《核酸與核苷類藥物》ppt課件-文庫吧
2024-12-21 12:06 本頁面
【正文】 積水 ， 攪拌均勻 ， 傾入反應(yīng)鍋內(nèi) ， 緩慢攪拌 ， 升溫至 100℃ ，保溫 15分鐘 ， 迅速冷卻至 20～ 25℃ ， 離心除去魚精蛋白等沉淀物 ， 獲得 35L含熱變性 DNA的溶液 ， 經(jīng)精確測(cè)定 DNA含量后直接可用于 酶法降解 生產(chǎn)脫氧核苷酸 。 如要制成固體狀 DNA， 在熱變性 DNA溶液中逐漸加入等體積 95％ 乙醇 ， 離心可獲得纖維狀DNA， 沉淀用乙醇 、 丙酮洗滌 ， 減壓低溫干燥得 DNA粗品 ， 產(chǎn)品含熱變性 DNA50％ ～ 60％ 。 工業(yè)用 DNA的提取 [提取 ] [熱變性 ] [沉淀 ]乙醇 魚精 提取液 纖維狀 DNA 水、 100℃ 冷卻、離心 70%80% （無生物活性） 15min 干燥 粗品 DNA（熱變性后無活性） ? 具有生物活性 DNA的制備 動(dòng)物內(nèi)臟 （ 肝 、 脾 、 胸腺 ） 加 4倍重量生理鹽水 經(jīng) 組織搗碎機(jī) 搗碎 1分鐘 ， 勻漿于 2500r／ pm離心 30分鐘 ， 沉淀用同樣體積的生理鹽水洗滌 3次 ， 每次洗后離心 ， 將沉淀懸浮于 20倍重量的冷生理鹽水中 ， 再搗碎 3分鐘 ， 加入 2倍量 5％ 的 （ 用 45%乙醇作溶劑 ） 十二烷基磺酸鈉 ， 并攪拌 2～ 3小時(shí) ， 在 0℃ 2500r／pm離心 ， 在上層液中加入等體積的 冷 95％ 乙醇 ， 離心即可得到纖維狀 DNA， 再用冷乙醇和丙酮洗滌 ， 減壓低溫干燥得粗品 DNA。粗品 DNA溶于適量蒸餾水 ， 加入 5％ 十二烷基磺酸鈉 達(dá) 1／ 10體積 ， 攪拌 1小時(shí) ， 經(jīng) 5000r／ pm離心 1小時(shí) ， 清液中 加入 NaCl達(dá)1mol／ L， 再緩慢加入 冷 95%乙醇 ， DNA析出 ， 經(jīng)乙醇 、 丙酮洗滌 ， 真空干燥得具有生物活性的 DNA（ 活性 DNA制備需在 0～ 3℃操作 ） 。 ? 生物活性 DNA的制備 [提取 ] [洗滌 3次 ] 5%SDS 動(dòng)物內(nèi)臟 沉淀 沉淀 上層液 （肝、脾） 生理鹽水 生理鹽水 [再搗碎 ] 離心、 30min [沉淀 ] [洗滌、干燥 ] [提取 ] 纖維狀 DNA 粗品 DNA 上清液 95%乙醇 冷乙醇、丙酮 水、 5%SDS 離心 [沉淀 ] [洗滌、干燥 ] DNA沉淀 活性 DNA NaCL、 95%乙醇 乙醇、丙酮 三 、 用酶解法 、 發(fā)酵法和半合成法制備核苷酸 酶解法及堿水解法制備核苷酸 ? 酶解法制備脫氧核苷酸 桔青霉 產(chǎn)生 5`磷酸二脂酶 紅酵母 產(chǎn)生 3`磷酸二脂酶 ? 酶解法制備戊糖核苷酸 我國從 60年代開始使用 核酸酶 P1降解核糖核酸生產(chǎn)單核苷酸 ， 日本年產(chǎn) 呈味核苷酸 （ 肌苷酸和鳥苷酸 ）3000噸 ， 其中 60%是使用酶解法生產(chǎn)的 。 酶解法生產(chǎn) 5‘— 單核苷酸工藝流程 ?雙酶法生產(chǎn)肌苷酸和鳥苷酸 （ I＋ G） 呈味核苷酸 的主要品種是 肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉 ，商品名簡(jiǎn)稱為 （ I＋ G） ， 用 核酸酶 Pl降解 RNA可獲得GMP和 AMP， 其中 AMP經(jīng) 脫氨 生成 IMP。 雙酶法生產(chǎn) （ I十 G） 工藝 。 ?菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸 磷酸二酯酶 在合適的條件下降解細(xì)胞內(nèi)的 RNA可產(chǎn)生 5′ 核苷酸 。 在國內(nèi)用谷氨酸產(chǎn)生菌體自溶法生產(chǎn) 5‘核苷酸 。 （ 1） 菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸工藝流程： ? 堿水解法生產(chǎn) 2＇ ， 3＇ 混合核苷酸 RNA結(jié)構(gòu)中的磷酸二酯鍵對(duì)于堿性條件不穩(wěn)定 ， 很容易生成 2′ ， 3 ＇ 環(huán)狀磷酸酯 ， 此環(huán)狀磷酸酯對(duì)堿更不穩(wěn)定 ，很易加水分解生成 2＇ ， 3＇ 混合核苷酸 。 取 RNA配成 3％ ～%的水
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