【正文】 、原生質(zhì)體誘導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)例子 ? 蛋白酶產(chǎn)生菌種之間的原生質(zhì)體融合共分為 7步： A、使用的親本菌株 B、菌株標(biāo)記的獲得 C、原生質(zhì)體的制備 D、細(xì)胞的再生 E、原生質(zhì)的融合 F、融合子的繼代培養(yǎng)、檢驗(yàn)和生產(chǎn)性能 A、使用的親本菌株 ? 二親本為： （ 1）枯草桿菌 （ 2）地衣芽孢桿菌 ? 二者都是野生型，對(duì)利福平和鏈霉素敏感。 B、菌株標(biāo)記的獲得 ? 采用紫外線(xiàn)進(jìn)行誘變， ? 篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株、和抗藥性菌株， ? 經(jīng)過(guò)十代以上傳代，形成穩(wěn)定的突變菌株。 C、原生質(zhì)體的制備 ? 二親本接種入完全培養(yǎng)基， 37℃ 搖瓶培養(yǎng) 20小時(shí) ↓ 離心收集菌體，懸浮于 0。 55mol的 NaCl溶液中 ↓ 經(jīng) 4000r/min離心 15分鐘，洗滌 23次，離心，棄去上清液 ↓ 菌體細(xì)胞懸浮于 SMM緩沖液中 ↓ 加入采用 SMM液配制的溶菌酶 1000單位 /ml，置恒溫水浴溶解細(xì)胞壁， 定時(shí)取樣鏡檢，并用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 ↓ 待原生質(zhì)球形成之后，以 40006000r/min離心 2次，每次 15分鐘， 洗滌 23次、離心 ↓ 放于無(wú)菌蒸餾水中，使原生質(zhì)體膨脹 ↓ 適當(dāng)稀釋?zhuān)坎加谕耆囵B(yǎng)基上 ↓ 32℃ 下、培養(yǎng) 20小時(shí) ↓ 得原生質(zhì)體 D、細(xì)胞的再生 ? 取原生質(zhì)體，放入 NaCl溶液之中 ↓ 適當(dāng)稀釋?zhuān)坎加谕耆囵B(yǎng)基上 ↓ 32℃ 下、培養(yǎng) 24小時(shí) ↓ 得原生質(zhì)體再生的細(xì)胞 E、原生質(zhì)的融合 ? 取等量的二親本原生質(zhì)體、加入 SMM溶液混勻 ↓ 經(jīng) 4000r/min離心 25分鐘，棄上清液 ↓ 加入由 SMM配制的、含 30%的、分子量為 6000的 PEG24ml 在 40℃ 下攪勻、保溫 23分鐘。 ↓ 加入 310倍量的 SMM緩沖液 ↓ 取適量（ ）涂布到含有二種抗生素的高滲完全培養(yǎng)基上， 鏈霉素含量為 2022單位 /ml， 利福平含量為 10單位 /ml， ↓ 32℃ 下、培養(yǎng) 2036小時(shí) ↓ 得初步的原生質(zhì)體融合子 F、融合子的繼代培養(yǎng)和檢驗(yàn)和生產(chǎn)性能 ? 將 初步的原生質(zhì)體融合子在含有鏈霉素 +利福平的平板培養(yǎng)基上連續(xù)傳代，可以檢測(cè)出穩(wěn)定的原生質(zhì)體融合子。 ? 融合菌株的生產(chǎn)性能比親株高出 30%。 第二節(jié) 藥用酶的生產(chǎn) 一、激肽釋放酶 二、雙鏈酶 三、超氧化物歧化酶 四、鏈激酶 五、鏈道酶 六、彈性酶 七、胰酶 八、含糖蛋白酶 九、糜胰蛋白酶 十、淀粉酶 十一、菠蘿蛋白酶 十二、 β 半乳糖苷酶 十三、天門(mén)冬酰胺酶 十四、尿激酶 一、激肽釋放酶 藥理功能 具有擴(kuò)張血管的功能，并能提高血管通透性，起到改善血液循環(huán)的作用。 臨床應(yīng)用 治療動(dòng)脈硬化、血管炎、四肢皮膚潰瘍。 生產(chǎn)方法 （ 1）提取法生產(chǎn) 以豬的頷下腺為原料進(jìn)行提取。 （ 2）提取法生產(chǎn) 以豬的胰臟為原料進(jìn)行提取。 二、雙鏈酶 藥理作用 內(nèi)含二種酶，二者合用可清除炎癥物、膿塊、瘀血，促進(jìn)外傷傷愈合。 （ 1）為鏈激酶（ SK）、又稱(chēng)為溶栓酶。能溶解血栓和滲出物的纖維部分。 （ 2）為鏈道酶（ SD）、又稱(chēng)為脫氧核糖核酸酶。能夠液化死細(xì)胞 臨床應(yīng)用 治療血腫、膿腫、骨髓炎、創(chuàng)傷性感染、潰瘍。 生產(chǎn)方法 細(xì)菌發(fā)酵法生產(chǎn)。 三、超氧化物歧化酶 藥理作用 能專(zhuān)一性地清除人體內(nèi)的超氧陰離子自由基。 臨床應(yīng)用 治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，自身免疫疾病、心肌缺血、抗衰老、斷肢再植、整形美容。 