【正文】 糖蛋白相似 ,維持細胞間的粘合， DCC 基因缺失、或失活導致細胞間 粘附的破壞是惡性轉(zhuǎn)移的重要條件。 四、抑癌基因的抗癌機制 PTEN是 1997年美國 3個研究小組先后在染色體10q23發(fā)現(xiàn)的一種具有 磷酸酶活性 的腫瘤抑制基因 。 PTEN是一個高度保守的基因，人、鼠和狗的 PTEN蛋白有 %同源性，表明其在細胞生命活動中起重要作用。誘導細胞凋亡和抑制細胞生長，從而抑制腫瘤的生長。 但有關(guān) PTEN還有很多未解決的問題，比如：生長因子特別是 TGFβ 通過怎樣的機制下調(diào) PTEN的表達；PTEN的失活與其他癌基因或抑癌基因的關(guān)系如何；PTEN介導的信號傳導通路中的下游靶分子還需進一步闡明等。 30％的胰腺癌有 DPC4純合性缺失， 22％有突變，提示 DPC4以作為一種候補腫瘤抑制基因， 與胰腺癌的發(fā)生有極密切的關(guān)系。 (二） DPC4一一種新的候補腫瘤抑制基因 推測 DPC4的功能可能是在 TGF－ β受體介導的信號轉(zhuǎn)導環(huán)路中作為一種轉(zhuǎn)錄因子，其基因缺失、突變導致細胞過度增殖與生長。 2 DPC4基因與腫瘤 胰腺癌 、結(jié)腸直腸癌 、 膽管癌、 肺癌、頭頸部鱗癌 (HNSCC) 、 乳腺癌細胞、卵巢癌細胞中均有該基因的缺失或突變。 可以用野生型DPC4取代突變型 DPC4或補償其缺失基因；亦可用反義技術(shù)抑制突變 DPC4的表達，還可針對 DPC4表達的蛋白產(chǎn)物，用藥物恢復 DPC4(TGF— β)的抑制效應(yīng)。 對于 DPC4研究的展望 FHIT于 1996年被發(fā)現(xiàn)定位于 抑制基因。 而且在直系同源的小鼠中 FHIT位點是有脆性的并且非常容易受到致癌物的損傷。因此現(xiàn)已基本明確 FHIT具有抑癌基因的功能。 FHIT的滅活可能發(fā)生在腫瘤 G1期的早期階段 ,并且與 G G3期腫瘤發(fā)展密切相關(guān)。 Pavelic等和 Krivak等分別證明異常的 FHIT基因是肺癌和晚期子宮頸癌的不良預后指標 。 抑癌基因 MEN1 位于 11q13 的抑癌基因 MEN1 (multiple endocrine neoplasia type 1) 的雜合性缺失及其突變導致的失活促使了 MEN1 型彌散性內(nèi)分泌的失調(diào)。 SMAD4 是候選的胰腺癌抑制基因 ,一些大腸癌中也檢出了 SMAD4 的突變 ,但發(fā)生率很低。 ㈣ 其他抑癌基因 p57 kip2 在人類定位于 11p15. 5 ,其蛋白可能不經(jīng)過 CDK活性調(diào)控的途徑來作用 ,但在橫紋肌肉瘤中 p57kip2沒有腫瘤抑制功能。將反義 caveolin1注入NIH3T3 細胞后 ,細胞呈現(xiàn)出不錨定的獨立生長特性 , 并在免疫缺失鼠體內(nèi)形成腫瘤 , 顯示過激的 p42/44MAP激酶級聯(lián)反應(yīng)。 LUCA15 是一個假定的腫瘤抑制基因 ,在 ras 轉(zhuǎn)化細胞中表達下調(diào) ,說明是通過改變 mRNA 水平來調(diào)控細胞增生的。 HSU17714 可能是大腸癌抑制基因。 有人根據(jù)大多數(shù)卵巢癌在 22q 存在缺失推測該處有一個腫瘤抑制基因。這些發(fā)現(xiàn)都對癌癥的研究有著重要意義。 