水樣的微生物檢測(cè)ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-27 08:45本頁(yè)面
【正文】 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中 ， 另取 1mL水樣注入到 9mL滅菌生理鹽水中 ， 混勻后吸取 1mL(即 )。 對(duì)已處理過(guò)的出廠自來(lái)水 ， 需經(jīng)常檢驗(yàn)或每天檢驗(yàn)一次的 ， 可直接種 5份 10mL雙料培養(yǎng)基 ， 每份接種 10mL水樣 。每遞增稀釋一次，換用 1支 1mL滅菌分度吸管。 1℃ 培養(yǎng)箱內(nèi) ， 培養(yǎng) 24177。 如有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者 ， 則按下列步驟進(jìn)行 。 1℃ 培養(yǎng)箱內(nèi) ， 培養(yǎng) 18～ 24h，觀察菌落形態(tài) ， 挑取符合下列特征的菌落： 深紫黑色 ， 具有金屬光澤的菌落 紫黑色 ， 不帶或略帶金屬光澤的菌落 淡紫紅色 ， 中心較深的菌落 做革蘭氏染色 ， 鏡檢和證實(shí)試驗(yàn) 。 1℃ 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h177。 ? 結(jié)果報(bào)告： ? 根據(jù)證實(shí)為總大腸菌群的管數(shù)，查 MPN檢索表。 ? 準(zhǔn)備工作： ? 1 濾膜滅菌：將濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，置于沸水浴中煮沸滅菌 3次，每次15min，前兩次煮沸后需更換水洗滌 2~3次，以除去殘留溶劑。 ? 過(guò)濾水樣 ? 用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙面向上，貼放在已滅菌的濾床上，固定好 濾器，將 100mL水樣注入濾器中，打開(kāi)濾器閥門(mén)，在 104Pa下抽濾 ? 培養(yǎng) ? 水樣濾完后，再抽氣約 5s，關(guān)上濾器閥門(mén)，取下濾器，用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上，濾膜截留細(xì)菌面向上，濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基完全貼緊，兩者間不得留有氣泡，然后將平皿倒置，放入 37℃ 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 24h177。 ? 經(jīng)革蘭氏染色為陰性無(wú)芽孢桿菌 ， 再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 ， 37℃ 培養(yǎng) 24h， 有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者 ，則判定總大腸菌群陽(yáng)性 。 ? 本法可同時(shí)檢測(cè)大腸埃希氏菌 。 ? 總大腸菌群乳糖發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性管 EC培養(yǎng)基， ℃ 培養(yǎng) 24h ? 不產(chǎn)氣 陰性 ? 產(chǎn)氣 轉(zhuǎn)接 EMB平板， ℃ 培養(yǎng) 18～ 24h 典型菌落，陽(yáng)性 ? 未經(jīng)氯化消毒的水，且僅檢耐熱大腸菌群，或水源水： ? 水樣 接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液， ℃ 培養(yǎng) 24h ? 不產(chǎn)氣 陰性 ? 產(chǎn)氣 EC培養(yǎng)基， ℃ 培養(yǎng) 24h，判斷方法同上面步驟 ? 幻燈片 35 ? 耐熱大腸菌群濾膜法： 是指用孔徑為 m的微孔濾膜過(guò)濾水樣 ，細(xì)菌被阻留在膜上 ， 將濾膜貼在添加乳糖的選擇性培養(yǎng)基上 ， ℃ 培養(yǎng) 24h， 能形成特征菌落以此來(lái)檢測(cè)水中耐熱大腸菌群的方法 ? 檢驗(yàn)步驟： ? 準(zhǔn)備工作：同總大腸菌群 ? 過(guò)濾水樣：同總大腸菌群 ? 培養(yǎng) ? 用滅菌鑷子移取濾膜于 MFC培養(yǎng)基上，放入℃ 恒溫箱內(nèi)培養(yǎng) 24h177。耐熱大腸菌群在此培養(yǎng)基上菌落為藍(lán)色，非耐熱大腸菌群菌落為灰色至奶油色。 2h，如產(chǎn)氣則證實(shí)為耐熱大腸菌群。 ? 檢驗(yàn)步驟： ? 總大腸菌群乳糖發(fā)酵試驗(yàn)陽(yáng)性管 EC－ MUG管中， ℃ 培養(yǎng)24h 366nm波長(zhǎng) 6W的紫外燈照射 ? 產(chǎn)生藍(lán)色熒光 陽(yáng)性 ? 計(jì)算 ECMUG的管數(shù)，查 MPN表 ? 耐熱大腸菌群 2 ? 濾膜法： ? 用濾膜法檢測(cè)水樣后，將總大腸菌群陽(yáng)性的濾膜在含有熒光底物的培養(yǎng)基上培養(yǎng)，能產(chǎn)生 β葡萄糖醛酸酶，分解熒光底物釋放出熒光產(chǎn)物，使菌落能夠在紫外光下產(chǎn)生特征性熒光。 將培養(yǎng)后的平板在暗處用 366nm波長(zhǎng) 6W的紫外燈照射，如果菌落邊緣或菌落背面有藍(lán)色熒光產(chǎn)生則表示水樣中含有大腸埃希氏菌。
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