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[理學(xué)]第四章 核酸-文庫吧

2024-12-31 17:32 本頁面


【正文】 側(cè),磷酸和脫氧核糖基位于螺旋外側(cè)。堿基環(huán)平面與螺旋軸垂直,糖基環(huán)平面與堿基環(huán)平面成 90176。 角。DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點l ( 3)螺旋橫截面的直徑約為 2 nm, 每條鏈相鄰兩個堿基平面之間的距離(堿基堆積距離)為 nm( 實測 ), 相鄰核苷酸彼此相差36度。每 10對核苷酸形成一個螺旋,其螺矩(即螺旋旋轉(zhuǎn)一圈)高度為 nm。 DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的要點l ( 4) 兩條 DNA鏈相互結(jié)合以及形成雙螺旋的力是鏈間的堿基對所形成的氫鍵。堿基的相互結(jié)合具有嚴格的配對規(guī)律,即腺嘌呤( A) 與胸腺嘧啶( T) 結(jié)合,鳥嘌呤( G) 與胞嘧啶( C) 結(jié)合,這種配對關(guān)系,稱為堿基互補。 A和 T之間形成兩個氫鍵, G與 C之間形成三個氫鍵。l 在 DNA分子中,嘌呤堿基的總數(shù)與嘧啶堿基的總數(shù)相等。雙螺旋的幾種形式目前已知幾種不同形式 DNA2. DNA雙螺旋的穩(wěn)定性l DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)在生理條件下是很穩(wěn)定的。l 維持這種穩(wěn)定性的因素包括:兩條 DNA鏈之間形成的氫鍵; 由于雙螺旋結(jié)構(gòu)內(nèi)部形成的疏水區(qū),消除了介質(zhì)中水分子對堿基之間氫鍵的影響; 介質(zhì)中的陽離子(如 Na+、 K+和 Mg2+) 中和了磷酸基團的負電荷,降低了 DNA鏈之間的排斥力、范德華引力等。l 改變介質(zhì)條件和環(huán)境溫度,將影響雙螺旋的穩(wěn)定性。穩(wěn)固 DNA雙螺旋的作用力l 堿基堆積力 l H鍵 l 離子鍵DNA的存在形式染色體與 DNA的關(guān)系l 能夠有效地解釋遺傳信息的儲存、傳送和自我復(fù)制。l 提出了遺傳信息的流動過程 復(fù)制 DNA 轉(zhuǎn)錄 RNA 翻譯蛋白質(zhì)DNA雙螺旋模型的意義雙螺旋模型的意義三、三、 DNA的三級結(jié)構(gòu)的三級結(jié)構(gòu)主要發(fā)現(xiàn)于:病毒、線主要發(fā)現(xiàn)于:病毒、線粒體、葉綠體上。粒體、葉綠體上。有:開環(huán)狀、閉環(huán)超螺有:開環(huán)狀、閉環(huán)超螺旋、發(fā)夾型、線團狀旋、發(fā)夾型、線團狀DNA分子的結(jié)構(gòu)特征分子的結(jié)構(gòu)特征l 原核生物 DNA分子中有 基因重疊 現(xiàn)象l 真核生物 DNA分子中普遍存在 非編碼順 序(內(nèi)含子 )l 編碼的核苷酸順序攜帶著遺傳信息ATGCCGAGTCAGACTACGAGENE1GENE2插入順序編碼區(qū)DNA:ACGTGGCCAGCCThr Trp Pro AlaAA:RNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)l 單鏈 l 局部堿基能配 對形成 雙螺旋,不能配對的區(qū)域形成 突起 (環(huán) ) RNA一級結(jié)構(gòu)的特點l RNA一級結(jié)構(gòu)研究最多的是tRNA、 rRNA以及一些小分子的 mRNA。 其中l(wèi) tRNA分子具有以下特點:l 分子量 左右,大約由70- 90個核苷酸組成,沉降系數(shù)為 4S左右。l 分子中含有較多的修飾成分。l 339。末端都具有 CpCpAOH的結(jié)構(gòu)。tRNA的高級結(jié)構(gòu)l 1, tRNA的二級結(jié)構(gòu)l tRNA的二級結(jié)構(gòu)都呈 “ 三葉草 ” 形狀,在結(jié)構(gòu)上具有某些共同之處,一般可將其分為四臂四環(huán):包括氨基酸接受區(qū)、反密碼區(qū)、二氫尿嘧啶區(qū)、 T?C區(qū)和可變區(qū)。除了氨基酸接受區(qū)、可變區(qū)外,其余每個區(qū)均含有一個突環(huán)和一個臂。 (1)氨基酸接受區(qū)包含有 tRNA的 3’ 末端和 5’ 末端, 3’ 末端的最后 3個核苷酸殘基都是 CCA, A為核苷。氨基酸可與其成酯,該區(qū)在蛋白質(zhì)合成中起攜帶氨基酸的作用。(2)反密碼區(qū)與氨基酸接受區(qū)相對的一般含有 7個核苷酸殘基的區(qū)域,其中正中的 3個核苷酸殘基稱為反密碼子。(3)二氫尿嘧啶區(qū) 該區(qū)含有二氫尿嘧啶。(4) T?C區(qū) 該區(qū)與二氫尿嘧啶區(qū)相對, 假尿嘧啶核苷 —胸腺嘧啶核糖核苷環(huán) (T?C)由 7個核苷酸組成,通過由 5對堿基組成的雙螺旋區(qū) (T?C臂 )與 tRNA的其余部分相連。除個別例外,幾乎所有tRNA在此環(huán)中都含有 T?C 。(5)可變區(qū) 位于反密碼區(qū)與 T?C區(qū)之間,不同的 tRNA該區(qū)變化較大。l 四環(huán)四臂l aa臂 與 反密碼環(huán) 是識別 aa與密碼的重要結(jié)構(gòu)tRNA的結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)TΨC環(huán)D環(huán)反密碼環(huán)2,tRNA的三級結(jié)構(gòu)l 在三葉草型二級結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上,突環(huán)上未配對的堿基由于整個分子的扭曲而配成對形成三級結(jié)構(gòu),目前已知的 tRNA的三級結(jié)構(gòu)均為倒 L型 。mRNA一級結(jié)構(gòu)的特點l 真核細胞 mRNA的 3 ’ 末端有一段長達 200個核苷酸左右的聚腺苷酸 (polyA), 稱為 “ 尾結(jié)構(gòu)” , 5’ 末端有一個甲基化的鳥苷酸,稱為 “ 帽結(jié)構(gòu) ” 。 “ 穿靴戴帽 ”l 大多數(shù)真核細胞 mRNA在 3 ’ 末端有一段長約 200核苷酸的 polyA。 polyA是在轉(zhuǎn)錄后經(jīng) polyA聚合酶的作用而添加上去的。原核生物的 mRNA一般無polyA, 但某些病毒 mRNA也有 3’polyA,polyA 可能有多方面功能 ,與 mRNA從細胞核到細胞質(zhì)的轉(zhuǎn)移有關(guān);與 mRNA的半衰期有關(guān),新合成的 mRNA, polyA鏈較長,而衰老的 mRNA, polyA鏈縮短。l mRNA結(jié)構(gòu)功能要點:l 線形單鏈結(jié)構(gòu),攜帶 DNA信息,作為指導(dǎo)合成蛋白質(zhì)的 模板,l 5?端有 甲基化結(jié)構(gòu) ,l 3?polyA尾結(jié)構(gòu),l 半衰期短 (幾分鐘到幾小時 )。 rRNA真核細胞核糖體 rRNA有四類: 5SrRNA, 18SrRNA, 28SRNA。 許多 rRNA的一級結(jié)構(gòu)及由一級結(jié)構(gòu)推導(dǎo)出來的二級結(jié)構(gòu)都已闡明,但是對許多 rRNA的功能迄今仍不十分清楚。RNA的高級結(jié)構(gòu)特點l RNA是單鏈分子,因此,在 RNA分子中,并不遵守堿基種類的數(shù)量比例關(guān)系,即分子中的嘌呤堿基總數(shù)不一定等于嘧啶堿基的總數(shù)。l RNA分子中,部分區(qū)域也能形成雙螺旋結(jié)構(gòu),不能形成雙螺旋的部分,則形成突環(huán)。這種結(jié)構(gòu)可以形象地稱為 “ 發(fā)夾型” 結(jié)構(gòu)。l 在 RNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,堿基的配對情況不象 DNA中嚴格。 G 除了可以和 C 配對外,也可以和 U 配對。 GU 配對形成的氫鍵較弱。不同類型的 RNA, 其二級結(jié)構(gòu)有明顯的差異。l tRNA中除了常見的堿基外,還存在一些稀有堿基,這類堿基大部分位于突環(huán)部分 .rRNA mRNA tRNA 反密碼子氨基酸 新生肽鏈核糖體 (rRNA+蛋白質(zhì))mRNAtRNA作業(yè)l概念: Chargaff( 查加夫) 定律。l簡述 DNA雙螺旋模型的要點。l簡述三種 RNA的主要作用。l寫出以下核酸的結(jié)構(gòu)式ATTGCl 一、一般性質(zhì)l 1. 性狀 DNA 為白色類似石棉樣的纖維狀物 RNA為白色粉末或結(jié)晶 DNA 和 RNA均為不對稱大分子,長度與直 徑之比可達 107l 都是極性化合物,易溶于水 ,都溶于 2甲氧乙醇,但不溶于一般有機溶劑如乙醇、乙醚、氯仿、戊醇和三氯醋酸。