312基因工程的基本操作程序(麗)(已改無(wú)錯(cuò)字)
2023-02-03 00:55:01 本頁(yè)面
【正文】 DNADNA分子雜交 DNARNA分子雜交 抗原 抗體雜交 小結(jié) PCR技術(shù) — 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ? 原理： PCR擴(kuò)增儀 DNA雙鏈復(fù)制的基本原理 ? 定義： PCR是一項(xiàng)在生物體外復(fù)制特定DNA片段的核酸合成技術(shù) ? 條件： 模板、引物、 4種脫氧核苷酸、 熱穩(wěn)定 DNA聚合酶（ Taq酶） 5/ 3/ G— G T— C 5/ 3/ 引物 Ⅱ G— G 變性 （ 9095℃ ） 復(fù)性 （ 5560℃ ） 延伸 （ 7075℃ ） DNA受熱變性，解鏈； ； DNA聚合酶作用下進(jìn)行延伸。 5/ 3/ A— G 引物 Ⅰ 3/ 5/ A— G C— C 3/ 5/ A— G C— C 5/ 3/ G— G T— C PCR技術(shù)擴(kuò)增過(guò)程 a、 DNA變性（ 90℃ 95℃ ） ：雙鏈 DNA模板 在熱作用下， 斷裂，形成 _______ b、 復(fù)性（ 55℃ 60℃ ） ：系統(tǒng)溫度降低，引物 與 DNA模板結(jié)合，形成局部 ________。 c、 延伸（ 70℃ 75℃ ） ：在 Taq酶的作用下，從 引物的 5′ 端 → 3′ 端延伸，合成與模板互補(bǔ) 的 ________。 氫鍵 單鏈 DNA DNA鏈 隨堂闖關(guān)隨堂闖關(guān)雙鏈 目的基因的 mRNA 單鏈 DNA (cDNA） 雙鏈 DNA (即目的基因 ) 反轉(zhuǎn)錄 合成 1）反轉(zhuǎn)錄法： 以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使 RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈 DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈 DNA，從而獲得所需的基因。 2）根據(jù)已知的核苷酸序列合成 DNA法 ： DNA合成儀 ： 將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞 ： 大腸桿菌 繁殖快、多為單細(xì)胞、遺傳物質(zhì)相對(duì)少 處理細(xì)胞 → 細(xì)胞→ 表達(dá)載體與感受態(tài)細(xì)胞混合 → _________細(xì)胞吸收 DNA分子。 Ca2+ 感受態(tài) 感受態(tài) ： 目的基因插入 Ti質(zhì)粒的 TDNA上 農(nóng)桿菌 導(dǎo)入植物細(xì)胞 整合到受體細(xì)胞的染色
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