生物化學(xué)-dna復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、翻譯-文庫(kù)吧
2025-01-01 12:13 本頁(yè)面
【正文】 ? DnaA蛋白 ? DnaB蛋白 ? 引物酶 ? 結(jié)合到 DNA雙鏈復(fù)制起始部位 ? 解鏈酶的作用 ? 合成 RNA引物 RNA引物的合成和復(fù)制的起始必需。 DNA連接酶 ? 催化二段 DNA鏈之間 3’,5’ 磷酸二酯鍵的形成 3’ OH 5’ 5’ 3’ O O P O O 有缺口的 DNA鏈 DNA連接酶 ATP AMP+PPi O O P O O 5’ 3’ 缺口封閉 ? 缺口填補(bǔ) : ? 連接雙股 DNA分子中一鏈的缺口 ? 雙鏈 DNA分子中雙鏈的缺口 ? 不能 連接二分子單鏈 DNA DNA連接酶 的應(yīng)用 : . . : 限制性內(nèi)切酶切割后形成的粘性末端或平頭末端的連接 . 三、 原核 細(xì)胞 DNA的復(fù)制 合成所需材料： ①模板 DNA ② 原料：合成引物所需 NTP 合成 DNA所需的 dNTP ③ 酶： 合成方向： 5’→3’ ； 模板鏈解讀方向： 3’ → 5’ 合成步驟： (1)解旋 ：由拓?fù)洚悩?gòu)酶 Ⅱ 解除超螺旋； (2)解鏈 ：由 DNA解螺旋酶催化， SSB與單鏈 DNA結(jié)合，防止雙鏈間氫鍵再形成； (3)識(shí)別起點(diǎn) ：由 DNA指導(dǎo)的引物酶完成； (4)RNA引物合成 ：以 DNA為模板，在引物酶催化下由DNA轉(zhuǎn)錄生成 510個(gè)核糖核苷酸鏈； (5)DNA鏈延長(zhǎng) ：在引物 3’OH基上，按堿基互補(bǔ)原則經(jīng) DNA聚合酶（主要是酶 Ⅲ ）催化 DNA鏈從 5’→3 ’延伸。 前導(dǎo)鏈為連續(xù)的；后滯鏈為不連續(xù)的岡崎片段。 (6)切除引物，補(bǔ)齊缺口 ：由 DNA聚合酶（主要是酶Ⅰ ）催化，切去 RNA引物；按堿基互補(bǔ)原則，沿5’→3 ’方向，補(bǔ)齊缺口。 (7)連接封口 ：由 DNA連接酶催化，將補(bǔ)齊缺口的 3’OH基與下一個(gè)岡崎片段的 5’P以磷酸二酯鍵連接起來(lái)，最終形成完整的、與模板互補(bǔ)的 DNA新鏈。 (8)校正并修復(fù) DNA：由 DNA聚合酶校正并切除錯(cuò)配，再按 5’→3 ’方向加上正確核苷酸。 模板 DNA 前導(dǎo)鏈模板 解旋酶 引物 后滯鏈模板 DNpolymerase 連接酶 岡崎片段 已連接的 岡崎片段 單鏈結(jié)合蛋白 新合成的 前導(dǎo)鏈 DNA聚合酶 4）母本 DNA雙鏈的分離 四、 真核 細(xì)胞 DNA的復(fù)制： ? DNA模板上有 多個(gè)起點(diǎn) ，即真核細(xì)胞 DNA復(fù)制由 多個(gè)復(fù)制子 共同完成。 真核生物與原核類似，但更復(fù)雜，不同之處： 復(fù)制子 ? 端粒的復(fù)制： 端粒： 線形染色體末端的核苷酸序列。 染色體兩端 DNA子鏈上最后復(fù)制的 RNA引物，去除后留下空隙。留下的空隙如沒法填補(bǔ)，細(xì)胞染色體DNA將面臨復(fù)制一次就縮短一些的問(wèn)題。 事實(shí)上染色體雖經(jīng)多次復(fù)制，卻不會(huì)越來(lái)越短的。因?yàn)檎婧松锶旧w線性 DNA分子末端存在著特殊的結(jié)構(gòu)稱為 端粒 。 端粒酶 ： 催化端粒復(fù)制的一種 RNA蛋白質(zhì)復(fù)合物 ，攜帶 RNA模板（與端?；パa(bǔ)）的逆轉(zhuǎn)錄酶。 功能： 1）起模板作用； 2）有逆轉(zhuǎn)錄酶的作用。 端粒復(fù)制 : 1）借 RNA與末端 DNA互補(bǔ)； 2）以酶上 RNA為模板合成一段 DNA； 3）延長(zhǎng)的 DNA反折為雙鏈。 ? 是不依賴模板 DNA的復(fù)制來(lái)補(bǔ)償切除引物引起的末端縮短。 端粒、端粒酶意義 ? 與細(xì)胞衰老、凋亡有關(guān)； 端粒的平均長(zhǎng)度隨細(xì)胞分裂次數(shù)的增多及年齡的增長(zhǎng)而逐漸變短至消失，可導(dǎo)致染色體穩(wěn)定性下降，導(dǎo)致細(xì)胞衰老凋亡。 正常：體細(xì)胞端粒酶活性喪失，端粒的長(zhǎng)度不斷縮短。 異常：腫瘤細(xì)胞端粒酶活性恢復(fù)，端粒復(fù)制，細(xì)胞惡性增殖 ? 抑制端粒酶活性可防治腫瘤。 ?轉(zhuǎn)錄的 產(chǎn)物 ： 第二節(jié) RNA的生物合成 — 轉(zhuǎn)錄 轉(zhuǎn)錄： DNA指導(dǎo)下的 RNA合成。 ?轉(zhuǎn)錄的 場(chǎng)所 ： 信使 RNA（ mRNA） 核糖體 RNA（ rRNA） 轉(zhuǎn)運(yùn)移 RNA（ tRNA） ?轉(zhuǎn)錄的 原料 ： （ NMP） n＋ NTP→ （ NMP） n+l ＋ ppi 四種 NTP： ATP 、 UTP、 GTP、 CTP 細(xì)胞核 轉(zhuǎn)錄 RNA DNA ? 均以 DNA為模板； ? 都是生成 3’， 5’ — 磷酸二酯鍵 ； ? 合成的方向都是 5’ →3 ’； ? 遵從堿基配對(duì)規(guī)律。 一、轉(zhuǎn)錄與 DNA復(fù)制的相似之處： 復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的區(qū)別 A U ， T A ， G CA T ， G C配對(duì)mR N A ， tR N A ， r R NA子代雙鏈 DN A（ 半保留復(fù)制）產(chǎn)物RN A 聚合酶（ RN A pol ）DN A 聚合酶酶NTPdNTP原料模板鏈轉(zhuǎn)錄（不對(duì)稱轉(zhuǎn)錄）兩股鏈均復(fù)制模板轉(zhuǎn)錄復(fù)制， ，， ，（）酶二、轉(zhuǎn)錄的 模板 ： ? 模板鏈 ： DNA雙鏈中只一條鏈可做轉(zhuǎn)錄模板，又稱為“ Watson鏈 ”。 ? 編碼鏈： 無(wú)轉(zhuǎn)錄功能的 DNA鏈，又稱為“ Crick鏈 ” 。 ? 二者可在同一條鏈上。 轉(zhuǎn)錄是以 結(jié)構(gòu)基因 作為單位的。
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