所以,常用乙醇做沉淀劑,使其從溶液中析出。 脫氧核糖核蛋白( DNP)核糖核蛋白( RNP) 易溶于水溶液中。第三節(jié)、核酸的性質(zhì)l 3 . 分子量 RNA和 DNA的相對分子質(zhì)量都很大, DNA 的相對分子質(zhì)量比 RNA的大。 RNA的相對分子質(zhì)量大約從幾萬到幾百 萬或更大一些; DNA的一般在 1061010l DNA耐堿, RNA易被堿水解 l :鑒別 DNA和 RNA 濃 HCl 濃 HClRNA → 綠色化合物 DNA → 藍紫色化合物 苔黑酚 二苯胺啡啶溴紅(熒光染料)和溴嘧啶都可對 DNA染色,原理是卡在分子中, DNA的離心和電泳顯色可用它們。 l 在核酸分子中,由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系,因而具有獨特的紫外線吸收光譜,一般在260nm左右有最大吸收峰,可以作為核酸及其組分定性和定量測定的依據(jù)。l 嘌呤堿基和嘧啶堿基是核酸中最重要的組分。它們的性質(zhì)對于核酸的性質(zhì)和生物功能具有重要影響作用。l 含氮堿基具有芳香環(huán)的結(jié)構(gòu)特點。由于環(huán)上極性基團(如羰基、氨基等)的存在,堿基能夠發(fā)生酮式 烯醇式或氨式 亞氨式的互變異構(gòu)。因此,堿基既有芳香環(huán)的特性,也具有氨、酮和烯醇等相應(yīng)的化學(xué)性質(zhì)。二、含氮堿基的性質(zhì)1,含氮堿基的堿性 l 嘌呤堿基和嘧啶堿基都具有弱堿性。l 環(huán)內(nèi)氨基的 pKa值約為 。l 堿基環(huán)外的氨基(存在于 A、 G和 C) 的堿性很弱,在生理 pH條件下不能被質(zhì)子化。這種情況與苯胺分子中的氨基相似。l 因此嘌呤和嘧啶堿基的堿性主要是環(huán)內(nèi)氨基的貢獻。2,堿基環(huán)氮原子的烷基化反應(yīng) l 在一定條件下,堿基環(huán)上的氮原子可以發(fā)生烷基化反應(yīng)。l 在同樣條件下, U和 T基本上不起反應(yīng)。應(yīng)用 CH2N2 (疊氮甲烷)作為烷基化劑,則所有堿基都能發(fā)生上述反應(yīng)。三、核酸的性質(zhì)l1.核酸的兩性性質(zhì)及等電點l 與蛋白質(zhì)相似,核酸分子中既含有酸性基團(磷酸基)也含有堿性基團(氨基),因而核酸也具有兩性性質(zhì)。l 由于核酸分子中的磷酸是一個中等強度的酸,而堿性(氨基)是一個弱堿,所以核酸的等電點比較低。如 DNA的等電點為 4~ , RNA的等電點為 2~ 。l RNA的等電點比 DNA低的原因,是 RNA分子中核糖基 2′OH 通過氫鍵促進了磷酸基上質(zhì)子的解離, DNA沒有這種作用。2.核酸的水解l ( 1)酸或堿水解 l 核酸分子中的磷酸二酯鍵可在酸或堿性條件下水解切斷。l DNA和 RNA對酸或堿的耐受程度有很大差別。例如,在 mol/L NaOH溶液中, RNA幾乎可以完全水解,生成 2′ 或 3′ 核苷酸; DNA在同樣條件下則不受影響。這種水解性能上的差別,與 RNA核糖基上 2′OH 的鄰基參與作用有很大的關(guān)系。在 RNA水解時, 2′OH 首先進攻磷酸基,在斷開磷酯鍵的同時形成環(huán)狀磷酸二酯,再在堿的作用形成水解產(chǎn)物。( 2)酶水解l 生物體內(nèi)存在多種核酸水解酶。這些酶可以催化水解多聚核苷酸鏈中的磷酸二酯鍵。l 以 DNA為底物的 DNA水解酶( DNases) 和以 RNA為底物的 RNA水解酶( RNases)。l 根據(jù)作用方式又分作兩類:核酸外切酶和核酸內(nèi)切酶。l 核酸外切酶的作用方式是從多聚核苷酸鏈的一端(3′ 端或 5′ 端)開始,逐個水解切除核苷酸;核酸內(nèi)切酶的作用方式剛好和外切酶相反,它從多聚核苷酸鏈中間開始,在某個位點切斷磷酸二酯鍵。l 在分子生物學(xué)研究中最有應(yīng)用價值的是限制性核酸內(nèi)切酶。這種酶可以特異性的水解核酸中某些特定堿基順序部位。 P150,P1613.核酸的變性、復(fù)性、雜交與沉降l (1) 核酸的變性l 核酸的變性是指核酸雙螺旋區(qū)的多聚核苷酸鏈間的氫鍵斷裂,變成單鏈結(jié)構(gòu)的過程。變性核酸將失去其部分或全部的生物活性。核酸的變性并不涉及磷酸二酯
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