【正文】 e 菜單中選擇 Edit Panel，出現(xiàn) Edit Panel對(duì)話框 2．點(diǎn)擊 Panel 上的 Add， new panel 就出現(xiàn)在 Panel list 中，輸入 panel 名 3．選擇該 panel（變黑），點(diǎn)擊 Tube 上的 Add， Tube1就出現(xiàn)在 tube list 中，輸入 tube 名 BD FACSCalibur 中文培訓(xùn)手冊(cè) 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 17 4．選擇該 tube（變黑），在 label list 中為該管選擇參數(shù)名： 如： P1： FSC P2： SSC P3：小鼠 IgG1FITC P4：小鼠 IgG1PE P5： CD45PerCP P7：小鼠 IgG1APC（若 4色） 5．點(diǎn)擊 Tube 上的 Add， Tube2就出現(xiàn)在 tube list 中，輸入 tube 名（如： 3/8/45） 6．重復(fù)第 4步。 5． 8 實(shí)驗(yàn)練習(xí)：數(shù)據(jù)獲取 在此練習(xí)中，將獲取數(shù)據(jù)。 1．從 Acquire 菜單中選擇 Counter，出現(xiàn) Counter計(jì)數(shù)框。 BD FACSCalibur 中文培訓(xùn)手冊(cè) 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 18 3．使儀器處于 RUN狀態(tài)。 5．點(diǎn)擊 Acqusition Control窗口 中 Acquire 6．該管獲取完后，會(huì)出現(xiàn)“嘟”聲，然后插上下一管（在 Reagent Panel中也為第 二管） 7．重復(fù) 56步，直到 Reagent Panel中最后一管。 9．使儀器處于 Standby狀態(tài)。 5． 9 儲(chǔ)存、恢復(fù) 儀器設(shè)置 優(yōu)化后的儀器設(shè)置條件可儲(chǔ)存以備以后重新設(shè)置和打印。 5． 9． 1 儲(chǔ)存儀器設(shè)置 1．從 Cytometer菜單中選擇 Instrument Setting。 2．點(diǎn)擊 save，出現(xiàn)文件保存對(duì)話框，選擇文件目錄及文件名，點(diǎn)擊 save。 5． 9． 2 恢復(fù)儀器設(shè)置 1．從 Cytometer菜單中選擇 Instrument Setting。 2．點(diǎn)擊 open，出現(xiàn)文件打開對(duì)話框，選擇文件目錄及文件名，點(diǎn)擊 open。 5． 10 儲(chǔ)存實(shí)驗(yàn)?zāi)０逦募? 在 CellQuest中，您設(shè)置的含有圖、門、標(biāo)尺（ Marker）和統(tǒng)計(jì)的實(shí)驗(yàn)文件可以模板文件儲(chǔ)存，以后可打開進(jìn)行數(shù)據(jù)獲取和分析。 5． 11 實(shí)驗(yàn)練習(xí)：數(shù)據(jù)分析 在每管中增加第二、三、四色可增加獲得的信息并降低獲取的管數(shù)。若二色分析，則需 6管。當(dāng) CD45/SSC作圖時(shí)，淋巴細(xì)胞可與溶解的紅細(xì)胞、碎片、嗜堿粒細(xì)胞很好地區(qū)分開來。若想刪除 Region，需在 Gate菜單中Region List中才 能徹底刪除。 2. 使該點(diǎn)圖處于激活狀態(tài)，從 Status 菜單中選擇 Quadrant Stats（象限統(tǒng) 計(jì)）。 3．若需要，可編輯象限統(tǒng)計(jì)的內(nèi)容，從 Status 菜單中選擇 Edit Quadrant Stats。 2． 垂直或水平點(diǎn)擊鄰近的空白四邊形，點(diǎn)擊 OK，文件成 2頁。 5．使該點(diǎn)圖處于激活狀態(tài)，從 Status 菜單中選擇 Quadrant Stats（象 限統(tǒng)計(jì)）。 BD FACSCalibur 中文培訓(xùn)手冊(cè) 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 22 2． 在 Plot and Stats to Process框中選擇 ALL 在 Pause after each file increment 框中選擇 for seconds，輸入 5 選擇 Print after each file increment 選擇 Export Statistic—new file（選擇或創(chuàng)建目錄及文件名） 選擇 File increment ： 1 3．點(diǎn)擊 OK，從 Batch菜單中選擇 RUN，出現(xiàn) Batch Control框。 若 4色，從同型對(duì)照管的 FL1H/FL4H點(diǎn)圖上得出門內(nèi)細(xì)胞 %LL（左下象限）。 1．點(diǎn)擊點(diǎn)圖，從 Plot 菜單中選擇 Format dot plot，出現(xiàn)點(diǎn)圖對(duì)話框，選擇 No file，點(diǎn)擊 OK。 