【正文】 of determinations performed on three parallel dishes. (E) Normal HMECs were treated with 10 μM MOMIPP or an equivalent volume of DMSO (control) and examined by phasecontrast microscopy after 24 h. (F) MCF7 cells or HMECs were plated in 96well plates. After 48 h, while the cells were still subconfluent, fresh medium containing 10 μM MOMIPP or an equal volume of vehicle (DMSO) was added. MTT viability assays were performed at a 48 h end point. Values are the means (177。SD) from four separate wells.潛在的光親探針的合成及生物活性我們SAR的研究說(shuō)明，MIPP或MOMIPP〔例如，修改吡啶環(huán)〕結(jié)構(gòu)的非常微小的變化可以消除他們誘導(dǎo)methuosis的能力。幾個(gè)關(guān)于通過(guò)親電化合物進(jìn)行特定蛋白質(zhì)修改的例子已有報(bào)道〔見(jiàn)討論〕。確定藥物靶點(diǎn)的一個(gè)常用的方法是親和層析。因此，我們致力于制備用活性基團(tuán)微小改進(jìn)的具有生物活性的類似物，這可能對(duì)親光性的藥物靶標(biāo)發(fā)現(xiàn)工作有一定意義。苯甲酮是常常被納入靶目標(biāo)識(shí)別研究的活潑分子。二苯甲酮類似物〔化合物，苯甲酰MIPP30〕用兩個(gè)步驟制備，首先從2 甲基吲哚的Vilsmeier–Haack中間體〔圖3A〕?；_(kāi)始。在我們的實(shí)驗(yàn)中，2 甲基吲哚的Vilsmeier–Haack中間體經(jīng)?；螽a(chǎn)生比例分別為1:3的5 和6 苯甲?；? 甲基吲哚3 甲醛混合物〔28和29〕。該方案的第二個(gè)步驟，最后30和31兩個(gè)化合物，由4 乙酰吡啶在哌啶條件下耦合醛形成。Scheme 3. Synthesis of 5′ and 6′ Azido Derivatives of MIPPaa(A) Conditions and reagents: Compounds 28 and 29: (1) COCl2, DMF, 1,2DCE, 0 176。 (2) AlCl3, benzoyl chloride, 0 176。C, 95%. Compound 33: H2, 10% Pd/C, EtOH, RT, 97%. Compound 34: (1) NaNO2。C, 66%. Compound 35: POCl3, DMF, 0 176。C, 62%. Compound 38: H2, 10% Pd/C, EtOH, RT, 99%. Compound 39: (1) NaNO2。C, 53%. Compound 40: POCl3, DMF, 0 176。因此在MOMIPP的疊氮部位的結(jié)構(gòu)變化較苯甲酰組化合物30疊氮部位的要小前提下，我們接下來(lái)探索疊氮化合物是否可以被添加到吲哚環(huán)的5 或6位而沒(méi)有失去誘導(dǎo)methuosis活性。2 甲基吲哚在濃硫酸條件下被選擇性硝化生成產(chǎn)物32〔見(jiàn)試驗(yàn)階段驗(yàn)證regiospecificity的細(xì)節(jié)〕，然后加氫生成胺33。疊氮化物通過(guò)甲?；玫?5，35與4 乙酰吡啶的濃縮產(chǎn)生36——5疊氮MIPP。按照相同的序列完成以上所述的反響步驟就得到41——6疊氮MOMIPP。雖然比不上MOMIPP，5疊氮化合物在其生物活性方面明顯優(yōu)于6疊氮化合物。 SD), with the results expressed as percent of the mean from parallel control dishes treated with an equivalent volume of vehicle alone (DMSO).討論 methuosis是一種新發(fā)現(xiàn)的非細(xì)胞凋亡的形式，由胞吞胞吐販運(yùn)形式的改變引發(fā)，進(jìn)而導(dǎo)致大量細(xì)胞空泡化和細(xì)胞代謝的完整性破壞。在這里，我們呈現(xiàn)了旨在對(duì)被稱為MOMIPP的5 甲氧基類似物鑒定的SAR研究，這種化合物在細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)展示了更好的效能和穩(wěn)定性。在為SAR研究效勞的化合物庫(kù)形成過(guò)程中，我們進(jìn)行了各種indole3carboxaldehydes和芳香酮在哌啶催化下的ClaisenSchmidt縮合反響，從而能有效提供吲哚查耳酮。然而，當(dāng)過(guò)量使用哌啶時(shí)，我們通常觀察到更高的產(chǎn)量。我們的SAR研究在探求這一類具有誘導(dǎo)methuosis活性的化合物需要什么分子特征方面提供了一些有益的啟示。在5位，不同的修改有相反的結(jié)果。相反，用OH〔化合物21〕，P甲基芐氧基酯〔化合物26〕和P羧基芐氧基〔化合物27〕修改5位都造成活性的重大損失。