《酶與細(xì)胞的固定化》ppt課件-文庫吧
2024-12-20 15:43 本頁面
【正文】 含羥基的載體可用三氯三嗪等多鹵代物進(jìn)行活化，形成含有鹵素基團(tuán)的活化載體。 ? 硅烷化法 常用的載體：多孔玻璃，多孔陶瓷。 多孔玻璃特點(diǎn)：①機(jī)械強(qiáng)度好，表面積大。②耐有機(jī)溶劑和微生物破壞。載體可以再生，壽命長(zhǎng)等。 ? 溴化氰法 本方法主要用溴化氰（ CNBr） 活化多糖類物質(zhì)。如纖維素、葡聚糖、瓊脂糖等，其中以瓊脂糖為載體的占多數(shù)（大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)）。用溴化氰法活化瓊脂糖制備得到的固定化酶目前使用很廣，特別用作親和層析，有著良好的性能。 2）交聯(lián)法 借助雙功能試劑使酶分子之間發(fā)生交聯(lián)作用，制成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的固定化酶的方法稱為交聯(lián)法。也可用于含酶菌體或菌體碎片的固定化。常見的功能團(tuán)： N末端氨基、 Lys氨基、 Tyr酚基、 Cys巰基、 His咪唑基等。常用試劑：戊二醛、異氰酸酯、 N， N’乙烯馬來亞胺、雙重氮聯(lián)苯胺等。應(yīng)用最廣泛的是戊二醛，它兩個(gè)醛基都可以與酶或蛋白質(zhì)的游離氨基形成席夫堿 (shiff)。 交聯(lián)法有 2種形式即酶直接交聯(lián)法和酶輔助蛋白交聯(lián)法。 酶直接交聯(lián)法 ：在酶液中加入適量多功能試劑，使其形成不溶性衍生物。固定化依賴酶與試劑的濃度、溶液 pH和離子強(qiáng)度、溫度和反應(yīng)時(shí)間之間的平衡。 酶輔助蛋白交聯(lián)法 ：為避免分子內(nèi)交聯(lián)和在交聯(lián)過程中因化學(xué)修飾而引起酶失活，可使用第二個(gè) 載體 蛋白質(zhì)（即輔助蛋白質(zhì)，如白蛋白、明膠、血紅蛋白等）來增加蛋白質(zhì)濃度，使酶與惰性蛋白質(zhì)共交聯(lián)。 分子內(nèi)交聯(lián)：多數(shù)發(fā)生于低的酶濃度，交聯(lián)后酶通常仍保持溶解狀態(tài)。 分子間交聯(lián)：發(fā)生于較高酶濃度下，交聯(lián)后酶通常保持不溶解狀態(tài)。 3）包埋法 將聚合物的單體和酶溶液混合后，借助聚合促進(jìn)劑（如交聯(lián)劑）的作用使單體進(jìn)行聚合，從而將酶包埋于聚合物中的固定化方法。 網(wǎng)格型包埋法 ： 將酶或含酶菌體包埋在凝膠細(xì)微網(wǎng)格中，制成一定形狀的固定化酶，稱為網(wǎng)格型包埋法。也稱為凝膠包埋法。 聚丙烯酰胺凝膠（ PAM）、 聚乙烯醇（ PVA） 以及天然高分子化合物等。 微囊型包埋法 ： 是將酶包埋在各種高分子聚合物制成的小球內(nèi)，制成固定化酶。由于固定化形成的酶小球直徑一般只有幾微米至幾百微米，所以也稱為微囊化法。 網(wǎng)格型包埋法 微囊型包埋法 固定化方法 載體結(jié)合法 交聯(lián)法 包埋法 物理吸附法 離子結(jié)合法 共價(jià)結(jié)合法 制備難易 易 易 難 結(jié)合程度 弱 中等 強(qiáng) 酶活回收率 高 ， 但酶易流失 高 低 對(duì)底物專一性 不變 不變 可變 再 生 可能 可能 不可能 固定化費(fèi)用 低 低 高 較難 較難 強(qiáng) 強(qiáng) 中等 高 可變 不變 不可能 不可能
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