3．從 File 菜單選擇 Save as，輸入模板名，點(diǎn)擊 Save . 5． 11． 7 創(chuàng)建文具簿（ stationery pad） 實(shí)驗(yàn)文件可轉(zhuǎn)化為文具簿 ，可反復(fù)用作相同的文件。 3．在右下角選擇 stationery pad。 此時(shí)，文件圖標(biāo)變成文具簿圖標(biāo)，當(dāng)您打 開文具簿文件時(shí)，原文件不變，而生成一個(gè)備份。 1．從 Apple 菜單中選擇 Microsoft Excel，一張空白表格將出現(xiàn)。 3．選擇統(tǒng)計(jì)文件的目錄及文件名，并打開。 5．從 File 菜單選擇 Quit 5． 12 Regions 和 Gating（畫 門） Region是將某一群體細(xì)胞區(qū)分開以分析或分選。 5． 12． 1 設(shè)置 Region 1．選擇文件目錄及文件名 2．在工具板中選擇適當(dāng)形式的 Region，在 FSC/SSC點(diǎn)圖上將淋巴細(xì)胞圈上。 5． 12． 2 改變 Region 必須首先選擇 Region（在 Region邊界上任何處點(diǎn)擊），然后才能改。 重新定位 Region： 點(diǎn)擊并拖動(dòng) Region的邊界即可 旋轉(zhuǎn) Region： 先選擇 Region，然后從 Gate 菜單中選擇 Rotate Region，拖動(dòng) Region的柄點(diǎn)即可旋轉(zhuǎn)。 重新定位頂點(diǎn)： 改變多邊形 Region的一種方法。點(diǎn)擊并拖動(dòng) Region的頂點(diǎn)即可。 刪除 Region： 在點(diǎn)圖上選擇 Region，然后撳 DEL鍵或從 Edit 菜單中選擇 clear即可。 Region的復(fù)制、粘貼也從 Region List中進(jìn)行。 5． 12． 4 門 BD FACSCalibur 中文培訓(xùn)手冊(cè) 3585898611dcd89f17284c7e79f1eb6e Page 5 24 門由一個(gè)或多個(gè) Region組合而成。在 CellQuest 中，默認(rèn) G1=R1， G2=R2，但可以根據(jù)需要設(shè)定合適的門 。在熒光 圖上畫一Region，用該 Region在另一圖（常常是 FSC/SSC）上的位置。 2．激活 FSC/SSC點(diǎn)圖，從 Plot菜單上選擇 Format Dot Plot 3．在對(duì)話框中選擇 G4=R4，點(diǎn)擊 OK，可觀察在 FSC/SSC上 R4細(xì)胞所在位置。 4．從 Gate 菜單中選擇 Gate list，為 G1選擇黃色，關(guān)閉此對(duì)話框，可見淋巴細(xì)胞呈黃色。 1．在 FL3/SSC點(diǎn)圖上，在嗜堿粒細(xì)胞群上畫 R5，可見嗜堿粒細(xì)胞群呈紅色，即使 G5=R5的顏色是銹色，因?yàn)槭葔A粒細(xì)胞群落在 R1內(nèi)。 3．此時(shí) 在 FL3/SSC上在嗜堿粒細(xì)胞群顯示銹色。由以下 3種邏輯門。 R1 or R2（或 R1+R2）： 在 R1內(nèi)或 R2內(nèi)的細(xì)胞都滿足該門的要求 。 注意： 1. 限定邏輯門時(shí)，在 and 、 or、 region 之間需空格。 或用括號(hào)表示 Not R1 and R2：正確 （所有不在 R1且在 R2 內(nèi)的細(xì)胞） R1 and Not R2：正確 （所有不在 R2且在 R1 內(nèi)的細(xì)胞） R1 Not R2：錯(cuò)誤 Not （ R1 and R2）：正確 （所有在 R1和 R2 交集以外的細(xì)胞） R1 or R2 and R3：正確 （所有在 R2和 R3交集內(nèi)或在 R1 內(nèi)的細(xì)胞） （ R1 or R2） and R3：正確 （ 所有在 R1或 R2內(nèi)且在在 R3內(nèi)的細(xì)胞 ） R1 or G2 or Not R3 and R4：正確 （ 首先 not R3，然后 and R4，其次或 R1或 R2內(nèi)的細(xì)胞） （ R1 or G2 or Not R3） and R4：正確 （首先括號(hào)內(nèi)，然后 and R4） 3．在不同文件之間可拷貝 Region，但無法拷貝 Gate。 7．從 Plot菜單上選擇 Format Dot Plot，選擇 No gate，點(diǎn)擊 OK 8．從 Gate 菜單中選擇 Gate list，限定 G8=R4 and R6，回車，注意統(tǒng)計(jì)結(jié)果的改變 9．將 G8改為： R1 and Not （ R5 or R6 or R7）， 注意統(tǒng)計(jì)結(jié)果的改變。 9．從工具板中選擇直方圖，選擇文件，確認(rèn)選擇 Manual Scale（設(shè)置為 50） 10．選擇 FL2為參數(shù)，選擇 T lymphocyte Gate，點(diǎn)擊 OK 11．從工具板中選擇直方圖 Marker，畫 M1：陰性細(xì)胞；畫 M2：陽性細(xì)胞。