生產(chǎn)方法 （ 1）提取法 從新鮮豬血中提取 （ 2）提取法 從玉米中提取 鏈激酶和鏈道酶 四：鏈激酶 鏈激酶（ SK）稱(chēng)為溶栓酶。能溶解血栓和滲出物的纖維部分。 生產(chǎn)方法 由 β 溶血性鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn) 五：鏈道酶 鏈道酶（ SD）又稱(chēng)為脫氧核糖核酸酶。能夠液化死細(xì)胞。 發(fā)酵法生產(chǎn) 由 β 溶血性鏈球菌發(fā)酵生產(chǎn)。 六、彈性酶 藥理作用 能夠水解彈性蛋白、血纖維蛋白、血紅蛋白。 臨床應(yīng)用 用于治療高血脂、慢性支氣管炎、動(dòng)脈硬化、高血壓、脂肪肝。 生產(chǎn)方法 提取法生產(chǎn) 以豬的胰臟為原料進(jìn)行提取。 七、胰酶 藥理作用 其成份為胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶。能夠消化淀粉、蛋白質(zhì)、脂肪。 臨床應(yīng)用 助消化，增加食欲。 生產(chǎn)方法 提取法生產(chǎn) 以豬的胰臟為原料進(jìn)行提取。 八、含糖蛋白酶 藥理作用 是一種蛋白質(zhì)消化酶 臨床應(yīng)用 助消化，增加食欲 生產(chǎn)方法 提取法生產(chǎn) 以豬的胰臟為原料進(jìn)行提取。 九、糜胰蛋白酶 藥理作用 是一種蛋白質(zhì)消化酶 臨床應(yīng)用 助消化，增加食欲 生產(chǎn)方法 提取法生產(chǎn) 以牛羊的腸粘膜為原料進(jìn)行提取。 十、淀粉酶 藥理作用 是一種消化酶 臨床應(yīng)用 助消化，增加食欲 生產(chǎn)方法 發(fā)酵法生產(chǎn) 以黃曲霉發(fā)酵生產(chǎn)。 十一、菠蘿蛋白酶 藥理作用 具有消炎、抗水腫的作用。 臨床應(yīng)用 治療炎癥、水腫、血腫、支氣管炎、肺之、乳腺炎、靜脈炎。 生產(chǎn)方法 提取法生產(chǎn) 以菠蘿的皮為原料進(jìn)行提取。 十二、 β 半乳糖苷酶 1：藥理作用 消化酶，能夠消化乳糖 2：臨床應(yīng)用 適用于嬰兒乳糖消化不良。 3：生產(chǎn)方法 發(fā)酵法生產(chǎn) 以毛霉（米曲酶）發(fā)酵生產(chǎn)。 十三、天門(mén)冬酰胺酶 （一）藥理作用和臨床應(yīng)用 藥理作用 對(duì)腫瘤細(xì)胞具有抑制作用。 臨床應(yīng)用 抗腫瘤制劑 （二）生產(chǎn)方法 （二）生產(chǎn)方法 ? 發(fā)酵法生產(chǎn) 以大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)。 大腸桿菌種子級(jí)菌種 ↓ 加入玉米漿，發(fā)酵罐、 37℃ 下培養(yǎng) 7小時(shí) ↓ 取發(fā)酵液，加入丙酮后壓濾 ↓ 濾餅風(fēng)干，得干菌體 ↓ 加入硼酸緩沖液， PH= 37℃ 下提取 ↓ 得提取液，加醋酸調(diào)節(jié) PH=4。 3， ↓ 得沉淀物，即為干粗酶 ↓ 加入甘氨酸， 60℃ 熱處理 30分鐘 ↓ 得酶溶液，加入聚乙二醇，在不同的 PH值下進(jìn)行精制 ↓ 得無(wú)熱源酶液 ↓ 凍干、無(wú)菌分裝 ↓ 得天門(mén)冬酰胺酶凍干制劑 十四、尿激酶 藥理作用 是一種蛋白質(zhì)水解酶，具有溶血作用和降血壓作用 臨床應(yīng)用 抗血栓 生產(chǎn)方法 提取法生產(chǎn) 以男性新鮮尿液為原料進(jìn)行提取。 第三節(jié) 固定化酶工程 一、酶和細(xì)胞的固定化 二、固定化酶的制備技術(shù) 三、固定化細(xì)胞的制備技術(shù) 四、固定化生物反應(yīng)器 一、酶和細(xì)胞的固定化 （一）固定化酶的定義 （二）固定化生物催化劑的特點(diǎn) （三）酶固定化的方法分類(lèi) （四）細(xì)胞固定化的方法分類(lèi) （五）固定化技術(shù)所用載體 （一）固定化酶的定義 ? 固定化酶是指限制或者固定于特定空間位置的酶，具體來(lái)說(shuō)，就是指經(jīng)過(guò)物理、化學(xué)方法處理，使酶變成不易隨水流失的固定化催化劑。 ? 制備固定化酶的過(guò)程稱(chēng)為酶的固定化。 ? 酶可以采用經(jīng)過(guò)分離后高純度的提純酶、也可以是菌體細(xì)胞碎片上的酶系，甚至可以是死細(xì)胞上的酶。 （二）固定化生物催化劑的特點(diǎn) （ 1）固定化酶屬于修飾酶，這種酶可以通過(guò)化學(xué)、生物、分子工程手段加以改良。 （ 2）固定化酶的穩(wěn)定性很高，可以多次連續(xù)使用。 （ 3）反應(yīng)以后，產(chǎn)物中不含酶，易于純化。 （ 4）反應(yīng)條件