【正文】 為 %，其檢出率隨患者的年齡增加而增加，但與患者的性別及發(fā)病季節(jié)無相關(guān)性。臨床資料顯示：戊肝多見于中老年，有 % ALT 先恢復(fù)正常，爾后黃疸消退；甲肝以青壯年多見，有 %患者黃疸先消退，爾后谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)恢復(fù)正 常。甲肝、乙肝和丙肝患者均可重疊感染戊型肝炎病毒。各型肝炎之間無交叉免疫，當(dāng)出現(xiàn)重疊感 染時可加重病情及延長病程；乙肝與戊肝重疊感染者癥狀持續(xù)時間長、肝功能損害明顯。 （摘自：中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志 1995年第 6卷第 1期 唐正運(yùn)） ２３ H5 亞型禽流感病毒單抗 — 生物素捕獲 ELISA 的建立 姚洪濤 背景介紹 及時準(zhǔn)確的診斷和有效地實(shí)施監(jiān)測 ,是控制和撲滅禽流感 (Avian Influenza ,AI) 疫情的前提。禽流感的臨診癥狀變化很大 ,臨床診斷常難以定性 ,必須進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室病原學(xué)、血清學(xué)和分子生物學(xué)診斷。血清學(xué)診斷和監(jiān)測方法 ,包括瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)和紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn) ,在國內(nèi)普遍實(shí)行免疫接種的情況下已經(jīng)失 去作用。病原學(xué)檢測方法 — 雞胚分離病毒是檢測病禽組織中禽流感病毒 (Avian InfluenzaVirus ,AIV) 的一種經(jīng)典、準(zhǔn)確、敏感的方法 ,但耗時長 ,不利于禽流感病毒的快速診斷。近年來發(fā)展的 RTPCR 技術(shù) ,可以快速作出診斷 ,但操作繁瑣且成本較高 ,不適合對批量樣本進(jìn)行監(jiān)測。為了解決這個問題 ,國內(nèi)外利用抗 H5 亞型禽流感病毒的單克隆抗體(Monoclonal Antibody ,McAb) , 建立了免疫熒光檢測技術(shù) ,但該方法需昂貴設(shè)備 ,結(jié)果易受主觀影響 ,難以在常規(guī)工作中應(yīng)用。流感病毒捕獲 EIA 技 術(shù)在國外已有相關(guān)報道 ,用于檢測 A 型流感病毒 ,但不能直接鑒定 H5亞型禽流感病毒 ,而國內(nèi)僅有用 ELISA 檢測病毒抗體的報道。本研究在已制備的抗 H5 亞型 AIV 單克隆抗體的基礎(chǔ)上 ,建立檢測 H5 亞型禽流感病毒的單抗介導(dǎo)、生物素放大的捕獲 ELISA ,期望進(jìn)一步研制出用于禽流感臨床診斷和病原學(xué)監(jiān)測的、特異、簡便和易于推廣的免疫學(xué)技術(shù)。 目的 建立一種單克隆抗體介導(dǎo)的、經(jīng)生物素 — 親和素系統(tǒng)放大的 H5 亞型禽流感病毒捕獲ELISA檢測方法 ,為進(jìn)一步研究檢測試劑盒提供基礎(chǔ)。 方法 長臂活化生物素 (BCNHS) 標(biāo) 記抗體的制備 :用 DMSO 將 BCNHS 配成 1 mg/ml 的溶液 。 用。按 BCNHS: IgG的容積比為 1 : 混合 ,室溫攪拌條件下反應(yīng) 4 h 。裝入透析袋 ,對 PBS 透析過夜 ,加等體積甘油 ,小量分裝 , 20 ℃保存?zhèn)溆谩? 捕獲抗體的選擇 : 分別將 H5 亞型病毒高免血清 ,單抗腹水 ,純化單抗作系列稀釋 ,包被 96 孔酶標(biāo)板 。 再將 H5N1 AIV 尿囊液、 H7N2 AIV 尿囊液用 PBST 稀釋至 32 個血 凝單位 (32HA) ,同時用健康雞胚尿囊液 1∶ 5 稀釋后作為對照 ,分別加入到包被有上述抗體的板孔中 ,100μ l/孔 ,37 ℃孵育 2 h ,PBST洗板 5 次 。 每孔加入 100 μ l 1∶ 1 000稀釋的 HRP 標(biāo)記單抗 ,37 ℃孵育 90 min ,PBST洗板 5 次 ,顯色 15 min ,測定 A450值。 捕獲抗體包被濃度的選擇 : 做捕獲抗體包被濃度 ——— 被檢物濃度方陣試驗(yàn) : 純化單抗用２４ 50mmol/L pH916 的碳酸鹽緩沖液做倍比稀釋后 ,包被 96 孔酶標(biāo)板。