沉淀反應(yīng)與凝集反應(yīng)-文庫(kù)吧
2025-04-20 20:20 本頁(yè)面
【正文】 乏分辨力。方法難以推廣。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 三、免疫濁度試驗(yàn) 經(jīng)典的免疫沉淀試驗(yàn)是抗原和相應(yīng)抗體在反應(yīng)終點(diǎn)時(shí)判定結(jié)果 ， 方法有耗時(shí) 、 敏感度低 (10~100mg/L)和不能自動(dòng)化等缺點(diǎn) 。 70年代以來(lái) ， 根據(jù)抗原和抗體所在液相內(nèi)快速結(jié)合并產(chǎn)生濁度的原理 ， 建立了免疫比濁法 。 臨床常用 3種微量免疫技術(shù) ， 即透射比濁法(transmission turbidimetry) 、 散射比濁法(nephelometry)和免疫膠乳比濁法 (immunolatex turbidimetry)， 借助多種自動(dòng)化分析儀器來(lái)完成 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (一 ) 透射比濁法 1. 原理 抗原抗體在一定緩沖液中形成免疫復(fù)合物 (IC)， 當(dāng)光線透過反應(yīng)溶液時(shí) ， 由于溶液內(nèi)復(fù)合物粒子對(duì)光線的反射和吸收 ， 引起透射光減少 ， 免疫復(fù)合物量越多 ， 透射光越少 ，即光線吸收越多 ， 可用吸光度表示 。 吸光度和復(fù)合物的量成正比 ， 當(dāng)抗體量固定時(shí) ， 與待檢抗原量成正比 。 用抗原標(biāo)準(zhǔn)品建立標(biāo)準(zhǔn)曲線 ， 可測(cè)出待檢抗原含量 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 2. 操作步驟 (1) 用稀釋緩沖液將待檢樣品和標(biāo)準(zhǔn)品按規(guī)定稀釋 ， 取一定量加至測(cè)定管中 。 (2) 加最適工作濃度 (用方陣法預(yù)先滴定 )的抗體 ，孵育一定時(shí)間 ， 測(cè)定吸光度 (A)值 。 (3) 以不同濃度抗原含量為橫軸 ， 吸光度為縱軸 ，繪標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 從標(biāo)準(zhǔn)曲線可得待檢抗原量 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 3. 方法評(píng)價(jià) 敏感度高于單相瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 5~10倍，批內(nèi)、批間重復(fù)性較好，變異系數(shù)10%，操作簡(jiǎn)便快速， 1h可報(bào)告結(jié)果。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (二 ) 散射比濁法 散射光系指一定波長(zhǎng)的光沿水平軸照射 ， 碰到小顆粒的免疫復(fù)合物 ， 光線被折射 ， 發(fā)生偏轉(zhuǎn) ， 這種偏轉(zhuǎn)的角度可因光線波長(zhǎng)和顆粒大小不同而有所區(qū)別 。 散射濁度法是在入射光的一定角度檢測(cè)粒子發(fā)出的散射光 ， 散射光的強(qiáng)度與復(fù)合物的含量呈正比 ， 即待測(cè)抗原越多 ， 形成復(fù)合物越多 ， 散射光強(qiáng)度越強(qiáng) 。 又可分為速率散射比濁法 (rate nephelometry)和終點(diǎn)散射比濁法 (endpoint nephelometry)。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 1. 速率散射比濁法 (1) 原理：是一種抗原抗體結(jié)合動(dòng)態(tài)測(cè)定法 。 所謂速率是抗原抗體結(jié)合反應(yīng)過程中 ， 在單位時(shí)間內(nèi)兩者結(jié)合的速度 。 速率法是測(cè)定最大反應(yīng)速率 ， 即在抗原抗體反應(yīng)達(dá)最高峰時(shí) ，通常為數(shù)十秒鐘 ， 測(cè)定其復(fù)合物形成的量 。峰值的高低在抗體過量情況下與抗原的量成正比 。 峰值出現(xiàn)的時(shí)間與抗體的濃度及其親和力直接相關(guān) 。 不同抗原含量其速率峰值不同 ， 通過微電腦處理 ， 求出抗原含量 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (2) 操作步驟： 1) 用稀釋液將待檢抗原稀釋成一定濃度 。 2) 將稀釋待檢抗原和不同濃度抗原標(biāo)準(zhǔn)品加至試管內(nèi) ， 再加入一定量抗體 ， 立即比濁 ， 記錄速率單位 (RU)。 3) 以抗原標(biāo)準(zhǔn)品含量為橫坐標(biāo) ， RU值為縱坐標(biāo) ， 于普通坐標(biāo)紙上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 根據(jù)待測(cè)抗原 RU值 ， 查出相應(yīng)抗原含量 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (3) 方法評(píng)價(jià)： 檢測(cè)不必等到抗原抗體反應(yīng)達(dá)到平衡，大大節(jié)約反應(yīng)時(shí)間，每小時(shí)可檢測(cè)數(shù)十份標(biāo)本；敏感度高，最小檢出量達(dá)μg/L水平。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) 2. 終點(diǎn)散射比濁法 (1) 原理： 讓抗原抗體作用一定時(shí)間 ， 使其反應(yīng)達(dá)到平衡后 ， 測(cè)定其復(fù)合物的量 。 復(fù)合物的濁度不再受時(shí)間的影響 ， 但反應(yīng)復(fù)合物聚合產(chǎn)生絮狀沉淀之前 (大約反應(yīng)數(shù)十分鐘 )進(jìn)行濁度測(cè)定 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (2) 操作步驟 1) 用稀釋液稀釋待檢抗原和抗原標(biāo)準(zhǔn)品 。 2) 取一定量稀釋待檢抗原液和不同濃度抗原標(biāo)準(zhǔn)品溶液加至試管中 ， 加抗體充分混勻 ， 孵育一定時(shí)間 ， 比濁 。 3) 以抗原標(biāo)準(zhǔn)品量為橫坐標(biāo) ， 濁度值為縱坐標(biāo) ，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 。 根據(jù)待檢抗原的濁度值 ， 查出抗原含量 。 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (3) 方法評(píng)價(jià)： 敏感度達(dá) mg/L水平，可自動(dòng)化，但反應(yīng)時(shí)間較長(zhǎng) 免疫學(xué)及免疫學(xué)檢驗(yàn) (三 ) 免疫膠乳比濁法 1. 原理 選擇一種大小適中 ， 均
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