【正文】 ）反應(yīng)需要有 3?OH存在；（ 4） DNA鏈的合成方向?yàn)?5 ? ? 3 ? N 3? 5 ? 5 ? O OH PPPOCH2 OH 原核生物中的 DNA聚合酶 DNA polymetases ⑴ DNA聚合酶 Ⅰ (DNA pol I) : 單體酶 ,多肽鏈內(nèi)含一個(gè)鋅原子， 多功能酶 。它具有5?? 3 ?聚合酶功能； 3’ ? 5’ 外切酶活性（ 校對(duì)功能）； 5’ ? 3’ 外切酶活性 此多肽鏈用蛋白酶水解，得兩個(gè)片段，大片段叫Klenow片段， Klenow片段執(zhí)行前兩種功能，小片段執(zhí)行后一功能。 ⑵ DNA聚合酶 Ⅱ (DNA pol II) ： 多亞基酶 ， 聚合作用，但聚合活力很低；具有 3’ ? 5’ 外切酶活性。其它生理功能尚不清楚，可能在修復(fù)紫外光引起的 DNA損傷中起作用。 ⑶ DNA聚合酶 Ⅲ (DNA pol III) ： 是原核生物 DNA復(fù)制的主要聚合酶 ，該酶由 10種（ 22個(gè)）亞基組成，其中 ?、 ?、 ?形成全酶的 核心酶 。具有 5’ ?3’ DNA聚合酶活性（ ?亞基， 速率高）； 具有 3’ ? 5’ 外切酶（ ?亞基） 的校對(duì)功能，提高 DNA復(fù)制的保真性；還具有 5’ ? 3’ 外切酶活性 （ 4） DNA聚合酶 IV和 V： 1999年發(fā)現(xiàn)，當(dāng) DNA嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，誘導(dǎo)產(chǎn)生。 DNA聚合酶 Ⅰ DNA聚合酶 Ⅱ DNA聚合酶 Ⅲ 亞基數(shù)目 1（單體酶） ＞ 1（多亞基酶 ） ＞ 1（多亞基酶） 5’ 3’ 聚合活性 + 中 + 很低 + 很高 3‘ 5’ 外切活性 + + + （保護(hù) DNA復(fù)制的 忠實(shí)性 fidelity） 5‘ 3’外切活性 + + 主要是對(duì) DNA損傷的修復(fù)；以及在 DNA復(fù)制時(shí)切除 RNA引物并填補(bǔ)其留下的空隙 。 修復(fù)紫外光引起的 DNA損傷 DNA 復(fù)制的主要 聚合酶，還具有3’ 5‘ 外切酶的校對(duì)功能，提高DNA復(fù)制的保真性 三種 DNA聚合酶都具有校正活性，即它們都具有 3ˊ→5ˊ 外切酶活性，可以將錯(cuò)配的核苷酸切去，再將正確的填上。這一功能對(duì)于 DNA合成 的穩(wěn)定性，保真性具有非常重要的意義。 在真核細(xì)胞內(nèi)有五種 DNA聚合酶 （與細(xì)菌 DNA聚合酶的性質(zhì)基本相同：底物、模板、引物、方向） α β γ δ ε 定位 細(xì)胞核 細(xì)胞核 線粒體 細(xì)胞核 細(xì)胞核 3‘ 5’ 外切 + + + 酶活性 功能 引物 合成 修復(fù) 作用 線粒體 DNA 的復(fù)制 核 DNA 的復(fù)制 修復(fù) 作用 3 .DNA連接酶 Ligase（ 1967年發(fā)現(xiàn)）： 若雙鏈DNA中一條鏈有切口，一端是 3’ OH， 另一端是 5‘ 磷酸基，連接酶可催化這兩端形成磷酸二酯鍵，而使切口連接。 3‘ 5‘ 3‘ 5‘ OH P 大腸桿菌和其它細(xì)菌的 DNA連接酶要求 NAD+提供能量，在高等生物和噬菌體中，則要求 ATP提供能量。T4噬菌體的 DNA連接酶 不僅能在模板鏈上連接 DNA和DNA鏈之間的切口，而且能連接無(wú)單鏈粘性末端的平頭雙鏈 DNA。 連接酶的反應(yīng)機(jī)制 ： 酶 + NAD+(ATP) 酶 AMP + 煙酰胺單核苷酸 （ PPi） 酶 AMP + P5‘DNA 酶 + AMPP5’DNA DNA3’OH + AMPP5’DNA DNA3’OP5’DNA+AMP ?DNA連接酶 在 DNA復(fù)制、損傷修復(fù)、重組等過(guò)程中起重要作用作用 4. 