例如在遺傳性非息肉性結(jié)腸癌綜合征 ， 病人的 DNA錯配修復基因發(fā)生缺失 。 而在上述病人錯配不能更正而可積累起來 ， 造成原癌基因或者腫瘤抑制基因的突變 ， 形成結(jié)腸癌 。微衛(wèi)星代表基因組中的不穩(wěn)定的區(qū)域，比非重復 DNA序列的突變頻率高得多。 這種不穩(wěn)定性具有重要意義 ： 不穩(wěn)定導致多態(tài)的等位基因，基因內(nèi)或基因附近簡單重復序列的長度改變，能改變這些基因的表達和功能，在人類許多遺傳疾病反應(yīng)出簡單重復序列的擴增。 微衛(wèi)星不穩(wěn)定的檢測方法 ⑴ 收集標本 ， 包括正常和病變組織； ⑵ 提取基因組 DNA； ⑶ 選取 MS標記的旁側(cè)序列合成特異性引物； ⑷ 用 PCR法擴增基因組 DNA； ⑸ 擴增產(chǎn)物在變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳分離，分析結(jié)果。 20世紀 90年代細胞分子生物學研究闡明，腫瘤是一類多步驟發(fā)生的，多基因突變所致的細胞克隆、演化性疾病。它們的突變導致了細胞周期失控，包括細胞周期啟動、運行和終止異常，使細胞進入以增殖過多，凋亡過少為主要形式的失控性生長。 第六節(jié) 腫瘤是一類細胞周期疾病 G1期 細胞對胞外信號作出的反應(yīng)是決定朝向分裂還是退出細胞周期而進入靜止期 (Go)。 失去調(diào)控的癌細胞傾向于保留在細胞周期中持續(xù)循環(huán)；一旦細胞通過 G1晚期限制點 ，將對胞外生長調(diào)控信號產(chǎn)生不應(yīng)期而代之以自律性程序，并帶著這些信息進入有絲分裂。細胞增生過程由 細胞周期來完成，細胞周期分 G1， S(DNA合成 )， G2和 M(有絲分裂 )四個 期，受細胞周期調(diào)控機制嚴格控制。研究發(fā)現(xiàn)細胞周期調(diào)控的 核心蛋白分子是 細胞周期素 cyclin， 周期素依賴性蛋白激酶 CDK和 CDK 的抑制性蛋白 CDKI。細胞調(diào)控有兩大機制，一是細胞 周期驅(qū)動機制；二是細胞周期監(jiān)控機制， 細胞周期監(jiān)控機制， 在細胞周期的許多時相點上存在 細胞周期 檢測點： DNA損傷檢測點、紡錘體檢測點、紡錘體極檢測點。細 胞周期監(jiān)測機制的發(fā)現(xiàn)，使人們認識到其在維持細胞基因組穩(wěn)定性中 的重要作用。細胞一旦發(fā)生 DNA損傷或復制錯誤，首先啟動損傷感應(yīng)機制，將 DNA損傷轉(zhuǎn)化成信號， 由信號傳導通路傳給生長停滯機制，使細胞停止生長，進而啟動 DNA修復 機制，修復損傷的 DNA。 這些監(jiān)控機制的破壞，將導致遺傳的不穩(wěn)定性， 它是所有癌前細胞和癌細胞的本質(zhì)特征。 將導致染色體 重排， 如基因缺失、 擴增 和 移位。 紡錘體極監(jiān)控機制的破壞： 則導致染色體組倍增 (ploidy)的改變。在有絲分裂早期，染色體的排列如果發(fā)生錯誤。 多種紡錘體損傷劑可激活紡錘體檢測點，例如：紫杉醇類抗腫瘤藥物，通過抑制染色體在赤道板的排列，導致細胞阻滯在有絲分裂后期開始之前，并隨后誘導細胞凋亡。 GFs與靶細胞表面的特異性 GFR結(jié)合 ， 啟動復雜而有許多胞質(zhì)和胞核蛋白質(zhì)參與的 信號轉(zhuǎn)導級聯(lián)反應(yīng) ，操縱細胞的各種生物學行為 ， 包括細胞增殖與分化 、細胞存活和細胞動力學與形態(tài)學的改變 。 