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分子生物學(xué)(上)-文庫吧

2025-03-23 03:16 本頁面


【正文】 性,既可合成又可降解 DNA,保證復(fù)制準(zhǔn)確性; 5’?3’外切酶功能,水解 5’末端,去除 5’端 RNA引物。DNA聚合酶Ⅱ:5’?3’聚合酶,活性低; 3’?5’外切酶,主要起修復(fù)作用。DNA聚合酶Ⅲ:7 種不同亞單位 9個(gè)亞基,生物活性形式為二聚體; 5’?3’聚合酶,活力較強(qiáng),主要酶; 3’?5’外切酶。復(fù)制的終止:RNA水解酶,DNA polyaseⅠ降解 RNA引物,并由 DNA聚合酶Ⅰ補(bǔ)齊缺口。DNA連接酶:將兩個(gè)岡崎片斷連起來。復(fù)制的方向:以雙向等速方式為主復(fù)制叉:復(fù)制時(shí),雙鏈 DNA需解開成兩股鏈分別進(jìn)行,所以復(fù)制起點(diǎn)呈叉子形式。復(fù)制子:一般把生物體的復(fù)制單位稱為復(fù)制子,一個(gè)復(fù)制單位只含一個(gè)復(fù)制起點(diǎn)。單起點(diǎn)、單方向:腺病毒單起點(diǎn)、雙方向;細(xì)菌、病毒、線粒體(T7 大腸桿菌)多起點(diǎn)、雙方向:真核細(xì)胞,大多原核生物。14 環(huán)狀 DNA雙鏈復(fù)制有幾種類型?線性:雙向復(fù)制時(shí)復(fù)制叉呈“眼”型。環(huán)狀:θ 型:起點(diǎn) Ori C,DNA 解旋松開,形成兩個(gè)相反復(fù)制叉。 滾環(huán)型:?jiǎn)蜗驈?fù)制的特殊方式,DNA 被專一切割,形成自由 5’端被從環(huán)中置換出來并被單鏈 DNA結(jié)合蛋白覆蓋,使 3’OH端繞 DNA環(huán)延伸。 Dloop:?jiǎn)蜗驈?fù)制的特殊方式(動(dòng)物線粒體中先發(fā)現(xiàn)) ,雙鏈在固定點(diǎn)解開復(fù)制,但兩條鏈的合成高度不對(duì)稱,互補(bǔ)鏈\游離單環(huán)(Dloop) 。15 復(fù)制起始位點(diǎn)的特征是什么?復(fù)制時(shí),雙鏈 DNA要解開成兩股鏈分別進(jìn)行,所以,這個(gè)復(fù)制起點(diǎn)呈現(xiàn)叉子的形式,被稱為復(fù)制叉。對(duì)一個(gè)生物體基因組而言,復(fù)制起點(diǎn)是固定的,表現(xiàn)為固定的序列,并識(shí)別參與復(fù)制起始的特殊蛋白質(zhì)。16 DNA Polymerase I, II, III性質(zhì)的比較 P47Ⅰ Ⅱ Ⅲ4 / 123’?5’外切 + + +5’?3’外切 + - -新生鏈合成 - - +生物學(xué)活性 1 15已知結(jié)構(gòu)基因 polA polB polC都需要模板指導(dǎo),以 dNTP作為底物,且需要 3’-OH 的引物鏈,聚合反應(yīng)方向?yàn)?5’ ?3’。都有 3’?5’外切活性,起核對(duì)作用。Ⅰ有Ⅱ、Ⅲ無 5’?3’外切活性。Ⅰ為單一多肽鏈,Ⅱ、Ⅲ為亞基酶。17 線性 DNA 5’端的復(fù)制如何?其生物學(xué)意義如何? 線性 DNA復(fù)制中的 RNA引物被切除后,留下 5’端部分單鏈 DNA,不能為 DNA聚合酶所作用,使子鏈短于母鏈。T4 和 T7噬菌體 DNA通過其末端的簡(jiǎn)并性使不同鏈的 3’端因互補(bǔ)而結(jié)合,其缺口被聚合酶作用填滿,再經(jīng)過 DNA連接酶作用生成二聯(lián)體。