用 SPF 雞胚尿囊液和稀釋至32HA 的 H7N2 AIV 尿囊液作對照 ,在反應(yīng)板孔中加入經(jīng)倍比稀釋的 H5N1 AIV 尿囊液 ,其余檢測步驟同上。 生物素標(biāo)記單抗工作濃度的選擇 : 用健康雞胚尿囊液和稀釋至 32HA 的 H7N2AIV 尿囊液做對照 ,在包被有純化單抗的板孔中加入經(jīng)過倍比稀釋的 H5N1 病毒 ,同上孵育洗滌之后加入經(jīng)過倍比稀釋的生物素標(biāo)記單抗 ,37 ℃孵育 2 h , PBST 洗板 5次 ,每孔加入 100μ l 1∶ 1 000 稀釋的 HRP 標(biāo)記鏈酶親和素 ,37 ℃孵育 30 min ,PBST 洗板 5 次 ,顯色反應(yīng)同上 ,測定 A450 nm 讀數(shù)。 特異 性和敏感性測定 : 選取最適宜的包被抗體及其最適包被濃度 ,采用生物素 酶標(biāo)鏈酶親 和素系統(tǒng) ,檢測 H1～ H15 亞型 AIV 標(biāo)準(zhǔn)株和 H H H9 亞型 AIV 分離株 ,測試初步建立的抗原捕獲 ELISA 反應(yīng)體系的敏感性和特異性。 結(jié)果 純化后的單抗具有良好的反應(yīng)活性 ,生物素標(biāo)記單抗工作濃度為 1∶ 5000 。ELISA 對 H5 亞型 AIV 的檢出限為 個血凝單位。該 ELISA 反應(yīng)體系能檢出 H5N3 標(biāo)準(zhǔn)株和所有 20株國內(nèi) H5 亞型 AIV 分離株 ,而與其他 14 個血凝素亞型的 AIV 標(biāo)準(zhǔn)株、 15 個 H9 亞型 AIV 分離株和 2 個 H7 亞型 AIV分離株均無交叉反應(yīng)。 結(jié)論 初步建立了檢測 H5 亞型禽流感病毒的單抗 — 生物素捕獲 ELISA 方法 ,為研制試劑盒和進(jìn)一步應(yīng)用試驗(yàn)提供了基礎(chǔ)。 （摘自《中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報》 2020 年 12 月 第 12 卷 第 4 期） ２５ AFP、 CEA 的內(nèi)部質(zhì)量控制 李靖 目的： 為了提高診斷的準(zhǔn)確性和保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，就必須加強(qiáng)室內(nèi)控制。 方法： AFP、 CEA RIA kit 按說明書操作。質(zhì)控方法采用質(zhì)控血清檢測法和標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)檢測法。質(zhì)控血清由廠家隨試劑盒提供。 結(jié) 果： 1. AFP、 CEA質(zhì)控血清的監(jiān)測監(jiān)測結(jié)果：高、中 、低值 3種質(zhì)控血清連續(xù) 12次相同條件放免測定。 AFP3種質(zhì)控血清實(shí)測值與靶值偏差（ %）為 , , 。 CEA3種質(zhì)控血清實(shí)測值與靶值偏差（ %）為 , , 。 2．腫瘤標(biāo)志物測定標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)的監(jiān)測結(jié)果：在 RIA中，常用的標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)有零標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合率 (Ｂ 0%),非特異性結(jié)合率 (ＮＳＢ %)以及（ＥＤ 80、ＥＤ 50、ＥＤ 20） 3個有效劑量值共 5個參數(shù)。質(zhì)量好的試劑盒其變異系數(shù)（ CV）應(yīng)在 10%以內(nèi)。腫瘤標(biāo)志物 20次測定標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù) 的監(jiān)測結(jié)果AFP 5個參數(shù)依次為 ， ， ， ， ； CEA 5個參數(shù)依次為 ， ， ， ， 。 討論： : 應(yīng)用質(zhì)控血清監(jiān)測法評價批內(nèi)精密度、批間重現(xiàn)性和檢測偏差是內(nèi)部質(zhì)量控制主要內(nèi)容。