此外 ， 腫瘤細胞還可以自分泌 GF影響基因的轉(zhuǎn)錄 ， 或破壞正常細胞基因表達的調(diào)控 。根據(jù) 它們作用的靶細胞及與它們作用有關(guān)的腫瘤類型，可以 分成 兩大類： （ 1）作用于上皮、內(nèi)皮和間葉細胞的生長因子，與實體 性腫瘤的形成有關(guān)； （ 2）作用于造血和淋巴細胞的生長因子，與血液及淋巴 系統(tǒng)惡性腫瘤的形成有關(guān)。） So s 激活 Ra s , 活化的 Ra s 將 信號傳導下去 , 主要下游途徑是 MA P K , 促進有絲分裂 .信號分子結(jié)合至膜受體( RT K ), 受體發(fā)生二聚化和磷酸化而激活 .激活的 RT K通過接合蛋白G rb 2 與 S o s 結(jié)合 , 形成信號復合體( RT K G rb 2 S o s).酶偶聯(lián)受體激活途徑 ( 受體酪氨酸激酶 )－例如 : 生長因子促進細胞增殖酶偶聯(lián)受體激活途徑 ( 受體酪氨酸激酶 )－例如 : 生長因子促進細胞增殖有絲分裂原 活化蛋白激酶 配體 →RPTK→adaptor→GEF→Ras→Raf（ MAPKKK） → MAPKK→MAPK→進入細胞核 →轉(zhuǎn)錄因子 →基因表達。導致 Ras自身的 GTP酶活性下降，使得 RasGTP 不能變成 RasGDP而始終處于 GTP結(jié)合的狀態(tài) (活化狀態(tài) )， 造成 RasRaf MAPK 通路過度激活，從而導致細胞的 過度增殖與腫瘤的發(fā)生。 參加細胞免疫的效應(yīng)細胞主要有 CD8+的細胞毒性 T細胞 (cytotoxic T lymphocyte， CTL)、 自然殺傷細胞 (NK)和巨噬細胞。 第八節(jié) 腫瘤發(fā)生是免疫監(jiān)視功能喪失的結(jié)果 發(fā)生了腫瘤轉(zhuǎn)化的細胞可以引起機體的免疫反應(yīng)。 ⒉ 腫瘤相關(guān)抗原： 既存在于腫瘤細胞也存在于某些 正常細胞 中 。 ②腫瘤分化抗原 ： 指正常細胞和腫瘤細胞都具有的與 某個方向分化有關(guān)的某些抗原。 CTL的保護作用在對抗病毒所致的腫瘤 (如 EBV引起的伯基特淋巴瘤和 HPV導致的腫瘤 )時特別明顯。 IL2主要以自分泌或旁分泌的方式，誘導特異性 CTL克隆增殖，殺傷腫瘤細胞。由 IL— 2激活后， NK細胞可以溶解多種人體腫瘤細胞，其中有些并不引起 T細胞的免疫反應(yīng)，因此 NK細胞是抗腫瘤免疫第一線的抵抗力量。 NK細胞 巨噬細胞在抗腫瘤反應(yīng)中與 T細胞協(xié)同作用 。 此外巨噬細胞的 Fc受體還可與腫瘤細胞表面的 IgG結(jié)合 ， 通過 ADCC殺傷腫瘤細胞 巨噬細胞 抗腫瘤免疫應(yīng)答 : 細胞免疫占主導地位；體液免疫起一定作用； NK細胞起一定作用 免疫監(jiān)視機制在抗腫瘤中的作用的最有力的證據(jù)，是在免疫缺陷病患者和接受免疫抑制治療的病人中惡性腫瘤的發(fā)病率明顯增加。惡性腫瘤患者隨著病程的發(fā)展和病情惡化每伴有免疫功能普遍下降，這在晚期患者尤為突出。但是大多數(shù)的惡性腫瘤發(fā)生于免疫機能正常的人群，這些腫瘤能逃脫免疫系統(tǒng)的監(jiān)視并破壞機體的免疫系統(tǒng)的機制還不完全清楚。 ③協(xié)同刺激分子及粘附分子表達下降。