【正文】 。 實驗器材的分類消毒：將使用后的銳器方入防刺破、防滲漏的密閉專用銳器處置盒內(nèi)，121℃高壓消毒 30 分鐘。其他器材方入有效氯為 2020mg/L的含氯消毒液內(nèi)浸泡 1 小時以上。處理時應(yīng)避免皮膚損傷。 13 工作臺等物體表面消毒：工作完畢，用含有效氯 2020mg/L 的消毒液或 75％乙醇溶液擦拭消毒，作用 20 分鐘以上。 個人防護用品消毒：實驗結(jié)束，將隔離衣、口罩、帽子、手套、鞋套等 121℃高壓消毒30 分鐘。防護鏡浸泡在 75％乙醇或有效氯為 1000mg/L 的含氯消毒劑中，作用 3060 分鐘。 手的消毒：用典伏或 75％的乙醇擦拭，作用 13 分鐘。 空氣消毒：每次實驗 前后用紫外燈照射消毒，每次不少于 1 小時，每立方米空間安裝紫外燈瓦數(shù)≥ ，距紫外燈 1 米處照射強度≥ 70W/㎡。 這張消毒：應(yīng)用 80ml/m3 福爾馬林，密閉熏蒸消毒 6 小時后方可帶出。 地面消毒：工作結(jié)束，應(yīng)用含有有效 2020mg/L 的消毒液噴灑拖地。 廢棄物的處理：實驗的廢棄物應(yīng)放入適當(dāng)?shù)娜萜鲀?nèi)，就地 121℃高壓消毒 30 分鐘，消毒后的廢棄物集中收集、焚燒處理。 使用前應(yīng)了解并掌握高壓鍋的原理及操作規(guī)則，以及不正確使用而導(dǎo)致的災(zāi)難性后果。 按照操作規(guī)程使用高壓鍋 接通電源，合上高壓滅菌器左側(cè)總電源開關(guān)。 注入加熱用水，注水至加熱器罩的水位水準(zhǔn)器配件尖端浸入水中為止。 設(shè)定滅菌溫度，先按“編集”鍵，然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需溫度，然后按“實行”鍵，把所設(shè)溫度存進程序。 設(shè)定滅菌時間，先按“編集”鍵，然后按上下鍵調(diào)節(jié)到滅菌所需時間，然后按“實行”鍵，把所設(shè)時間存進程序。 按“實行”鍵執(zhí)行滅菌程序，此時“滅菌”燈閃爍。 當(dāng)滅菌程序執(zhí)行完成，滅菌程序自動停止運行。 在確認(rèn)壓力表的 顯示壓力降到 0 刻度時，打開高壓滅菌器頂蓋，取出滅菌樣品。 高壓鍋操作人員在使用高壓鍋時不得離開崗位；在日常使用過程中，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程執(zhí)行，并按照規(guī)定進行設(shè)備的維護。每 1 年保養(yǎng)一次，每月檢測一次消毒效果。 高壓鍋的物品不得放的過滿，否則影響滅菌效果。放好被消毒滅菌的物品后，高壓鍋的蓋子或門必須擰緊。 定期檢查高壓鍋，以確保其正常工作，防止意外事故發(fā)生，保證消毒滅局效果。 高壓滅菌安全操作步驟 在滅菌前將雙層的高壓滅菌帶包好，廢物在滅菌袋中的體積不能超過袋子體積的 3/4，滅菌袋用橡皮帶捆好，但不能扎得太死，否則蒸汽不能進入所料袋內(nèi)影響滅菌效果。 實驗產(chǎn)生的所有廢物應(yīng)該及時就地滅菌處理。如果滅菌器正在使用或優(yōu)于其它原因不能馬上使用，則廢物必須放在滅菌袋內(nèi)捆好并放在實驗室內(nèi)，在存放期間確保袋子無損壞。 當(dāng)高壓鍋消毒滅菌盜時間后，取出物品放在廢物收集處。 當(dāng)開始滅菌時必須確信滅菌國內(nèi)水量合適，高壓溫度和時間設(shè)置正確。滅菌應(yīng)保持在121℃ 30 分鐘，時間和溫度不得超過設(shè)定值，否則滅菌袋會融化，清理困難。 