【正文】 the means (177。MOMIPP對亞融合與融合的成纖維細胞的影響差異提供了一個可能的解釋，這意味著，以空泡為典型的內體販運的中斷可能在不分裂的細胞中比在正常增殖的細胞中具有相對較好的耐受性。在所有其他細胞測試實驗中，到24小時10μMMOMIPP明顯誘導成纖維細胞空泡化〔圖5G〕。為了確定對腫瘤細胞造成最大限度毒性作用的濃度的MOMIPP是否也會對正常細胞產生毒性，我們用10μMMOMIPP處理人類乳腺上皮細胞〔HMEC〕。 SD from three separate cultures.Figure 3. Comparison of the abilities of MOMIPP and MIPP to induce the morphological hallmarks of methuosis. One day after plating, U251 GBM cells were treated with MOMIPP or MIPP at final concentrations of (A) or 10 μM (B). Controls received an equivalent volume of vehicle (DMSO). Cells were observed by phase contrast microscopy on three sequential days after addition of the pounds, without changing the medium or replenishing the pounds. Methuosis is characterized by extensive accumulation of phaselucent cytoplasmic vacuoles, with eventual cell rounding and detachment from the substratum as viability Figure 4. Comparison of the abilities of MOMIPP and MIPP to inhibit survival of U251 GBM cells in colonyforming assays. (A) Cells were plated for colonyforming assays as described in the Experimental Section. One day after plating the cells, MOMIPP (●) or MIPP (■) was added to the medium at the indicated concentrations, and cells were maintained in the presence of the pounds for 48 h. Thereafter, the pounds were removed, and colonies 50 cells were counted after 2 weeks. Each point represents the mean (177。當細胞處理2天時，MOMIPP顯??然在減少細胞集落形成方面比MIPP有效〔圖4A〕。在用MOMIPP處理的組中細胞數量的減少以大規(guī)模早期細胞空泡的出現和底層非活性細胞的損傷的形式表現。分別添加每個化合物到指定的濃度，保持2天，并且在第一天后要補充原料。 (2) 5 N NaOH, 99%. Compound 26: 4acetylpyridine, piperidine, MeOH, reflux, 34%. Compound 27: 4acetylpyridine, piperidine, MeOH, reflux, 21%.化合物19〔MOMIPP〕與化合物2〔MIPP〕生物活性比擬上述研究確定化合物19是最有力誘導methuosis的化合物。C, 93%. Compound 23: methyl4(bromomethyl)benzoate, NaOH, TBAB, CH2Cl2, RT, 63%. Compound 24: (1) POCl3, DMF, 0 176。相關反響在溫和條件根底下〔碳酸氫鈉〕生產了酯24，而在5 N的氫氧化鈉條件下產生酸25。因此，一個新的路線即在引入吡啶基團〔方案2〕前官能化吡啶就產生了。我們在不同pKa值的多個基地進行了篩選，從K2CO3到Cs2CO3，以及乙胺，tetramethylguanidine，1,8 二氮雜雙環(huán)[]螺7烯〔DBU〕，氫化鈉。因此，我們做了一組在生理PH時增加極性的實驗，用來探討改變過的吲哚5位基團所帶來的影響。此外，甲基吲哚氮的化合物13與NaH/CH3I在二甲基甲酰胺〔DMF〕〔方案1D〕制造20時產生了一種化合物，它能誘發(fā)一些胞質空泡化，但只有溫和影響細胞活力〔見表1〕。假設其失去活性那么證實吡啶氮〔見表1〕的必要性。如表1所示，盡管他們在短期的增長/可行性實驗中細胞毒性不一致。C, 90%。元和正射類似物10和11，以及苯乙酮類似物9，均在誘導methuosis方面與MIPP相比相對無效。 〔2〕48小時時結束用3 〔4,5 二甲基2 基〕2,5 二苯基溴化四唑〔MTT〕法對細胞存活率評估，并在第一個24小時。因此，一種類似物的初始構成被合成，以用來研究調查吡啶氮的位置對生物活性的影響。我們首先從比擬MIPP和市售的幾個相關化合物〔圖1化合物38〕誘導methuosis的活性開始?；衔?被分配的縮寫是MIPP，即3 〔2 甲基1H吲哚3 基〕1 〔4 吡啶基〕2丙烯1。我們發(fā)現，化合物1幾個小時內在膠質瘤細胞引起廣泛空泡，48小時內造成細胞活力的重大損失。查耳酮由一個1,3 二苯基2 丙烯1框架組成，這種框架是黃酮類天然產物的前體組成。結果SARs由于我們開始尋求可能引發(fā)methuosis的 druglike小分子，我們注意到Kirchhausen和同事〔11〕寫的一個報告，他們描述了被稱為vacuolin1的分子及一些其他三嗪類化合物，這些化合物能夠抑制Ca2+依賴溶酶體胞吐。Methuosis本質特點在于GBM細胞，它是被激活的Ras和Rac GTP酶異位表達而觸發(fā)這種形式的細胞死亡的場所。在methuosis〔8，9〕，回收的減值和溶酶體導向販運macropinocytotic囊泡的作用把他們鎖定在中間階段，在此他們融合而逐步形成較大的液泡?！?，4〕此外，膠質母細胞瘤細胞通過提高他們修復DNA損傷的能力而獲得對烷化劑的抗藥性。介紹盡管在開展中國家針對特有的某些類型的癌癥細胞的調控途徑的治療藥物有了最新進展，許多腫瘤術后輔助治療的重要支柱仍然是輻射和DNA烷化劑。在此，我們描述了直接相關化合物庫的合成及構效關系，提供了深入了解兩個芳環(huán)系統(tǒng)的奉獻，并強調了一個強有力的衍生物，3 〔5 甲氧基2 甲基1H吲哚3 基〕1 〔4 吡啶基〕2丙烯1〔即，MOMIPP〕在微摩爾濃度這樣低的濃度下可誘導methuosis。最近，我們描述了1查耳酮化合物，3 〔2 甲基1H吲哚3 基〕1 〔4 吡啶基〕2丙烯1〔即，MIPP〕，它可以誘導methuosis在神經母細胞瘤和其他類型的癌細胞發(fā)生。因此，它可能可以作為一種能夠在癌癥中通過methuosis形式來促進細胞凋零的藥物原型，這種原理與傳統(tǒng)細胞死亡〔如細胞凋亡〕的機理不同?！?〕由于GBM細胞通常在海港抑癌基因的突變〔例如，PTEN，P53，PRB〕，他們是相對不敏感的凋亡刺激。〔6〕后者當膜皺褶〔偽足〕附上許多口袋狀細胞外液，并內化時形成。methuosis也是caspase獨立的，因為它不能被廣譜蛋白酶抑制劑如ZVADFMK阻止。在此，我們報告了相關化合物庫合成及構效關系〔SAR〕的研究從而導出〔1〕定義的主要特點，為誘導methuosis活動，〔2〕確定改進生物活性的衍生物以及開展一個可能適合在未來目標識別工作中用作光親探測器的疊狀類似物做準備。這種化合物的結構被描繪在圖1〔化合物1〕。〔1214 〕這促使我們疑心化合物1可能代表了一種新型的查耳酮，它可以通過誘導methuosis殺死癌細胞。它引起的空泡比化合物1引起的更大、更多。〔 10〕Figure 1. Structures of pounds 1 and 2, initially found to be active ind