動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(已改無(wú)錯(cuò)字)
2023-05-17 22:27:16 本頁(yè)面
【正文】 胞懸液吸出2mL左右，加到另一個(gè)培養(yǎng)瓶中并向每個(gè)瓶中分別加3mL左右培養(yǎng)液，蓋好瓶塞，送回二氧化碳培養(yǎng)箱中，繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)。（三）組織培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)檢查營(yíng)養(yǎng)液PH值的檢查(1)新鮮的培養(yǎng)液呈橙紅色。(2)細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，代謝酸性產(chǎn)物增多，營(yíng)養(yǎng)液酸性變黃。(3)培養(yǎng)瓶若刷洗不潔，殘留堿性物質(zhì)，致營(yíng)養(yǎng)液PH增高，呈紫紅色。一般情況下，每周換液2次，每次換半量或1/3量。微生物的污染與排除（1）細(xì)菌污染對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的影響及污染物的檢測(cè)污染的細(xì)菌量比較大，增殖的細(xì)菌就可以導(dǎo)致培養(yǎng)液外觀渾濁，肉眼就可以判斷。細(xì)菌污染大多數(shù)可以改變培養(yǎng)液pH，使培養(yǎng)液變渾濁、變色。用相差顯微鏡觀察，可見滿視野都是點(diǎn)狀的細(xì)菌顆粒。原來(lái)的清晰培養(yǎng)背景變得模糊，大量的細(xì)菌甚至可以覆蓋細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞的生存構(gòu)成威脅。用青霉素、鏈霉素可以預(yù)防細(xì)菌污染有效。（2）真菌污染對(duì)細(xì)胞的影響及污染物的檢測(cè)大多呈白色或淺黃色小點(diǎn)漂浮于培養(yǎng)液表面，肉眼可見；有的散在生長(zhǎng)，鏡下可見呈絲狀、管狀、樹枝狀，縱橫交錯(cuò)穿行于細(xì)胞之間。（3）支原體污染對(duì)細(xì)胞影響及污染物的檢測(cè)支原體污染后，因?yàn)樗鼈儾粫?huì)使細(xì)胞死亡可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存，培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁，細(xì)胞無(wú)明顯變化，外觀上給人以正常感覺，實(shí)則細(xì)胞受到多方面潛在影響，如引起細(xì)胞變形，6影響DNA合成，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等。四、思考題你認(rèn)為該如何操作才能保證培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)微生物污染？你認(rèn)為組織塊培養(yǎng)成功需哪些條件？原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些區(qū)別?7實(shí)驗(yàn)五 心肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)及培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)檢查一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆招募〖?xì)胞培養(yǎng)的基本方法和操作特點(diǎn)，為傳代培養(yǎng)作好準(zhǔn)備。二、實(shí)驗(yàn)器材與用品鵪鶉的心臟 平衡鹽（BSS）液（各組自己配的）100mL細(xì)胞培養(yǎng)瓶（每人一個(gè)） 完全培養(yǎng)液 滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)/人眼科剪、鑷子、吸管等 %胰蛋白酶液 %EDTA液無(wú)菌離心管 100目銅篩三、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（一）原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟取材(1)取一只鵪鶉，斷頸處死，用75%酒精浸泡消毒。(2)（在超凈工作臺(tái)中操作）剪開胸壁，取出心臟，放入Hanks或DHanks液中。(3)用Hanks或DHanks液沖洗心臟后，剪去心房，取心室肌，然后，用Hanks或DHanks液沖洗3次。漂洗與剪切(1)將心室肌置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，剪成10塊左右的小塊，用Hanks或DHanks清洗2次，吸去多余的液體。(2)用眼科剪反復(fù)剪切成1mm3左右大小，約需20~30min。消化(1)無(wú)菌培養(yǎng)皿中的小組織塊用Hanks或DHanks液沖洗，移入離心管中（蓋好蓋子，請(qǐng)注意無(wú)菌操作），低速離心（500~800r/min
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