核酸的生物合成ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-27 04:02本頁(yè)面
【正文】 模板 模板 DNA的 1條鏈 模板 DNA的 2條鏈 引物 不需要 需要 核對(duì)作用 無(wú)（堿基錯(cuò)配率較高） 有 第 1個(gè)產(chǎn)物 ATP或 GTP RNA引物， NTP 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物需加工 產(chǎn)物無(wú)需加工 忠實(shí)性 相對(duì)弱 高保真 起始？延伸？終止？ 此 RNA聚合酶特點(diǎn) : 模板特異性很高，它只識(shí)別病毒自身的 RNA。 催化 RNA復(fù)制的 RNA聚合酶，以 RNA為模板，故該酶又叫 RNA指導(dǎo)的 RNA聚合酶（ RNAdependent RNA Polymerase， RDRP ； RNA replicase） 。 帶（ +） RNA的病毒可直接進(jìn)行與病毒繁殖有關(guān)的蛋白質(zhì)合成。 2.（ ） RNA病毒： 含有復(fù)制酶，如狂犬病病毒， H1N1流感病毒 。 ） RNA病毒 ：含雙鏈 RNA和復(fù)制酶，如呼腸孤病毒。 RNA復(fù)制類(lèi)型 以病毒 RNA直接作為復(fù)制的模板； 以病毒 RNA為模板逆轉(zhuǎn)錄出 cDNA，然后再?gòu)腄NA轉(zhuǎn)錄出病毒 RNA。 （ 1975年獲 Nobel Prize） 前病毒學(xué)說(shuō)：致癌 RNA病毒的復(fù)制需經(jīng)過(guò)一個(gè) DNA中間體即前病毒 ， 此中間體可部分或全部整合到細(xì)胞 DNA中 ， 并隨細(xì)胞增殖而傳遞至子代細(xì)胞 ， 細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化就是由前病毒引起的 。 逆轉(zhuǎn)錄酶是一種多功能酶，兼有 3種酶活： RNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶活性 DNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶活性 核糖核酸酶 H活性 n1dATP n2dGTP n3dCTP n4dTTP + RNA template dAMPn1 dGMPn2 dCMPn3 dTMPn4 DNA DNA polymerase Primer, Zn 2+ + (n1+n2+n3+n4)PPi 逆轉(zhuǎn)錄 ： 以 RNA為模板在逆轉(zhuǎn)錄酶的催化下合成與其堿基互補(bǔ)的 DNA 的過(guò)程 。 逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程 需要引物 (tRNA) 兩次轉(zhuǎn)換模板 Primer binding site, PBS Poly purine tract, PPT 1 2 3 4/5 RNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶活性 核糖核酸酶 H活性 No 3 ? 5 ? proofreading 1 error per 20,000 faster rate of viral evolution 6 7 8 9/10 Long terminal repeat, LTR DNA指導(dǎo)的 DNA聚合酶活性 逆轉(zhuǎn)錄現(xiàn)象并不僅限于病毒 。但在一般的細(xì)胞中并無(wú)可覺(jué)察的逆轉(zhuǎn)錄酶活性 。 OVER 基因重組與 DNA“克隆 ” geic rebination and DNA clone 基因重組 (geic rebination) ：染色體DNA分子內(nèi)或分子間發(fā)生交換。 獲取同一拷貝的過(guò)程稱為 克隆化 (cloning)，即無(wú)性繁殖。 基因工程操作 工具酶： 限制性核酸內(nèi)切酶、 DNA聚合酶 Ⅰ 、 Taq DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶、 T4DNA連接酶、 堿性磷酸酶、 末端轉(zhuǎn)移酶 目的基因 基因載體： 質(zhì)粒 DNA、噬菌體 DNA、病毒 DNA 受體（宿主）細(xì)胞 基本過(guò)程： 目的基因獲取、重組、轉(zhuǎn)化（轉(zhuǎn)染）、篩選、表達(dá) 基因克隆四大要素 目的基因的獲取 1. 化學(xué)合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其產(chǎn)物的氨基酸序列 。 在細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)定性要高，保證重組體穩(wěn)定傳代而
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