【正文】 劑配成同樣濃度的溶液 ， 在同一薄層板上點(diǎn)樣 、 展開 、 顯色 ， 供試品所顯主斑點(diǎn)的顏色 、 位置應(yīng)與對(duì)照品的主斑點(diǎn)相同 。 高效液相色譜法 （ HPLC） 是近年來(lái)藥物分析領(lǐng)域中應(yīng)用最廣泛的分離分析技術(shù) ， 廣泛用于藥品的含量測(cè)定和真?zhèn)舞b別 。 《 中國(guó)藥典 》 （ 2021年版 ） 一部采用 HPLC鑒別的有 484種 。 4．高效液相色譜法 高效液相色譜法系采用 高壓輸液泵將規(guī)定的流動(dòng)相泵入裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法 ，用其進(jìn)行藥品鑒別時(shí)，一般規(guī)定按供試品含量測(cè)定項(xiàng)下的高效液相色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，根據(jù) 供試品和對(duì)照品色譜主峰保留時(shí)間（ tR）的一致性進(jìn)行判斷 。（圖4圖 44）。 m i n0 1 2 3 4 5 6 7 8 9m A U 2101234 V W D 1 A , W a v e le n g t h = 3 2 7 n m ( L U Y U S Y \ S T U 2 7 0 0 1 . D ) Ar ea: 40. 9257 6.061圖 43 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖 m in0 1 2 3 4 5 6 7 8 9m A U 2101234 V W D 1 A , W a v e l e n g t h = 3 2 7 n m ( L U Y U S Y \ H 0 0 0 0 0 0 8 . D ) Ar ea: 57.9009 6.035 luyunsun 圖 44 樣品色譜圖 （ 1） 概述 熔點(diǎn)系指一種物質(zhì)按規(guī)定方法測(cè)定，由固體熔化成液體的溫度，或融熔同時(shí)分解的溫度，或在熔化時(shí)初熔至全熔經(jīng)歷的溫度范圍。 熔點(diǎn)是藥品的重要物理常數(shù)，常用于藥物鑒別 。如：巴比妥類、生物堿類的一些藥物在 《 中國(guó)藥典 》 （ 2021年版）中已經(jīng)規(guī)定用熔點(diǎn)測(cè)定法鑒別。 5．熔點(diǎn)測(cè)定法 （ 2）測(cè)定方法 ① 測(cè)定易粉碎的固體藥品方法； ② 測(cè)定不易粉碎的固體藥品 (如脂肪、脂肪酸、石蠟、羊毛脂等 )方法； ③ 測(cè)定凡士林或其他類似物質(zhì)方法。 各品種項(xiàng)下未注明時(shí)，均系指第一法。 （ 3）測(cè)定裝置 熔點(diǎn)測(cè)定采用 內(nèi)熱式熔點(diǎn)測(cè)定裝置 (圖 45)，該裝置將電熱絲直接浸入傳溫液體內(nèi)，利用調(diào)壓變壓器控制電熱絲的電壓，以間接控制傳溫液的溫度和升溫速率，并用磁力攪拌器進(jìn)行攪拌。另外，該裝置簡(jiǎn)單，使用方便，重現(xiàn)性好，而且能準(zhǔn)確控制升溫速率。 圖 45 內(nèi)熱式熔點(diǎn)測(cè)定裝置 瓷板或玻環(huán) 可調(diào)壓的變壓器 ? 含有不對(duì)稱碳原子有機(jī)藥物（如維生素 C、葡萄糖、地高辛等）的液體或溶液，能引起旋光現(xiàn)象。 ? 平面偏振光通過(guò)這類液體或溶液，偏振光的平面向左或向右旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)的度數(shù)，稱為旋光度。 ? 偏振光透過(guò)長(zhǎng) 1dm并每 1ml中含有旋光性物質(zhì) 1g的溶液，在一定波長(zhǎng)與溫度下測(cè)得的旋光度稱為 比旋度 。 6．旋光度測(cè)定法 ?比旋度的計(jì)算公式為 ： ? ?lc ???? tλ 式中， 為比旋度； c為每 100ml溶液中含有被測(cè)物質(zhì)的質(zhì) 量 ,g/100ml； 為測(cè)定管長(zhǎng)度， dm； α 為實(shí)驗(yàn)測(cè)得的旋光度； t 為測(cè)定時(shí)的溫度 , 規(guī)定測(cè)定溫度為 20℃ 。 ? ?tλ?l?比旋度為旋光性物質(zhì)的物理常數(shù)，故 測(cè)定有旋光性藥物的旋光度可以作為藥物鑒別的依據(jù)。 ?測(cè)定比旋度應(yīng)在 （溫度、濃度、溶劑、波長(zhǎng)等）下測(cè)定，然后用測(cè)定結(jié)果與。 ?當(dāng)測(cè)定波長(zhǎng)為 ，即使用 黃色鈉光 , 測(cè)定溫度為 20℃ 時(shí) ，比旋度 又可用 來(lái)表示。 ? ?tλ? ? ?20D?例 :精密稱取經(jīng)干燥得本品 ,置 100 ml的容量瓶中，加無(wú)水乙醇使溶解并稀釋至刻度。