它既可反映試劑盒穩(wěn)定性 ,又可反映操作者的技術(shù)水平 ,還可以對每批測定結(jié)果的可信性作出判斷。 2. 對標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)的評價 在ＲＩＡ中 ,被測物的濃度是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算而求出的 ,因此 ,盡量保持這些參數(shù)的穩(wěn)定性是保證結(jié)果準(zhǔn)確可靠的重要前提。尤其是腫瘤標(biāo)志物的檢測 ,結(jié)果的準(zhǔn) 確性和可靠性除了有其重要的臨床價值外 ,還具有深刻的社會意義 ,因此對腫瘤標(biāo)志物的檢測應(yīng)格外的重視。標(biāo)準(zhǔn)曲線參數(shù)的監(jiān)測結(jié)果其變異系數(shù)基本控制在 10%以內(nèi) ,說明檢測系統(tǒng)穩(wěn)定 ,被測結(jié)果準(zhǔn)確可靠。 分析 : AFP,還包括其他產(chǎn)品 ,我們同樣要建立完善的室內(nèi)質(zhì)控品。在用這些質(zhì)控品進(jìn)行 ELISA試劑盒的產(chǎn)品調(diào)試中可以準(zhǔn)確地反映試劑水平，從而保證產(chǎn)品質(zhì)量。 2．對于 AFP定量 ELISA kit來說，被測物的濃度同樣實(shí)根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算求出的，因此要保證標(biāo)準(zhǔn)品這一參數(shù)的穩(wěn)定，用質(zhì)控品來監(jiān)測其穩(wěn)定性是切實(shí)易行并且有效的方法 。 （摘自：放射免疫學(xué)雜志， 2020（ 17）， 3， 205206） ２６ 用測定口咽液中抗體的方法檢測口蹄疫病毒感染牛 張香麗 目的： 建立一種現(xiàn)場檢測 FMDV感染的可靠方法。 方法： (1)將純化、滅活的 FMDV 146S抗原 (5ug／ ml)吸附到 ELISA板上。樣品于 4℃過夜，用結(jié)合堿性磷酸酶的免抗?？寡鍣z測抗體。 (2)用高免型特異兔抗血清將滅活的 FMDV抗原捕獲到ELISA板上。樣品于 4C過夜，用結(jié)合堿性磷酸酶的免抗牛 Ig抗血清檢測抗體。 (3)用高免型特異兔抗血清將滅活的 FMDV抗原捕獲到 ELISA板上。樣品于 4C過夜．用抗牛 IgA單克隆抗體 2H4加結(jié) 合堿性磷酸酶的山羊抗鼠 Ig抗血清檢測抗體。 結(jié)果與討論： 接苗動物的血清 1gG抗體可能推遲感染后的粘膜反應(yīng)。牛呼吸道和消化道中的分泌免疫系統(tǒng)有一種復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，在鼻和口腔分泌物中不同類型的免疫球蛋白與 18A或 IgGl反應(yīng)區(qū)結(jié)合。本試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，中和抗體和 IgA測定適于檢測在現(xiàn)地緊急接種后 FMDV感染和可能帶毒的牛，適于檢測粘膜分泌物中的微量特異性抗體．這些樣品一般具有游離細(xì)胞、蛋白酶及組織顆粒含量高的特點(diǎn)，這在 ELISA中常引起大量的背景反應(yīng)。因此， 只能檢出低滴定、低親和性的特異性抗體?，F(xiàn)地 FMD暴發(fā)后，如果粘膜抗體陽性，動物已被感染；抗體為陰性，不可能帶毒。持續(xù)存在粘膜抗體反應(yīng)超過（ 3— 4個月 ） 則表明為帶毒狀態(tài)。 （摘自： Ivonne 國外獸醫(yī)學(xué) — 畜禽傳染病 第 15卷第 4期 1995年 11月） ELISA 檢測結(jié)核 IgG 抗體對結(jié)核病的診斷價值 趙昱 一． 目的 應(yīng)用 ELISA 法檢測抗結(jié)核分支桿菌抗體，對結(jié)核病的診斷具有一定的意義。筆者在此探討了血清抗結(jié)核分支桿菌抗體對活動性結(jié)核病的診斷價值。 二． 方法 采用快速酶聯(lián)吸附法（ ELISA）檢測血清抗 PPDIgG 在各類結(jié)核病中的特異性、敏感性及２７ 與痰菌、病情的關(guān)系。 1．檢測對象 ：采用 ELISA 法對 331 例結(jié)核和非結(jié)核住院病人做了血清結(jié)核 IgG 抗體測定，將其分為兩組分別為肺結(jié)核組和肺結(jié)核組非結(jié)核病對照組。