這個(gè)過程可重復(fù)進(jìn)行直到生成原長(zhǎng) 20多倍的多聯(lián)體,并由噬菌體 DNA編碼的核酸酶特異切割形成單位長(zhǎng)度的 DNA分子。18 DNA的修復(fù)有哪幾類?切除修復(fù):(1)堿基切除:在糖苷水解酶等一系列酶的作用下,將受損部位產(chǎn)生的 AP位點(diǎn)核苷酸在內(nèi)的 DNA小片段切除,由 DNA polyaseI以另一條完整鏈為模板合成新片斷,由 DNA連接酶連接新鏈的過程。(2)核苷酸切除:核苷酸發(fā)生損傷后,由 DNA切割酶在已損傷的核苷酸 3’、5’分別切開磷酸糖苷鍵,移去小片斷后由 DNA polyaseI合成新片斷,并由 DNA連接酶完成修復(fù)中的最后一道工序。錯(cuò)配修復(fù):Dam 甲基化酶可使 DNA5’的 GATC序列中腺苷酸-N 6位甲基化。一旦復(fù)制起始。母鏈就會(huì)在開始復(fù)制前幾秒至及分鐘內(nèi)部被甲基化,只要兩條 DNA堿基出現(xiàn)錯(cuò)配,修復(fù)系統(tǒng)會(huì)“保存母鏈,修正子鏈” ,使子鏈中錯(cuò)配堿基被切除修復(fù)。直接修復(fù):把被損傷的堿基回復(fù)到原來的狀態(tài),并不需要切除堿基或核苷酸,光復(fù)活作用:DNA 光解酶。 O6-甲基鳥嘌呤脫甲基化的甲基化轉(zhuǎn)移酶 G-T 錯(cuò)配 單鏈斷裂修復(fù)重組修復(fù):復(fù)制后修復(fù),機(jī)體細(xì)胞可以對(duì)再復(fù)制起始時(shí)尚未修復(fù)的 DNA損傷部位可以先復(fù)制再修復(fù)。易錯(cuò)修復(fù)和 SOS應(yīng)急反應(yīng):生物體為保細(xì)胞存活,受損部位既使出現(xiàn)不配對(duì)堿基也照樣復(fù)制,出現(xiàn)高突變率。19 描述復(fù)合轉(zhuǎn)座子的結(jié)構(gòu)特征,轉(zhuǎn)座的遺傳效應(yīng)表現(xiàn)在哪幾個(gè)方面?P54轉(zhuǎn)座子:存在于染色體 DNA上,可自主復(fù)制和位移的基本單位。轉(zhuǎn)座:一個(gè)轉(zhuǎn)座子由基因組的一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位置的過程。結(jié)構(gòu)和分類:插入序列(IS):不含任何宿主基因,本身不具表形效應(yīng),只有轉(zhuǎn)座到某一基因附近或插入某一基因內(nèi)部后,引起失活或極性效應(yīng)才可判斷其存在。結(jié)構(gòu):(1)很小的 DNA片斷,1kb。 (2)末端有倒置重復(fù)序列。5 / 12 (3)轉(zhuǎn)座時(shí)往往宿主靶位點(diǎn)一小段 DNA形成 IS兩端的正向重復(fù)序列。 (4)除 IS1外,所有已知 IS序列只有一個(gè)開放讀碼框。2復(fù)合轉(zhuǎn)座因子:一類帶有某些抗藥性基因(或其他宿主基因)的轉(zhuǎn)座子。結(jié)構(gòu):功能基因兩翼往往是兩個(gè)相同或高度同源的 IS序列。 (表明 IS序列插入到某個(gè)功能基因兩端時(shí)可能產(chǎn)生復(fù)合轉(zhuǎn)座子) 。*轉(zhuǎn)座能力由 IS序列決定和調(diào)節(jié)。TnA家族:有 3個(gè)基因,其中一個(gè)編碼 β-內(nèi)酰胺酶,另兩個(gè)是轉(zhuǎn)座作用必須的。遺傳效應(yīng):(1)插入突變:若位于某操縱子之前,可能極性突變,失活。(2)殘生新基因。(3)產(chǎn)生染色體畸變:若復(fù)制性轉(zhuǎn)座發(fā)生在原有位點(diǎn)附近時(shí),導(dǎo)致兩個(gè)拷貝同源重組,引起 DNA缺失或倒位。