6小議植物結(jié)構(gòu)培養(yǎng)褐變產(chǎn)生的原因及方案-閱讀頁
2024-09-25 18:39本頁面
【正文】 理方法如下：外植體經(jīng)流水沖洗后，在25℃的低溫下處理1224小時(shí)，再用升汞或70%酒精消毒，然后接種于只含有蔗糖的瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng)57天，使組織中的酚類物質(zhì)部分滲入培養(yǎng)基中。若仍有酚類物質(zhì)滲出，35天后再轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基23次，當(dāng)外植體的切口愈合后，酚類物質(zhì)減少，這樣可使外植體褐變減輕或完全被抑制。 培養(yǎng)基的成分與褐變程度有關(guān)，要考慮所選培養(yǎng)基的狀態(tài)和類型。徐振彪[1]在對玉米幼胚耐nacl愈傷組織的篩選表明，隨nacl濃度升高，褐變現(xiàn)象加重。培養(yǎng)基中添加1mg/lba+1mg/l2，4d時(shí)，愈傷組織淺黃疏松，增殖也快。 ，而使用硬度較高的自來水，褐變嚴(yán)重，甚至?xí)霈F(xiàn)褐變死亡[8]。 ，其表面呈黃白色，愈傷組織嚴(yán)重褐變[9]。 ，光照會(huì)提高ppo的活性，促進(jìn)多酚類物質(zhì)的氧化，從而加速被培養(yǎng)的組織褐變。因此，初期培養(yǎng)要在黑暗或弱光下進(jìn)行。在培養(yǎng)基中加入偏二亞硫酸鈉、l半胱氨酸、抗壞血酸、檸檬酸、二硫蘇糖醇等抗氧化劑都可以與氧化產(chǎn)物醌發(fā)生作用，使其重新還原為酚[12]。在水稻細(xì)胞的培養(yǎng)基中，添加植酸（pa），可防止褐變，pa分子中眾多的羥基產(chǎn)生抗氧化作用，使生色物質(zhì)的含量下降或pa與ppo分子中的cu2+結(jié)合，從而降低了其活力。 常用的吸附劑有活性炭和聚乙烯吡咯烷酮（pvp）。粉末狀的活性炭與顆粒狀的活性炭相比吸附性更強(qiáng)，一般在培養(yǎng)基中加入14g/l的活性炭。而聚乙烯吡咯烷酮（pvp）是酚類物質(zhì)的專一性吸附劑，在生化制備中常用作酚類物質(zhì)和細(xì)胞器的保護(hù)劑，可用于防止褐變[15]。在外植體接種12天后應(yīng)立即轉(zhuǎn)移到新鮮培養(yǎng)基中，能減輕酚類物質(zhì)對培養(yǎng)物的毒害作用，降低抑制作用，使外植體盡快分生，連續(xù)轉(zhuǎn)移56次，可基本解決外植體的褐變問
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