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2024-08-23 09:38本頁面
【正文】 抗體都能結(jié)合到柱上，而 55%的雜蛋白可被洗脫掉，再用不同離子強(qiáng)度的洗脫劑洗下。高容量、高流速、化學(xué)穩(wěn)定的新型離子交換劑適宜單克隆抗體的大規(guī)模純化。 IgG與蛋白 A的結(jié)合與 pH有密切關(guān)系，鼠源性單克隆抗體在 ， IgG2b、 IgG3幾乎全部結(jié)合于蛋白 A柱上， IgG1稍差，用 緩沖液可洗脫 IgG2b， IgG3， IgG2a， 脫下 IgG1。 第三節(jié) 鼠源性單克隆抗體 的改進(jìn) ? 改造鼠源性單克隆抗體的目的：一是降低免疫原性；二是降低相對分子量，增加組織通透性。對鼠源性抗體的改造已有很多成果報道，見書中表 44，給出了改造后的單抗的類型和特性：有人 鼠嵌合抗體（人 IgC小鼠 IgV， 150000）、 改形抗體（將小鼠 CDRs替換為人 CDRs， 150000）、 Fab(完整 L鏈和 Fd， 50000）、 FV（ VH和 VL， 25000）、 單鏈抗體（ SCFV， VH多肽 VL， 27000）、 單域抗體（ VH或 VL， 12500）、 最小識別單位（ MRU）（ 一個 CDR， 2022）。它保持鼠源性單克隆抗體的抗原結(jié)合的特異性，但對人的免疫原性大幅下降了。 二、改形抗體 ? Ig分子中參與構(gòu)成抗原結(jié)合部位的區(qū)域是 H和 L鏈 V區(qū)中的互補(bǔ)性決定區(qū)（ CDR區(qū)），而不是整個可變區(qū)。如果用鼠源性單克隆抗體的 CDR序列替換人 Ig分子中 CDR序列，則可使人的 Ig分子具有鼠源性單克隆抗體的抗原結(jié)合特異性。這種改形抗體（ reshaping antibody）又稱 CDR移植抗體（ CDR grafting antibody）。 三、小分子抗體 ? 基因工程小分子抗體僅表達(dá)鼠源性單克隆抗體的 V區(qū)片段，其相對分子量僅為原抗體的 1/80~1/3?，F(xiàn)在研制的小分子抗體有以下幾種類型： ? （ 1） Fab抗體，由完整的輕鏈和重鏈（ VH和 CH1） 所組成。（ 3）單鏈抗體（ single chain antibody SCA 或 single chain FV,SCFV）， 由 VH和 VL通過一段連接肽（ linker） 連接而成的重組蛋白。（ 4）單域抗體，由 VH(VL)單個可變區(qū)組成的，只有抗體分子的 1/12，而且表面疏水性強(qiáng)，與抗原非特異結(jié)合能力也強(qiáng)。 四、雙功能抗體 ? 雙功能抗體就是雙特異性抗體（ biospecific antibody, BsAb）。 ? 化學(xué)交聯(lián)法 ? 生物學(xué)方法（雜種 雜交瘤）雜交瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞融合得到可分泌兩種親代抗體和雜種抗體的 雜種 雜交瘤細(xì)胞。 五、抗體融合蛋白 ? 類型有： （ 1）配基 配基型融合蛋白，如 CD4Fc?。（ 3）配基 FV型嵌合蛋白，如 CD4FVCD3。（ 5）酶 抗體型融合蛋白。 五、抗體融合蛋白 ? 構(gòu)建抗體融合蛋白的原則是：將第一個蛋白的終止密碼子刪除，再接上帶有終止密碼子的第二個蛋白基因，即可實現(xiàn)兩個基因共表達(dá)。關(guān)鍵是兩個蛋白間的接頭序列 linker， 一般說來3~5個氨基酸就可滿足大部分融合蛋白的正確折疊的要求。 第四節(jié) 基因工程抗體和抗體工程 ? 一、噬菌體抗體庫技術(shù)的基本方法 ? 獲得目的基因 ? 抗體庫技術(shù)的載體：現(xiàn)在普遍使用噬菌粒（ phagemid） 載體，其中的 pHEN1為新一代載體，轉(zhuǎn)化效率高，有利于提高庫容量。 ? 四、表達(dá)與鑒定：目的克隆經(jīng)過鑒定后，再導(dǎo)入感受態(tài)菌株，進(jìn)行可溶性表達(dá)，其產(chǎn)物用 western blot分析確定后，就完成了全過程。建庫的外源基因來自人外周血、骨髓或脾臟的淋巴細(xì)胞提取的 mRNA反轉(zhuǎn)錄形成的 cDNA擴(kuò)增，使用的通用引物采自多個人體，具有人的種屬普遍性。 ? 避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù) ? 可獲得高親和力的人源化抗體 ? 在噬菌體抗體庫中， VH和 VL基因的隨機(jī)重組模擬了體內(nèi)抗體親和力成熟過程，所用抗體基因又都是來自人體，因此產(chǎn)生的抗體必然都是高親和力的。除用于臨床診斷外，還能為探討發(fā)病機(jī)制提供有力的研究手段。用熒光抗體浸染含有抗原物質(zhì)的組織切片或細(xì)胞，熒光抗體與抗原集合，在熒光顯微鏡下成為可發(fā)光的可視物，從而達(dá)到診斷或定位的目的。 二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑 ? 免疫酶抗體診斷試劑 ? 免疫酶技術(shù)是用酶標(biāo)記抗體來檢測抗原的方法，本法分為免疫酶染色（組化法）和酶免疫測定（ EIA） 兩種類型。 ? （ 2）酶免疫測定用抗體診斷試劑：見書中介紹的幾種試劑，重點掌握酶免疫法的基本概念。 ? 放射免疫用抗體診斷試劑 三、導(dǎo)向診斷藥物 ? 放射免疫顯像定位技術(shù) 第六節(jié) 抗體治療藥物 ? 一、放射性核素標(biāo)記的抗體治療藥物 ? 二、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物 ? 三、毒素偶聯(lián)的抗體藥物
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