用重組腺病毒載體把 B71轉(zhuǎn)染給小鼠乳腺癌模型， 結(jié)果腫瘤生長明顯受抑，證實 B7協(xié)同刺激分子在腫瘤免疫 逃避中的作用。）、 TGF— β等都是一種潛在的免疫抑 制劑。某些黑色素瘤和肝細胞癌表達 Fas配體，可以與表達 Fas的 T細胞結(jié)合而使 CTL凋亡。 CD4+CD25+調(diào)節(jié)性 T細胞在免疫 耐受的許多方面都具有重要作用，因此，這類細胞在腫瘤中的作 用也受到關(guān)注，它可通過產(chǎn)生免疫抑制物（ IL10 、 TGF— β ） 等來抑制抗腫瘤免疫。 總結(jié) 正常細胞 DNA損 傷突變 環(huán)境因素 遺傳因素 修復 癌基因 激活 抑癌基因 失活 凋亡調(diào)控 基因異常 多克隆性增生 單克隆性增生 惡性腫瘤 20世紀 90年代以來，人們進入了多基因時代或癌基因蛋白網(wǎng)絡(luò)時代 (oncoproteins work era)， 已不再滿足于孤立地研究某些癌基因或抑癌基因，而是將其以蛋白組或基因家族的形式與細胞的生命活動聯(lián)系在一起，從而得以形成腫瘤多步驟發(fā)生、 DNA修復、細胞凋亡等重要理論；也更清楚地闡明了細胞周期啟動、驅(qū)動或細胞周期檢測點調(diào)控等重要機制。如此眾多的癌基因、抑癌基因的發(fā)現(xiàn)，其產(chǎn)物在細胞的不同部位參與細胞的多種生命活動，一時間使人們感到茫然，而同時更多的癌基因、抑癌基因仍在不斷地被發(fā)現(xiàn)和克隆。 在給美國國會的報告中明確指出， 在引起腫瘤發(fā)生的原因中有 8 0 ％來自 環(huán)境因素 ，這 份報告被廣泛接受，并對腫瘤流行病學的研究產(chǎn)生了重要的指導作用．十年來， 腫瘤病因的研究集中在環(huán)境因素方面， 忽略了遺傳因素以及遺傳一 環(huán)境因素的相互作用，由此產(chǎn)生的腫瘤預防策略亦就局限在改善環(huán)境上．然而這種預防策略并沒有產(chǎn)生所期待的結(jié)果， 并引發(fā)了一系列爭論．與此同時， 遺傳學領(lǐng)域逐漸認識到單純由 遺傳因素引起的腫瘤雖然對研究腫瘤的發(fā)生機制具有獨特意義， 但畢竟占 極少數(shù)（ 如視網(wǎng)膜母細胞瘤等） ， 看來大多數(shù)腫瘤是遺傳一 環(huán)境因素的相互作用的結(jié)果． 腫瘤的遺傳易感性 或 /和 環(huán)境因素相互作用 的研究引起了廣泛的 關(guān)注． 對高風險人群進行腫瘤預防的觀點逐漸在美國的腫瘤預防策略中占據(jù)了一定位置． 腫瘤遺傳易感性的研究包括 染色體的穩(wěn)定性， DN A修復， 癌基因和／ 或抗癌基因的結(jié)構(gòu)改變及其遺傳多態(tài)性，免疫監(jiān)護系統(tǒng)以 及藥物代謝酶系的遺傳多態(tài)現(xiàn)象等 ．通過對腫瘤遺傳易感性的研究，使人們對腫瘤病因有全面認識， 并不斷地修正我們的腫瘤預防策略以有效地降低腫瘤發(fā)病率． 單克隆起源學說 致癌因子引起體細胞基因突變，使正常體細胞轉(zhuǎn)化為前癌細胞，然后在一些促癌因素作用下，經(jīng)歷多基因多步驟突變后發(fā)展成為腫瘤細胞。 GFR基因擴增將導致每個細胞膜表面的受體數(shù)目增多，從而增加了細胞對配體依賴性轉(zhuǎn)化的敏感性，使之更易于增生。 Her2 or ERBB2 belongs to a