用 2dm測(cè)定管，測(cè)定波長(zhǎng)為 ，在 20℃ 時(shí)測(cè)得旋光度為 +176。 ，問(wèn)該氯霉素的比旋度是否符合規(guī)定？ ? ? lc ?? ?? 20D? ?2100D???? ? ?20D?= +176。 規(guī)定氯霉素?zé)o水乙醇溶液比旋度為 +～ +176。 該氯霉素的比旋度 為 +176。 ，符合藥典規(guī)定。 ? ?20D?解： ?測(cè)定注意事項(xiàng) 比旋度的測(cè)定可用 自動(dòng)旋光儀和目視旋光儀 ，目前國(guó)內(nèi)常采用的自動(dòng)旋光儀為 WZZ1S型。 操作時(shí)注意： ① 每次測(cè)定前應(yīng)以溶劑作 空白校正， 測(cè)定后，再校正 1次 ,以確定在測(cè)定時(shí)零點(diǎn)有無(wú)變動(dòng)；如第 2次校正時(shí)發(fā)現(xiàn)零點(diǎn)有變動(dòng)，則應(yīng)重新測(cè)定旋光度。 ② 配制溶液及測(cè)定時(shí)，均應(yīng) 調(diào)節(jié)溫度 至 20177。 ℃ (或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溫度 )。 ③ 供試的液體或固體物質(zhì)的溶液應(yīng) 不顯渾濁或含 有混懸的小粒。 如有上述情形時(shí) ,應(yīng)預(yù)先濾過(guò)，并棄去初濾液。 第二節(jié) 一般鑒別試驗(yàn) ? 一般鑒別試驗(yàn)是 根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及其物理化學(xué)性質(zhì)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)來(lái)鑒別其真?zhèn)蔚姆椒ā? ? 只能證實(shí)是 某一類藥物，而不能證實(shí)是哪一種藥物。 例如，經(jīng)一般鑒別反應(yīng)的鈉鹽試驗(yàn)，證實(shí)某一藥物為鈉鹽，但不能辨認(rèn)是氯化鈉、苯甲酸鈉或者是其他某一種鈉鹽藥物 。 《 中國(guó)藥典 》 （ 2021年版）以及 《 中國(guó)獸藥典 》 （ 2021年版）附錄項(xiàng)下的一般鑒別試驗(yàn)所包括的項(xiàng)目基本相同，主要有： 丙二酰脲類、托烷生物堿類、芳香第一胺類、有機(jī)氟化物類、無(wú)機(jī)金屬鹽類、有機(jī)酸鹽、無(wú)機(jī)酸鹽等。 （一）與三氯化鐵的反應(yīng) 1．原理 水楊酸鹽在中性或弱酸性條件下，和三氯化鐵試液生成 配位化合物， 在 中性時(shí)呈紅色，弱酸性時(shí)呈紫色 ；若在強(qiáng)酸性中，配位化合物分解生成 游離水楊酸 。 一、水楊酸鹽的鑒別 目前反應(yīng)機(jī)制尚未確定，一般多以下式表示： 本反應(yīng)極為靈敏，只需取稀溶液進(jìn)行試驗(yàn)，如取用量大，顏色很深時(shí)，可加水稀釋后觀察。 COOOH6COO+4 FeCl 3 OFe2Fe +312HCl2．鑒別方法 取供試品的稀溶液，加三氯化鐵試液1滴，即 顯紫色 。 （ 二 ） 其他鑒別反應(yīng) 1． 原理 水楊酸 不溶于水 （ 0℃ 時(shí)溶解度為1g/1500L） ， 故供試液加酸即析出游離水楊酸 。 由于 水楊酸的酸性大于醋酸 ， 故能與醋酸銨作用釋出醋酸 ， 而本身形成銨鹽溶解 。 反應(yīng)式為： 析出的水楊酸亦可經(jīng)冷水洗滌、干燥后測(cè)定熔點(diǎn) （ 158～ 161℃ ）。 +4NHCOO OHCOOHOH+ +CH COO NH3 4 + CH COO H32．鑒別方法 取供試品溶液，加稀鹽酸，即析出白色水楊酸沉淀； 分離，沉淀在乙酸銨試液中溶解。 二、丙二酰脲類的鑒別 （一）與銀鹽的反應(yīng) 1．原理 丙二酰脲類在碳酸鈉試液中形成 鈉鹽 而溶解，再與硝酸銀試液起作用，先生成 可溶性的一銀鹽 ，繼而產(chǎn)生不溶性的 二銀鹽沉淀 。 反應(yīng)式為： CC O N HNa2CO3 AgNO 3CONRRCOH CONaRRCONC O N HCCC O N HCONRRCOAgAgNO3COAgRRCONCC NOAg一銀鹽 二銀鹽白2．鑒別方法 取供試品約 ，加碳酸鈉試液 1ml與水 10 ml ，振搖 2min，濾過(guò)，濾液中逐滴加入硝酸銀試液即發(fā)生 白色沉淀 ，振搖沉淀溶解；繼續(xù)滴加過(guò)量的硝酸銀試液， 沉淀不再溶解。 1．原理 丙二酰脲分子中具有 － CONHCONHCO－ (酰脲 )的結(jié)構(gòu)，與銅鹽作用，能產(chǎn)生 類似雙縮脲的顯色反應(yīng)， 與吡啶和硫酸銅作用，顯紫色。 （二）與銅鹽的反應(yīng) NNCu2+SO42COHRRCONCONHC +CCONHCONRRCCONH