[其它模板]20xx34定稿選修3-12基因工程的基本操作程序-文庫吧
2024-12-19 23:26 本頁面
【正文】 群（ cDNA文庫） 分離 目的基因 cDNA合成過程 第一步：反轉(zhuǎn)錄酶以 RNA為模板合成一條與 RNA互補(bǔ)的 DNA單鏈，形成 RNADNA雜交分子。 第二步：核酸酶 H使 RNADNA雜交分子中的 RNA鏈降 解，使之變成單鏈的 DNA。 第三步：以單鏈 DNA為模板，在 DNA聚合酶的作用下合 成另一條互補(bǔ)的 DNA鏈，形成雙鏈 DNA分子。 2022/1/3 13 ② 基因組文庫和 cDNA文庫的主要區(qū)別 文庫類型 cDNA文庫 基因組文庫 文庫大小 基因中啟動子（具有啟動作用的 DNA片段） 基因中內(nèi)含子 (位于編碼蛋白質(zhì)序列的非編碼 DNA片段） 基因多少 物種間的基因交流 小 大 無 有 無 有 某種生物的部分基因 某種生物的全部基因 可以 部分基因可以 ③ 怎樣從基因文庫中找到我們所需要的目的基因 根據(jù)目的基因的有關(guān)信息，例如，根據(jù)基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色體上的位置、基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物 mRNA，以及基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)等特性來獲取目的基因。 （ 2）應(yīng)用 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因 ① 定義： ② 原理： DNA復(fù)制 PCR是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定 DNA片段的核酸合成技術(shù)，在短時間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因 DNA分子熱變性（在 90～ 95 OC時，解 旋，雙鏈分開溫度降低又結(jié)合成雙鏈）因此，在PCR技術(shù)中不需要解旋酶（與復(fù)制不同之在處 ) ③ 儀器： PCR擴(kuò)增儀（自動調(diào)控溫度的儀器） ④ 條件： 有一段已知的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物，脫氧核苷酸，酶等。 ④ 過程： （ 90～ 95 OC)： （ 55～ 60 OC)： （ 70～ 75 OC)： ： 雙鏈 DNA模板在熱的作用下，氫鍵斷裂形成單鍵 DNA 系統(tǒng)溫度降低，引物結(jié)合到互補(bǔ) DNA鏈上，形成局部的雙鏈 DNA 在 Taq酶作用下，合成與模板互補(bǔ)的 DNA子鏈，形成雙鏈 DNA 每重復(fù)一次，目的基因增加一倍 PCR擴(kuò)增為指數(shù)形式擴(kuò)增 2n(n為擴(kuò)增循環(huán)的次數(shù)），在短時間內(nèi)擴(kuò)增大量目的基因。 (3)用化學(xué)方法直接 人工合成目的基因 蛋白質(zhì)氨基酸序列 → mRNA的核苷酸 序列 → 目 的基因序列 → 目的基因 針對：基因比較小，核苷酸序列又已知 推測 化學(xué)合成 思考： 不具有，缺少非編碼區(qū) (啟動子、終止子）和非編碼序列（如內(nèi)含子），要人工構(gòu)建。 人工合成的目的基因是否具有完整基因結(jié)構(gòu)的基因？ 推測 ： 二 . 基因表達(dá)載體的構(gòu)建 —— 核心 IMN ： ① 使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并遺傳給子代 。 ② 同時使目的基因能表達(dá)和發(fā)揮作用。 (3)終止子：是使轉(zhuǎn)錄在需要的地方停止 (4)標(biāo)記基因：是鑒別受體細(xì)胞中是否含有目的基因從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來 (2)啟動子：是 RNA聚合酶識別和結(jié)合部位 (1)目的基因 不同受體細(xì)胞，目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法不同，基因表達(dá)載體的構(gòu)建有所差異。 質(zhì)粒 DNA分子 限制酶處理 一個切口 兩個黏性末端
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