關(guān)于第二個(gè)芳基查耳酮架構(gòu)系統(tǒng)，我們了解到，吡啶環(huán)的對(duì)位氮定位對(duì)活性是至關(guān)重要的。在對(duì)MOMIPP以methuosis誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的潛在機(jī)制的思考中，一種可能性是，它可以作為親電試劑〔即邁克爾受體〕。這可能會(huì)導(dǎo)致脫靶效應(yīng)，包括陽(yáng)性半抗原的形成。因此，MOMIPP不大可能通過(guò)蛋白質(zhì)的親電改造誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。這種特定蛋白質(zhì)修改的例子已有過(guò)報(bào)道，化合物在革蘭氏陽(yáng)性菌中結(jié)合到受體蛋白ERBB2，〔29〕TRPA1離子通道，核蛋白質(zhì)KSRP/FUBP2，〔31〕〔30〕和sortase酶中。被廣泛歸類為查耳酮的化合物已被證明通過(guò)多種機(jī)制表現(xiàn)出抗癌活性，包括中斷p53與MDM2蛋白或HDM2的相互作用，抑制P糖蛋白〔13，34〕，〔3537〕和中斷微管聚合。許多出版物已都出版證實(shí)查爾酮及相關(guān)分子可以作為抗有絲分裂劑，并且在認(rèn)識(shí)他們的SAR方面已取得實(shí)質(zhì)性進(jìn)展。methuosis誘導(dǎo)劑的嚴(yán)格的結(jié)構(gòu)特異性和吲哚和吡啶基團(tuán)特定取代模式的依賴性，區(qū)別了以前報(bào)道為抗有絲分裂劑的查耳酮類化合物和MOMIPP。相反，大量類似于我們用MOMIPP處理時(shí)觀察到的胞內(nèi)空泡在用抗有絲分裂的查耳酮類化合物處理時(shí)并沒(méi)有出現(xiàn)。然而，我們發(fā)現(xiàn)用3,4,5 三甲氧基苯基團(tuán)更換MOMIPP的4吡啶時(shí)產(chǎn)生一種化合物。這與缺乏足夠容納量來(lái)改造4 吡啶基效果一致，同時(shí)也說(shuō)明先前發(fā)現(xiàn)的三甲吲哚查爾酮的細(xì)胞毒性作用〔14〕可能不源于methuosis。一個(gè)可能的例外在一份報(bào)告中被指出，報(bào)告稱一個(gè)被稱為“C2的〞查爾酮的衍生物可誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞以非凋亡的死亡機(jī)制死亡，其中涉及自噬泡的積累?，F(xiàn)在排除MOMIPP以與秋水仙堿和相關(guān)的查耳酮類似的方式結(jié)合微管蛋白的可能性還為時(shí)過(guò)早，但到目前為止，證據(jù)指向說(shuō)明在研究中所描述的該化合物以不同的機(jī)制來(lái)觸發(fā)異常胞吞胞吐，內(nèi)小體艙溶脹， 和非細(xì)胞凋亡的細(xì)胞死亡。MOMIPP的特定受體〔S〕在未來(lái)的進(jìn)一步鑒定將是十分重要的，主要有以下幾個(gè)原因：〔1〕確定的受體〔S〕的表達(dá)水平或活性可能有確定腫瘤的哪種類型對(duì)這種化合物最敏感的預(yù)測(cè)價(jià)值，〔2〕理解MOMIPP針對(duì)的蛋白質(zhì)的功能〔S〕可能有助于評(píng)估對(duì)正常細(xì)胞的潛在毒性，〔3〕對(duì)受體蛋白〔S〕的了解將有助于藥物結(jié)合位點(diǎn)的分析，借此可以提出修改意見(jiàn)，以提高藥效或特異性。除光活性疊氮化合物36，MOMIPP的核心結(jié)構(gòu)包含兩個(gè)其他的功能，可能會(huì)使其適合用于受體識(shí)別研究，從而有可能避開(kāi)引入一個(gè)光活性疊氮化合物的需要。MOMIPP的核心支架是偽芳酮的〔由于一方包含雙乙烯基取代酰胺，而另一個(gè)包含一個(gè)4 吡啶〕，并可能會(huì)表現(xiàn)出與二苯甲酮類似的光激發(fā)化學(xué)性質(zhì)。第二個(gè)可能使其適合受體識(shí)別MOMIPP的核心結(jié)構(gòu)特征是其親電的α，β不飽和酮基，其可能對(duì)親核受體殘基的共價(jià)改造〔如半胱氨酸〕也有作用。這種可能性也正在進(jìn)一步研究。這個(gè)關(guān)鍵的發(fā)現(xiàn)提出了一種可能性，這種化合物的進(jìn)一步開(kāi)展可能會(huì)產(chǎn)生有用的治療藥物，它能用于治療那些對(duì)通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡起效的藥物有抗藥性的癌癥。初步研究說(shuō)明，MOMIPP誘發(fā)空泡的能力并不僅限于癌細(xì)胞〔圖5EH的〕。這就產(chǎn)生了可能性：一個(gè)用于對(duì)癌細(xì)胞選擇性影響的治療窗可能被建立。然而，類似溶解度問(wèn)題已經(jīng)在其他疏水性抗癌藥物〔如紫杉醇，喜樹(shù)堿〕遇到過(guò)，并已通過(guò)使用適當(dāng)?shù)妮o料〔44〕或新型納米顆?！?5，46〕或脂質(zhì)體〔47，48〕的方法解決。因此，當(dāng) MOMIPP對(duì)抗藥性癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性影響及其在體內(nèi)傳遞的可用途徑的范圍呈現(xiàn)時(shí)，我們認(rèn)為MOMIPP可以作為珍貴的原型用于進(jìn)一步臨床前測(cè)