【正文】 甚至有時(shí)少量的雜質(zhì)也會(huì)阻礙結(jié)晶的析出 ， 因此 ， 結(jié)晶前應(yīng)盡可能地除去雜質(zhì) 。 脂溶性生物堿的提取 —— 親脂性有機(jī)溶劑提取法 1. 原理 是將中藥中的生物堿有機(jī)酸鹽轉(zhuǎn)變成水溶性較大的無(wú)機(jī)酸或小分子有機(jī)酸鹽，將其提取出來(lái)。 %～ 1%鹽酸、硫酸、醋酸和草酸等。 。不得使用加熱提取法。 ，操作簡(jiǎn)便；提取液體積大，濃縮困難，水溶性雜質(zhì)多。 脂溶性生物堿的提取 —— 酸水提取法 脂溶性生物堿的提取 —— 醇類溶劑提取法 利用游離堿及其鹽均溶于乙醇的性質(zhì)，將其提取出來(lái)。 ，亦可采用回流法。 ，但提出的親脂性雜質(zhì)較多。 游離堿大多溶于親脂性有機(jī)溶劑的性質(zhì)，故采用氯仿、 乙醚和苯等將其提取出來(lái)。 、回流法和連續(xù)回流法。 （石灰乳、稀氨水等）濕潤(rùn)藥粉，使其中生物堿鹽轉(zhuǎn)變成游離堿后，再用氯仿等提取。 ，主要提取親脂性生物堿，提出的雜質(zhì)較少。但成本高、安全性差，故只用于實(shí)驗(yàn)室。 苦參堿與氧化苦參堿的分離 麻黃堿與偽麻黃堿的分離 利用生物堿及其鹽的溶解度不同分離 利用生物堿堿性的差異分離 總堿氯仿溶液 氯仿層 氯仿層 pH 5～ 6緩沖液萃取 （強(qiáng)堿性生物堿）酸水層 pH 3～ 4緩沖液萃取 pH 1～ 2緩沖液萃取 氯仿層 （中強(qiáng)堿性生物堿）酸水層 （弱堿性生物堿）酸水層 CHCl3 Et2O 分離方法 苦參堿 + + 總堿溶于少量 CHCl3，逐滴加入至 Et2O中，過濾 氧化苦參堿 + － CHCl3 甲苯 H2O 分離方法 麻黃堿 + + 麻黃堿草酸鹽 總堿溶于甲苯，用草酸溶液萃取，濃縮萃取液，麻黃堿草酸鹽析出。 偽麻黃堿 + + 偽麻黃堿草酸鹽 + 某些生物堿特殊功能團(tuán)（羥基、內(nèi)酯鍵和內(nèi)酰胺鍵等）能發(fā)生可逆性化學(xué)反應(yīng)，導(dǎo)致 其溶解性改變，從而與其他成分分離。 （常用）常用氧化鋁或硅膠作為吸附劑，以氯仿、苯等為底劑的溶劑系統(tǒng)作為洗脫 劑，其中加少量堿性試劑，可改善分離效果。 例如三尖衫酯堿和高三尖衫酯堿的分離。（ P129） （ HPLC） 這是一種現(xiàn)代高效的分離分析方法。常用 C18反相色譜柱，流動(dòng)相以甲醇 水、 乙腈 水為底劑。 利用色譜法分離 利用生物堿的特殊官能團(tuán)分離 H O－ Ar≡N O－ Ar≡N OH （苛性堿） H＋ （氯化銨） 酚鹽（溶于水） （溶于氯仿等）酚性堿 o oN oC O O O HN H2C O O（溶于氯仿等） （溶于水） OH / Δ H+ （四）生物堿的檢識(shí) 理化檢識(shí) 物理檢識(shí)主要根據(jù)生物堿的形態(tài)顏色嗅味等。 化學(xué)檢識(shí)主要利用有關(guān)的沉淀反應(yīng)和顯色反應(yīng)。 色譜檢識(shí) 比較樣品與對(duì)照品 Rf值（ TLC PC）或 tR（ HPLC GC）是否一致，從而作出判斷。 （一）硅膠（氧化鋁）吸附薄層色譜＊ 硅膠 TLC最好在堿性條件下進(jìn)行，可在展開劑中加入少量堿性試劑如二乙胺、氨水等，或制備堿性薄層板。 展開劑多以氯仿等親脂性有機(jī)溶劑為主，再根據(jù)色譜結(jié)果調(diào)整展開劑的極性。 大多采用改良碘化鉍鉀試液噴霧顯色，呈橘紅色斑點(diǎn)。亦可直接觀察斑點(diǎn)或在紫外下觀察熒光斑點(diǎn)。 （二）紙色譜 常用正相紙上分配色譜。注意保持生物堿狀態(tài)的均一性。 ①游離堿： 常以甲酰胺為固定相，氯仿苯等為展開劑。 ②生物堿鹽： 常以水為固定相， BAW（ nBuOHHACH2O）溶劑系統(tǒng) 為展開劑。 顯色方法與薄層色譜基本相同，但不宜使用含硫酸的顯色劑。 （三）高效液相色譜法 分辨率高，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 任務(wù)一 麻黃中生物堿類成分的提取分離技術(shù) 學(xué)習(xí)目標(biāo) 一 二 三 麻黃中生物堿的提取分離技術(shù) 必備知識(shí) 五 四 六 相關(guān)知識(shí)鏈接及拓展 課堂互動(dòng) 目標(biāo)測(cè)試 一 學(xué)習(xí)目標(biāo) 2 掌握 麻黃中生物堿類化合物 的提取、分離及鑒定技術(shù)。 熟悉 麻黃中生物堿類化合物 的結(jié)構(gòu)及性質(zhì)。 了解 麻黃中生物堿類化合物 的存在及生物活性。 知識(shí)要求 3 能力要求 1 掌握麻黃中生物堿類化學(xué)成分的提取分離原理及操作技術(shù)。 熟練進(jìn)行 麻黃中生物堿類化合物的提取、分離及鑒定操作。 學(xué)會(huì) 麻黃中生物堿類化合物 的色譜鑒定技術(shù) 。 學(xué)習(xí)目的 麻黃（ herba ephedrae）為麻黃科草麻黃 (Ephedra sinica Stapf.)、中麻黃 (Ephedra intermedia Schrenk et .)或木賊麻黃 (Ephedra equisetina Bge.)的干燥草質(zhì)莖。具有發(fā)汗解表、宣肺平喘、利水消腫的作用。麻黃中含有多種生物堿 ,因產(chǎn)地和品種的不同有一定的差異 ,一般以麻黃堿和偽麻黃堿為主 ,此外還含少量甲基麻黃堿、甲基偽麻黃堿和去甲基麻黃堿、去甲基偽麻黃堿。 二 麻黃中生物堿類化學(xué)成分的提取分離技術(shù) 麻 黃 草 段加 8 倍 量 水 ， 浸 煮 2 至 3 次浸 煮 液N a O H 堿 化 調(diào) P H 1 0 1 2甲 苯 萃 取有 機(jī) 溶 劑 層 堿 水 層 2 % 草 酸 溶 液 調(diào) P H 6 . 5 7 萃 取草 酸 溶 液減 壓 濃 縮 ,冷 卻 后 過 濾結(jié) 晶 母 液加 8 倍 量 水 煮 沸 加 飽 和 C a C l2濾 液( 草 酸 鈣 )加 H C l調(diào) P H 6 . 5 7濃 縮 ， 過 濾母 液（ 甲 基 麻 黃 堿 鹽 酸 鹽 ）加 飽 和 C a C l2溶 液 ,靜 置 ， 過 濾結(jié) 晶( 鹽 酸 偽 麻 黃 堿 )甲 苯 溶 液( 循 環(huán) 使 用 )( 草 酸 麻 黃 堿 )加 飽 和 N a2S 溶 液 調(diào) P H 7 7 . 5靜 置 ， 過 濾沉 淀粗 結(jié) 晶加 水 溶 解 ， H C l調(diào) P H 5 . 5 6 . 0活 性 炭 脫 色 , 重 結(jié) 晶鹽 酸 麻 黃 堿麻黃堿與偽麻黃堿提取分離工藝流程 麻 黃 草 段加 8 倍 量 水 ， 浸 煮 2 至 3 次浸 煮 液N a O H 堿 化 調(diào) P H 1 0 1 2甲 苯 萃 取有 機(jī) 溶 劑 層 堿 水 層 2 % 草 酸 溶 液 調(diào) P H 6 . 5 7 萃 取草 酸 溶 液減 壓 濃 縮 ,冷 卻 后 過 濾結(jié) 晶 母 液加 8 倍 量 水 煮 沸 加 飽 和 C a C l2濾 液( 草 酸 鈣 ) 加 H C l調(diào) P H 6 . 5 7濃 縮 ， 過 濾母 液（ 甲 基 麻 黃 堿 鹽 酸 鹽 ）加 飽 和 C a C l2溶 液 ,靜 置 ， 過 濾結(jié) 晶( 鹽 酸 偽 麻 黃 堿 )甲 苯 溶 液( 循 環(huán) 使 用 )( 草 酸 麻 黃 堿 )加 飽 和 N a2S 溶 液 調(diào) P H 7 7 . 5靜 置 ， 過 濾沉 淀粗 結(jié) 晶加 水 溶 解 ， H C l調(diào) P H 5 . 5 6 . 0活 性 炭 脫 色 , 重 結(jié) 晶鹽 酸 麻 黃 堿（二） 麻黃生物堿的性質(zhì) （一）麻黃中主要有效成分及結(jié)構(gòu) 三 必備知識(shí) （一）麻黃中主要有效成分及結(jié)構(gòu) 麻黃中含有多種生物堿，以麻黃堿和偽麻黃堿為主，其次是甲基麻黃堿和去甲基麻黃堿。