肺結(jié)核組：各類活動性結(jié)核病患者193 例；非結(jié)核病對照組： 138 例。 2．檢測試劑 ：采用四川綿陽解放軍 404 醫(yī)院科技開發(fā)公司提供的 PPDIgG 抗體快速檢測試劑盒，按說明書方法操作。 三． 結(jié)果 肺結(jié)核組：有 33 例血清抗體陰性，假陰性率 %； 非結(jié)核病對照組：有 14 例血清抗體陽性，假陽性率為 %。 血清抗 PPDIgG 診斷結(jié)核病的特異性為 %，敏感性為 %，其陽性率與痰菌關(guān)系不大，與病情變化有一定的相關(guān)性。 四． 結(jié)論 血清抗 PPDIgG 檢測是活動性結(jié)核病一項有價值的診斷方法，并可用于評價結(jié)核病治療的轉(zhuǎn)歸。 五． 討論 由于結(jié)核病診斷的臨床菌陽檢出率僅占 26%～ 40%，且培養(yǎng)時間長，因而對菌陰肺結(jié)核及肺外結(jié)核的診斷有一定的局限性。故可認(rèn)為 ELISA 檢測血清結(jié)核抗體對活動性結(jié)核病診斷具有較高的臨床價值。 由于人群中自然感染結(jié)核菌十分普遍，正常人體和非結(jié)核病人體內(nèi)也會存在著低度水平的結(jié)核抗 體，本組有 %的假陽性率。這部分個體抗體水平輕度增高，雖不能完全排除實(shí)驗(yàn)抗原所致的原因，我們認(rèn)為結(jié)核菌隱性感染所致的可能性也很大，酶聯(lián)法為隱性結(jié)核菌感染提供了新的判斷依據(jù)，文獻(xiàn)報道血清結(jié)核抗體的水平與病情相關(guān)，隨著病情的恢復(fù) ,結(jié)核抗體可以轉(zhuǎn)陰，故對于這部分個體建議定期查體，復(fù)測抗體，可能在結(jié)核病預(yù)防和早期治療方面有重要價值。隨訪97 例抗體陽性的結(jié)核病患者治療 3 月后陰轉(zhuǎn)率 %， 6 個月后陰轉(zhuǎn)率 %，可見結(jié)核抗體檢測有助于確定病灶是否有活動性，也可作為治療轉(zhuǎn)歸的動態(tài)觀察。 （摘自《安徽醫(yī)科大學(xué) 學(xué)報》 1999年 4月； 34(2)： 121122張曉微） ２８ 多元 Luminex 檢測系統(tǒng)能同時 定量 HPV6,11,16 和 18 病毒樣顆粒型特異性中和表位抗體 葉祥忠 背景： 迄今為止，已分離到 100 多種人乳頭瘤病毒，其中低危型 HPV，如 HPV 11 引發(fā)尖銳濕疣，高危型 HPV，如 HPV1 18 引發(fā)宮頸癌。宮頸癌是婦女癌癥死亡的第二大誘因，每年大約有 40 萬婦女死于宮頸癌。 HPV 特異性強(qiáng)，單一型別的疫苗保護(hù)率低，一種有效的 HPV疫苗可能需要多種不同的基因型，才能預(yù)防乳頭瘤病毒引起的多種癌癥， HPV 的 4 價疫 苗（ HPV 1 16 和 18）保護(hù)率在 80%以上。目前業(yè)已發(fā)展的多種定量分析 HPV中和抗體的方法（包括體內(nèi)中和分析、體外假中和分析、競爭放免分析和酶聯(lián)免疫分析），操作繁瑣、或靈敏度低、或檢測效率低，因而限制其在大量病人血清 HPV 的排查及在大量疫苗臨床試驗(yàn)中的應(yīng)用。 方法： Luminex 的多元分析系統(tǒng)（ LabMAP3），將重組表達(dá)的 4 種 HPVL1 顆?？乖謩e偶聯(lián)到 4 種不同熒光的 Luminex 微球上，用 PE 標(biāo)記型別特異的中和單抗，采用競爭法檢測血清的中和抗體。 HPVLuminex 競爭免疫分析通過以血清中 多克隆抗體取代 PE 標(biāo)記的中和單抗而結(jié)合到各自病毒樣顆粒的構(gòu)象性中和表位上，測定血清中和抗體滴度。同時對 HPVLuminex 競爭免疫分析結(jié)果與放射性免疫分析結(jié)果進(jìn)行比較。 結(jié)果及結(jié)論： 這種競爭 Luminex 免疫分析不僅血清用量少（ 50ul 血清就能同時定量檢測HPV 1 16 和 18 型別特異的中和抗體），而且敏感性、準(zhǔn)確性和精確性與常用的放免分析一致。 HPVLuminex 免疫分析方法是同時定量分析多種 HPV 基因型的抗體免疫反應(yīng)的十分有效工具，可用于患者病史調(diào)查研究和預(yù)防疫苗的效力檢測。 (摘自： David O, Charles E. L, Stefani A,et al.