微生物的生長和純培養(yǎng)-文庫吧
2024-12-30 00:10 本頁面
【正文】 硝化纖維素薄膜、醋酸纖維薄膜）過濾，菌體被阻留在濾膜上，取下濾膜進(jìn)行培養(yǎng)，然后計算菌落數(shù)，可求出樣品中所含菌數(shù)。 涂片染色法 應(yīng)用：可同時計數(shù)不同微生物的菌數(shù)，適 于土壤、牛奶中細(xì)菌計數(shù)。 方法：用鏡臺測微尺計算出視野面積；取 1cm2面積上，計數(shù)后代入公式： 每 ml原菌液含菌數(shù) = 視野中平均菌數(shù) 涂布面積 /視野面積 100 稀釋倍數(shù) 二、間接測定法 測定細(xì)胞的組分含量進(jìn)行估算 （ 1）測定 DNA的含量 （ 2）測定蛋白質(zhì)的含量 （ 3）測定 ATP的含量 從培養(yǎng)基中的某營養(yǎng)物的消耗來估算 從菌體代謝產(chǎn)物來估算 從發(fā)酵液的黏度來估算 從發(fā)酵的放熱量估算 從發(fā)酵液的酸堿度來估算 測含氮量 蛋白質(zhì)是細(xì)胞的主要物質(zhì)，含量穩(wěn)定，而氮是蛋白質(zhì)的主要成分，通過測含氮量就可推知微生物的濃度。 一般細(xì)菌含氮量為干重的 %，酵母菌為%，霉菌為 %，根據(jù)一定體積培養(yǎng)液中的含氮量再乘以 ，就可測得粗蛋白的含量。 含碳、磷、 DNA、 RNA、 耗氧量、消耗底物量、產(chǎn)二氧化碳、產(chǎn)酸、產(chǎn)熱、粘度等，都可用于生長量的測定。 第二節(jié) 微生物的生長規(guī)律 由于微生物細(xì)胞極其微小，研究其個體生長存在著技術(shù)上的困難。 同步生長的概念：一個細(xì)胞群體中各個細(xì)胞都在同一時間進(jìn)行分裂的狀態(tài)，稱為同步生長，進(jìn)行同步分裂的細(xì)胞稱為同步細(xì)胞。 同步細(xì)胞群體在任何一時刻都處在細(xì)胞周期的同一相，彼此間形態(tài)、生化特征都很一致，因而是細(xì)胞學(xué)、生理學(xué)和生物化學(xué)等研究的良好材料。 化學(xué)誘導(dǎo)物理誘導(dǎo)誘導(dǎo)法過濾法區(qū)帶密度梯度離心法膜洗脫法篩選法同步培養(yǎng)法 獲得同步生長的方法主要有兩類： 環(huán)境條件誘導(dǎo)法：變換溫度、光線、培養(yǎng)基等。造成與正常細(xì)胞周期不同的周期變化。 選擇法：選擇性過濾、梯度離心。物理方法，隨機(jī)選擇，不影響細(xì)胞代謝。 一、單細(xì)胞微生物的群體生長曲線 單細(xì)胞微生物主要包括細(xì)菌和酵母菌，其群體生長是以群體中細(xì)胞數(shù)量的增加來表示的， 由一個細(xì)胞分裂成為兩個細(xì)胞的時間間隔稱為世代，一個世代所需的時間就是代時，代時也就是群體細(xì)胞數(shù)目擴(kuò)大一倍所需 時間，有時也稱為倍增時間。單位時間內(nèi)繁殖的代數(shù)成為生長速率。 圖中表示的是一個細(xì)胞經(jīng)過若干代分裂后的情況。從圖可見，每經(jīng)過一個代時，細(xì)胞數(shù)目就增加一倍，呈指數(shù)增加，因而被稱為指數(shù)生長，這就是單細(xì)胞群體生長的特征。 以細(xì)菌為例介紹單細(xì)胞微生物群體生長規(guī)律，其結(jié)論也基本適用于酵母菌。 生長曲線代表了細(xì)菌在新的環(huán)境中從開始生長、分裂直至死亡的整個動態(tài)變化過程。 每種細(xì)菌都有各自的典型生長曲線，但它們的生長過程卻有著共同的規(guī)律性。一般可以將生長曲線劃分為四個時期。 生長曲線： 把少量的細(xì)菌接種到合適的液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)，定時取樣測定單位體積的細(xì)胞數(shù)，并繪制所得的曲線：以細(xì)菌細(xì)胞數(shù)目的對數(shù)作縱坐標(biāo)，以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，得出細(xì)菌在生長過程中的曲線圖。根據(jù)生長曲線的變化規(guī)律，可分為延遲期、對數(shù)生長期、穩(wěn)定期、衰亡期四個階段。 微生物的生長規(guī)律 延滯期 對數(shù)生長期 穩(wěn)定期 衰亡期 單細(xì)胞微生物的典型生長曲線 細(xì) 胞 數(shù)目的對數(shù) 微生物的生長曲線 生長曲線的制作 ：接種 適溫培養(yǎng) 定時取樣測定生長量將少量單細(xì)胞的純培養(yǎng)，接種到一恒定容積的新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜條件下培養(yǎng)，每隔一定時間取樣，測菌細(xì)胞數(shù)目。以培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌增長數(shù)目的對數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制所得的曲線。 延遲期 是微生物細(xì)胞進(jìn)入新環(huán)境的適應(yīng)時期，也是細(xì)胞調(diào)整其大分子和小分子物質(zhì)的組成（包括酶和細(xì)胞結(jié)構(gòu)成分）又稱為調(diào)整期。 微生物延遲期的長短以細(xì)菌、酵母較短，霉菌次之，放線菌最長。 其它名稱：停滯期、調(diào)整期、適應(yīng)期。 現(xiàn)象：活菌數(shù)沒增加，曲線平行于橫軸。 特點(diǎn)：生長速率常數(shù) = 0；細(xì)胞形態(tài)變大或增長；細(xì)胞內(nèi) RNA特別是 rRNA含量增高，原生質(zhì)嗜堿性增強(qiáng)；合成代謝活躍（核糖體、酶類、ATP合成加快），易產(chǎn)生誘導(dǎo)酶；對外界不良條件敏感，（如氯化鈉濃度、溫度、抗生素、化學(xué)藥物、輻射等） 原因：適應(yīng)新的環(huán)境條件，合成新的酶，積累必要的中間產(chǎn)物。 影響延滯期長短的因素 菌種 ：繁殖速度較快的菌種的延遲期一般較短。 接種物菌齡 ：用對數(shù)生長期的菌種接種時，其延遲期較短，甚至檢查不到延遲期。 接種量：一般來說，接種量增大可縮短甚至消除延遲期（發(fā)酵工業(yè)上一般采用 1/10的接種量）。 培養(yǎng)基成分：在營養(yǎng)成分豐富的天然培養(yǎng)基上生長的延滯期比在合成培養(yǎng)基上生長時短；接種后培養(yǎng)基成分有較大變化時，會使延滯期加長，所以發(fā)酵工業(yè)上盡量使發(fā)酵培養(yǎng)基的成分與種子培養(yǎng)基接近。 對實踐的指導(dǎo)意義： 在發(fā)酵工業(yè)上需設(shè)法盡量縮短延遲期； 采取的縮短 延遲期 的措施有： ①增加接種量； （群體優(yōu)勢 適應(yīng)性增強(qiáng)） ②采用對數(shù)生長期的健壯菌種； ③調(diào)整
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