATCAGGCTGATGGCTGGTGACTTTTTAGTCACCAGCCTTTTT... 3? DNA UUUU...… UUUU...… CUUUUU CCUUUUU 近終止區(qū)的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物形成發(fā)夾 (hairpin)結(jié)構(gòu)是非依賴 ρ因子終止的普遍現(xiàn)象。 2022/5/25 38 ? 莖環(huán)結(jié)構(gòu)使轉(zhuǎn)錄終止的機(jī)理： ? 使 RNA聚合酶變構(gòu)，轉(zhuǎn)錄停頓； ? 使轉(zhuǎn)錄復(fù)合物趨于解離， RNA產(chǎn)物釋放。 5180。pppG 5? 3? 3?5? RNApol 2022/5/25 39 第三節(jié) 真核生物的轉(zhuǎn)錄過(guò)程 The Process of Transcription in Eu
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