十二、 實驗室應(yīng)急處置預(yù)案 1．目的 規(guī)范緊急情況的 處理工作。 2．適用范圍 微生物實驗室和微生物安全二級實驗室。 3．職責(zé) 遇有緊急情況所有工作人員嚴(yán)格按此規(guī)程處理。 4．具體要求： 14 造成或可能造成實驗室污染，但未造成人身傷害的實驗室事故，由實驗室負責(zé)人處理。例如實驗過程中，由于標(biāo)本、試劑溢出濺落造成操作臺或地面的污染等，應(yīng)立即噴灑消毒液并覆蓋浸透消毒液的紙巾，等消毒液徹底浸泡 30 分鐘后，對污染的物品進行處理。清理后的物品高壓滅菌。并填寫生物安全二級實驗室意外情況登記與處理記錄表，實驗室負責(zé)人應(yīng)指導(dǎo)這些處理行動，并檢查處理效果。 在沒有強毒微生 物時，再實驗室內(nèi)受到意外傷害，例如割傷、燒傷、燙傷等，由實驗室負責(zé)人處理。令受到傷害的人員立即停止工作，用消毒液清洗未破損的皮膚表面，傷口以碘伏消毒，眼睛用洗眼器反復(fù)沖洗。有在同一實驗室內(nèi)工作人員或派人迅速著裝進入實驗室，清除造成傷害的原因，清理實驗材料，幫助受傷人員緊急處理并撤離實驗室。受到傷害的人員應(yīng)立即就醫(yī)，并將受傷原因及接觸微生物的情況通報負責(zé)人。對其進行恰當(dāng)而完整的病史記錄。在其身體狀況未恢復(fù)之前，不得重新進入實驗室工作。實驗室在經(jīng)過整理，消除了造成傷害的故障之后，方可重新使用。 傷害事故可 能導(dǎo)致被強毒微生物感染，例如針頭刺破、銳器割傷、粘膜暴露等途徑接觸到感染性液體，首先進行局部處理，用肥皂和水清洗污染的皮膚，擠壓傷口盡可能擠出損傷處的血液，用肥皂或清水沖洗，用消毒液浸泡或涂抹消毒，并包扎傷口。在操作過程中發(fā)生培養(yǎng)物、污染材料濺落身體表面等情況，首先使用噴淋裝置，盡快將污染物沖洗掉，然后再進行局部處理。暴露的粘膜應(yīng)盡快用生理鹽水或清水沖洗干凈。實驗室負責(zé)人應(yīng)向上級部門報告，對受傷害者進行隔離觀察，同時根據(jù)情況預(yù)防性用藥，并寫出職業(yè)暴露后預(yù)防感染的評價和處理方案。 實驗室事故可能造成氣溶 膠污染，如壓力容器或管道破裂等，立即關(guān)閉實驗室，疏散現(xiàn)場的所有人員，對所有暴露人員提出相應(yīng)的醫(yī)學(xué)建議。立即通知實驗室負責(zé)人及生物安全員。至少在 1小時內(nèi)，任何人員不得進入現(xiàn)場，以便氣溶膠的消散記空氣中較重微粒的沉降。張貼禁止入內(nèi)的警示標(biāo)志。在生物安全員的監(jiān)督下進行消毒、凈化處理；執(zhí)行這項工作時應(yīng)當(dāng)穿戴合適的防護服及呼吸防護用具。實驗室負責(zé)人員除立即采取對應(yīng)措施外，應(yīng)向上級部門報告，填寫意外情況登記與處理記錄表。 培養(yǎng)物等傳染性物質(zhì)的破碎 被傳染性物質(zhì)物質(zhì)污染的小玻璃瓶及其他容器破碎時，用布或紙巾覆蓋，爾 后將消毒劑傾倒其上，放置 30 分鐘。其后即可清除掉，玻璃碎片應(yīng)當(dāng)用鑷子清理。污染區(qū)域應(yīng)當(dāng)用消毒劑清洗。破碎物品清理時如果使用了簸箕，應(yīng)將其進行高壓滅菌或用有效的消毒劑浸泡 24 小時。清理使用過的布、紙巾、抹布及拖把，放入污染廢棄物容器中。上述步驟均應(yīng)佩戴手套。 