它們的結(jié)構(gòu)如下： CH OCHC H 3HN H C H 3 H OC CHC H 3HN H C H 3l 麻 黃 堿 ( 1 R ， 2 S ) d 偽 麻 黃 堿 ( 1 S ， 2 S )1 21 2 CH OCHC H 3HN ( C H 3 ) 2l 去 甲 麻 黃 堿 ( 1 R ， 2 S )1 2CH OCHC H 3HN H 21 2l 甲 基 麻 黃 堿 ( 1 R ， 2 S ) （二）麻黃生物堿的理化性質(zhì) 麻黃堿和偽麻黃堿的分子量較小，為無(wú)色結(jié)晶，游離麻黃堿含水物熔點(diǎn)為 40℃ 。兩者都具有揮發(fā)性。 麻黃堿和偽麻黃堿為仲胺生物堿，且氮原子在側(cè)鏈上，堿性較強(qiáng)，而且偽麻黃堿的堿性（ ）稍強(qiáng)于麻黃堿（ ）。 由于麻黃堿和偽麻黃堿的分子較小，且屬芳烴仲胺生物堿，其溶解性與一般生物堿不完全相同。游離的麻黃生物堿可溶于水，而偽麻黃堿由于形成較穩(wěn)定的分子內(nèi)氫鍵，所以在水中的溶解度比麻黃堿小。麻黃堿和偽麻黃堿也能溶解于氯仿、乙醚、苯及醇類溶劑中。麻黃堿草酸鹽比偽麻黃堿草酸鹽在水中溶解度小。 四 知識(shí)鏈接與拓展 溶劑提取法 基本原理 操作形式 影響因素 浸漬法 煎煮法 滲漉法 回流法 連續(xù)回流法 般來(lái)說 ， 天然藥物化學(xué)成分在常溫下多半是固體物質(zhì) ， 常具有結(jié)晶的通性 ， 因此 ， 可根據(jù)溶解度得不同 ， 用結(jié)晶法來(lái)達(dá)到分離 、 純化 、 精制的目的 。 結(jié)晶法是實(shí)驗(yàn)室常用的成分純化方法 。 但并不能利用結(jié)晶法直接進(jìn)行提取液的分離和純化 ， 因?yàn)檫^多的雜質(zhì)會(huì)干擾結(jié)晶的形成 ， 甚至有時(shí)少量的雜質(zhì)也會(huì)阻礙結(jié)晶的析出 ， 因此 ， 結(jié)晶前應(yīng)盡可能地除去雜質(zhì) 。 基本原理 根據(jù)中藥化學(xué)成分與溶劑間“極性相似相溶”的原理，依據(jù)各類成分溶解度的差異，選擇對(duì)所提成分溶解度大、對(duì)雜質(zhì)溶解度小的溶劑，依據(jù)“濃度差”原理，將所提成分從藥材中溶解出來(lái)的方法。 影響因素 溶劑、方法、粉碎度、溫度、時(shí)間等 1 藥材粉碎度：藥粉越細(xì)、表面積越大，提取效率越高。但太細(xì)，藥粉對(duì)成分 的吸附也越強(qiáng)。因此水提取宜用粗粉；用有機(jī)溶劑可細(xì)些 ,以 20目為好。 2 提取溫度：一般熱提效率高，但要考慮有些成分溫度高易破壞，應(yīng)選擇適宜 溫度。 3 提取時(shí)間：一般提取時(shí)間長(zhǎng)提出量大。但被提成分在細(xì)胞內(nèi)外溶解一旦平衡， 時(shí)間長(zhǎng)即無(wú)意義。一般熱水提以 1/2hr為宜，乙醇提 1hr為宜。 4 提取溶劑的選擇 : 遵循 “ 相似者相溶 ” 規(guī)律，選擇對(duì)有效成分溶解度大，對(duì)無(wú) 效成分溶解度小的溶劑做為提取溶劑 。溶劑沸點(diǎn)要適中、低毒安全、環(huán)保。 5 提取方法的選擇 :見后面 操作形式 方 法 常用溶劑 優(yōu) 點(diǎn) 缺 點(diǎn) 浸漬法 水和醇 室溫提取不易破壞成分，設(shè)備簡(jiǎn)單，適合提取含淀粉或黏液質(zhì)多的藥材。可配合 超聲波 處理提高提取效率。 時(shí)間長(zhǎng)次多，提取效率低。提取液易發(fā)霉 滲漉法 水和醇 室溫提取不易破壞成分，設(shè)備簡(jiǎn)單，保持較 高濃度差 提取效率高。 溶劑用量較多 煎煮法 水 設(shè)備簡(jiǎn)單，提取較全面 加熱提取易破壞成分，揮發(fā)性成分易損失，不適合提取含淀粉或黏液質(zhì)多的藥材 回流法 有機(jī)溶劑 加熱提取效率較高 易破壞熱敏性成分，操作較繁 連續(xù)回流法 有機(jī)溶劑 保持較 高濃度差 提取效率高，操作 簡(jiǎn)便 ，溶劑 用量少 提取液受熱時(shí)間長(zhǎng)，成分易破壞 水蒸氣蒸餾法 基本原理 適用范圍 裝置示意圖 是將水蒸氣通入含有揮發(fā)性