拓?fù)洚悩?gòu)酶 (topoisomeraseTop)： 催化 DNA的拓?fù)?連環(huán)數(shù)（ L） 發(fā)生變化的酶，在DNA重組修復(fù)和其他轉(zhuǎn)變方面起重要作用。 除連環(huán)數(shù)不同外其它性質(zhì)均相同的 DNA分子稱為拓?fù)洚悩?gòu)體，引起拓?fù)洚悩?gòu)體反應(yīng)的酶稱為 拓?fù)洚悩?gòu)酶 , 作用 解開(kāi) DNA的超螺旋結(jié)構(gòu) 拓?fù)洚悩?gòu)酶 ?： （轉(zhuǎn)環(huán)酶）： 在 DNA的特定部位將雙鏈中的 一條 切開(kāi)，使鏈的末端沿螺旋軸松解的方向轉(zhuǎn)動(dòng)，然后將切口封閉，使負(fù)超螺旋數(shù)減少（不需要ATP供能），每作用一次可使 L值增加 1。 拓?fù)洚悩?gòu)酶 Π ： （旋轉(zhuǎn)酶）： 將 DNA特定部位的 兩條鏈均切開(kāi)并連接，使 DNA分子去除正超螺旋，引入負(fù)超螺旋（需要 ATP供能）， 每作用一次可使 L值減少 2。 二者共同控制 DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。 解螺旋酶 （解鏈酶－ DNA helicase）： 通過(guò)水解 ATP將 DNA兩條鏈打開(kāi)。 Rep蛋白就是解螺旋酶，還有解螺旋酶 I、 II、III。 Rep蛋白沿 3 ’ ?5’ 移動(dòng)， 解螺旋酶 I、 II、 III沿 5 ’ ?3’ 移動(dòng) 。 ： ⑴單鏈結(jié)合蛋白 (SSBsinglestrand binding protein)： SSBP與解開(kāi)的單鏈牢固結(jié)合，防治它們?cè)俳佑|并重新結(jié)成堿基對(duì)；同時(shí)也可避免核酸酶對(duì)單鏈 DNA的水解，使正在復(fù)制中的 DNA模板鏈得到保護(hù)。 ⑵引發(fā)前體 :它由多種蛋白質(zhì) dnaA、 dnaB、 dnaC、 n、n’、 n’’和 i 組成。 引發(fā)前體再與引發(fā)酶組裝成 引發(fā)體(primosome)。 引發(fā)體可以沿模板鏈移動(dòng) ,具有識(shí)別合成起始位點(diǎn)的功能，移動(dòng)到一定位置上即可引發(fā) RNA引物 的合成。 移動(dòng)和引發(fā)均需要 ATP提供能量， n’蛋白具有 ATP酶的活力。引發(fā)體的移動(dòng)與 復(fù)制叉 移動(dòng)的方向相同，與 岡崎片段 的合成方向相反。 引發(fā)酶 (Primase)實(shí)質(zhì)是 RNA聚合酶 三、 DNA的復(fù)制過(guò)程 ： （ 以大腸桿菌為例 ） ? 雙鏈的解開(kāi) ? RNA引物的合成 ? DNA鏈的延伸 ? 切除 RNA引物，填補(bǔ)缺口，連接相鄰的 DNA片段 雙鏈的解開(kāi) 一些概念： ? DNA的復(fù)制有特定的起始位點(diǎn)，叫做 復(fù)制原點(diǎn) 。常用 oriC表示。 oriC區(qū)序列包含兩個(gè)主要重復(fù)單位 9堿基對(duì)重復(fù)序列（ 4個(gè)拷貝）和富含 AT堿基對(duì)的重復(fù)區(qū)（ 3個(gè)拷貝） ，是多種蛋白的結(jié)合位點(diǎn) ? 大腸桿菌染色體 DNA以及真核生物的細(xì)胞器 DNA為雙鏈環(huán)狀，只有 一個(gè) 復(fù)制原點(diǎn)，而真核生物染色體DNA是線性雙鏈分子，含有 許多 復(fù)制起點(diǎn)。 ? 從復(fù)制原點(diǎn)到終點(diǎn)，組成一個(gè)復(fù)制單位，叫 復(fù)制子（基因組獨(dú)立進(jìn)行復(fù)制的單位）。 ?復(fù)制原點(diǎn) 由 Dna