(4)引起生物進(jìn)化:可使原來相距甚遠(yuǎn)的基因組合倒一起,構(gòu)建成一個(gè)操縱子單元,也可能產(chǎn)生新功能蛋白。20 轉(zhuǎn)錄的起始序列是什么?它的主要結(jié)構(gòu)特征。原核:-10TATA 區(qū),-35TTGACA 區(qū),啟動(dòng)區(qū)范圍較小。真核:-25~-35TATA 區(qū),-70~-80CAAT 區(qū),調(diào)控區(qū)較大,還擁有 GC區(qū)和增強(qiáng)子區(qū)。21 真核生物轉(zhuǎn)錄的主要成分有哪些?P66DNA模板,游離的核糖核酸,含 σ 因子的 RNA聚合酶,轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。真核生物 RNA聚合酶不能直接識(shí)別基因的啟動(dòng)區(qū),所以需要一些被稱為轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子的輔助蛋白按特定順序結(jié)合在啟動(dòng)子上,RNA 聚合酶才與之結(jié)合成復(fù)雜的前起始復(fù)合物。22 RNA聚合酶全酶與核心酶的組成成分及其作用是什么?主要區(qū)別?以 DNA為指導(dǎo)的 RNA聚合酶:(1)以 4種核糖核苷三磷酸 NTP作為底物,DNA 為模板,Mn 2+/Mg2+輔助因子。(2)不需要任何引物。(3)是轉(zhuǎn)錄過程種最重要的酶,但無校對(duì)功能。核心酶:(原核)2 個(gè) α、β、β’ 、ω 亞基組成。全酶:核心酶加上一個(gè) σ 亞基,只有 σ 存在時(shí),轉(zhuǎn)錄起始才進(jìn)行,σ 亞基為起始亞基。(啟動(dòng)子選擇和轉(zhuǎn)錄的起始)α:核心酶組裝,啟動(dòng)子識(shí)別,參與 RNApolyase和部分調(diào)節(jié)因子相互作用。β、β’:共同組成 RNA聚合酶反應(yīng)中心,與真核的兩個(gè)大亞基有同源性。ω:功能未知。σ:是酶的別構(gòu)效應(yīng)物,提高 RNA聚合酶對(duì)啟動(dòng)子 DNA親和力,專一性識(shí)別模板上的啟動(dòng)子;不同 σ 因子識(shí)別不同啟動(dòng)子。區(qū)別:核心酶無起始聚合酶活性,只能使已開始轉(zhuǎn)錄的 RNA延長(zhǎng)。關(guān)于轉(zhuǎn)錄的幾個(gè)概念編碼鏈:有意義鏈,與 mRNA序列相同的 DNA鏈。模板鏈:反義鏈,根據(jù)堿基互補(bǔ)原則指導(dǎo) mRNA合成的 DNA鏈。mRNA:編碼特定蛋白質(zhì)序列的信使 RNA。tRNA:能特異性解讀 mRNA種的遺傳信息。將其轉(zhuǎn)化成相應(yīng) AA后加入肽鏈的轉(zhuǎn)移 RNA。rRNA:直接參與核糖體中蛋白質(zhì)合成的核糖體 RNA。啟動(dòng)子:5’確保轉(zhuǎn)錄精確而有效地起始的序列。 (有轉(zhuǎn)錄起始特異性)轉(zhuǎn)錄單元:從啟動(dòng)子開始至終止子結(jié)束的 DNA序列。轉(zhuǎn)錄起點(diǎn):指與新生 DNA鏈上第一個(gè)核苷酸相對(duì)應(yīng)的 DNA鏈上的堿基。 (通常為嘌呤)23 真核細(xì)胞中三類 RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的定位及其對(duì)?鵝
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