如果實驗室的紀(jì)錄表格、其他印刷品或書面材料遭到污染，在妥善轉(zhuǎn)抄后或烤后，應(yīng)當(dāng)將其棄入污染廢棄物容器。 試管破碎于密閉式安全離心杯中 所有密閉式安全離心杯在生物安全過程中裝載和卸載。如果懷疑發(fā)生了破損，應(yīng)當(dāng)將其蓋子擰松；爾后，將整個離心杯高壓滅 菌。 蓄意破壞 堅固、厚重的門、牢靠的鎖具以及限制出入，都是合適的防范措施。發(fā)現(xiàn)蓄意破壞情況后報告實驗室負責(zé)人及生物安全員，視破壞種類按照上述方法進行處理，并詳細填寫意外情況登記與處理記錄表。 十三、 實驗活動生物安全標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程 （一） 艾滋病初篩檢測實驗操作規(guī)程 保證艾滋病病毒抗體 ELISA實驗的準(zhǔn)確性。 15 艾滋病病毒抗體 ELISA實驗。 樣品采集 樣品采集安試劑盒要求采集。采血時注意安全，用一次性注射器謹(jǐn)慎操作，防止發(fā)生刺傷和造成外界污染。血樣如即時用可存于 普通冰箱，如要長期保存，分離血清置于 20℃ 及以下。同時做好記錄。 樣品運送 樣品轉(zhuǎn)送，除特殊需要外，必須是血清或血漿，置于帶有蓋帽的試管內(nèi)，或?qū)⑺芰显嚬苡镁凭珶舴馑?，防止樣品流出。試管上?biāo)明姓名、時間、編號，將試管放入專門帶蓋的容器內(nèi)，容器的材料要易于消毒處理，在所放試管周圍上下墊有軟性物質(zhì)，以免碰碎，容器外標(biāo)有HIV檢測專用字樣和生物危害標(biāo)志。路途較遠或氣候炎熱時，容器應(yīng)置于 4℃ 以下運送。這樣同時附送檢單。 樣品登記和處理 收到樣品后，及時填寫標(biāo)本登記記錄表，送樣人、收樣人簽字，如 已進行過初檢，登記初檢結(jié)果和實驗方法及所用試劑情況。 對從其他實驗室送來的樣品，檢查并注明送檢單與標(biāo)本記錄的符合、樣品管破損、溢漏等情況。如有溢漏應(yīng)立即將尚存的血樣移出，并對管壁和盛器消毒。檢查并記錄樣品的質(zhì)量有無嚴(yán)重溶血、細菌污染、血脂過多以及黃疸等情況。 對實驗室自采的樣品，最好將血液先放置 12 個小時，再用 3000 離心 15 分鐘，吸出上清液備用，如在幾天內(nèi)檢測可放在 28℃ 冰箱中，如要貯存，置于 20℃ 冰箱。 實驗準(zhǔn)備 將試劑從冰箱中取出，按試劑盒要求時間恢復(fù)室溫。 檢查并記錄冰箱、溫箱溫度。 按照試劑盒要求準(zhǔn)備實驗原始記錄表，標(biāo)明空白、陰性對照、陽性對照、外部質(zhì)控血清以及檢測樣本的位置：登記日期和實驗起止時間，記錄環(huán)境條件及試劑盒廠家、批號、效期：整個實驗過程中每一步操作都要在原始記錄表上詳細登記。 按照試劑盒的要求配置洗液及其他所需要的試劑。 加樣和稀釋 根據(jù)樣品數(shù)量將合適數(shù)量的酶標(biāo)板條固定在板架上，為了不損壞洗扳機，每道上的酶標(biāo)板條必須保持完整 {不足部分可用廢棄的微孔添充 }，檢查加樣器加樣刻度是否與試劑盒要求的加樣量相符，按照 原始記錄表表明的位置加入各種質(zhì)控品和檢測樣品，注意：空白只加標(biāo)本稀釋液。加樣量和稀釋度嚴(yán)格按照試劑盒說明書規(guī)定的操作，一般先加樣品稀釋液后再加入樣品。加樣要準(zhǔn)確，小心不要使吸頭碰著酶標(biāo)板空上是包被抗原。為保證加樣的準(zhǔn)確，最好使用多孔道加樣器，使用時注意防止吸頭間的交叉污染。 溫育