實驗七細菌的藥敏試驗及耐藥性檢測-閱讀頁
2024-08-24 05:48本頁面
【正文】 。原液以過濾法除菌，小量分裝使用，放20℃以下一般可保存三個月，如果置4℃只能保存一周。（3）試驗方法：1）排列試管：取無菌試管10~15支排列于試管架上，除第一管外，其余每管加入MH液體培養(yǎng)基1ml。3）細菌接種：將已準備好的菌液分別加入到上述各試驗管和對照管中，輕輕旋轉(zhuǎn)混勻。3．結(jié)果判斷及報告將試管拿出逐一對光觀察，凡無肉眼可見細菌生長的藥物最低濃度即為對待測菌的最低抑菌濃度（MIC）。，經(jīng)35℃培養(yǎng)過夜后，%的種入菌的最低藥物濃度即為最低殺菌濃度（MBC）。（2）抗菌藥物必須使用標準粉劑，不應(yīng)使用口服藥而影響其含量?？紤]到抗菌藥物的效力，不同藥物應(yīng)選擇不同的稀釋度。（4）結(jié)果應(yīng)在12~18h內(nèi)觀察，培養(yǎng)時間過長，被輕度抑制的部分細菌可能會重新生長，由于某些抗菌藥物不夠穩(wěn)定，時間長了其抗菌活性也會降低，甚至消失，從而使MIC增高。如果標準菌株的試驗結(jié)果超過或低于預(yù)期值一個稀釋度以上，不應(yīng)發(fā)出臨床報告，而應(yīng)找出差錯的原因。目前臨床的自動化或半自動化的藥敏試驗多采用與次類似的微量稀釋法。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)因多了一個由mecＡ基因編碼的青霉素結(jié)合蛋白（PBP2α）而對甲氧西林耐藥。當(dāng)其他PBPs被β－內(nèi)酰胺類抗生素抑制而不能發(fā)揮作用時，PBP2α可替代它們完成細菌細胞壁的合成，從而使細菌得以生存。因此，開展對MRSA的檢測，對于控制醫(yī)院內(nèi)感染的流行，指導(dǎo)臨床治療有著十分重要的意義。由于頭孢西丁和苯唑西林較甲氧西林穩(wěn)定，不易失活，通常使用這兩種藥物代替甲氧西林測定葡萄球菌的耐藥性。（3）結(jié)果判斷：頭孢西丁紙片法：金黃色葡萄球菌抑菌環(huán)≥20mm為敏感，≤19 mm為耐藥；凝固酶陰性葡萄球菌≥25 mm為敏感，≤24 mm為耐藥。（4）注意事項：1）頭孢西丁法結(jié)果觀察時應(yīng)使用反射光線。2）培養(yǎng)溫度應(yīng)為33~35℃，超過35℃耐藥的葡萄球菌可能被抑制不能生長而漏檢。自1983年德國首次發(fā)現(xiàn)報道以來，在全世界ESBLs檢出率呈現(xiàn)出不斷上升的趨勢。產(chǎn)生ESBLs的細菌主要是大腸埃希氏菌、肺炎克雷白氏菌、陰溝腸桿菌，其他如銅綠假單胞菌、變形桿菌屬及不動桿菌屬也可產(chǎn)生。（1）篩選試驗（紙片擴散法）1）藥物紙片：頭孢泊肟(Cefprozil,CPD)10μg/片 或頭孢他啶(Ceftazidime,CAZ) 30μg/片 或氨曲南(Aztreonam,ATM) 30μg/片 或頭孢噻肟(Cefotaxime,CTX) 30μg/片 或頭孢曲松(Ceftriaxone,CRO) 30μg/片） 2）方法：，稍干后，在瓊脂培養(yǎng)基表面貼上頭孢他啶等藥物紙片（同KB法），之后放35℃溫箱中培養(yǎng)1618h觀察結(jié)果。4）質(zhì)量控制：以大腸埃希菌ATCC25922做質(zhì)控，其抑菌環(huán)直徑應(yīng)符合CLSI質(zhì)控范圍。在同一平板上貼加克拉維酸紙片，可以抑制細菌β內(nèi)酰胺酶的作用，從而使頭孢他啶等抗菌藥物的抑菌環(huán)增大。4）結(jié)果判斷：與單紙片平皿對照，兩種藥物中的任何一種若加克拉維酸紙片較未加克拉維酸紙片抑菌環(huán)直徑≥5mm，即為ESBL陽性。肺炎克雷伯菌ATCC700603：頭孢他啶/卡拉維酸抑菌環(huán)直徑應(yīng)增大≥5mm；頭孢噻肟/克拉維酸抑菌環(huán)直徑應(yīng)增大≥3mm。B組為臨床使用的主要抗生素,尤其在醫(yī)院感染時使用的抗生素，可在下列情況下使用：①對A組同類抗生素耐藥；②標本來源不同時，如三代頭孢菌素使用于腦脊液中的腸桿菌，磺胺甲惡唑使用于尿道分離的細菌；③多種微生物感染；④多部位感染；⑤感染流行的控制；⑤對A組抗生素過敏、耐受或無反應(yīng)。U組僅用于尿道中分離的細菌，不作為尿道外分離菌的常規(guī)藥
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